在體大鼠心臟采血方法實(shí)驗(yàn)研究

周 宇，李雨嘉，余思宇，馮云鵬，路 暢，王程程，王巧玲*

（沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽 110034）

在眾多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究中，采血是經(jīng)常運(yùn)用的采集標(biāo)本的方法。由于實(shí)驗(yàn)操作的要求，?？蛇x擇不同的采血方法。對(duì)于大型動(dòng)物來說，一般采用靜脈采血的方式;而小型動(dòng)物因靜脈較細(xì)、操作困難，一般以眼球或剪尾采血作為常用方式,但其缺點(diǎn)為采血量有限，故本實(shí)驗(yàn)不適用。如若大鼠采血后即被處死，可選用采血量大又簡(jiǎn)便的心臟直接抽血方式。綜合以上幾點(diǎn)，故以心臟采血方式作為本實(shí)驗(yàn)的操作手法。目前，針對(duì)大鼠心臟采血實(shí)驗(yàn)，研究者雖總結(jié)了一套比較成熟的方法[1]，但大鼠采血仍是困擾研究者的一項(xiàng)難題，操作過程中往往會(huì)出現(xiàn)因操作失敗而引起的溶血、采血量不足等情況，進(jìn)而可能導(dǎo)致心包積水的發(fā)生。因此，本實(shí)驗(yàn)采取心臟直接抽血法，操作簡(jiǎn)便，可避免出現(xiàn)血量不足的現(xiàn)象。真空采血法的應(yīng)用，因其具有無菌性、高質(zhì)量標(biāo)本的優(yōu)點(diǎn)，可有效提高采血成功率和血液標(biāo)本的質(zhì)量，為臨床醫(yī)學(xué)的研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

SD大鼠40只，雌雄不限，購自沈陽醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，體質(zhì)量280～300 g，飼養(yǎng)條件：室溫飼養(yǎng)，飲用自來水，食普通大鼠顆粒飼料。水合氯醛，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20151010；0.9%氯化鈉注射液，山東華魯制藥有限公司，批號(hào)E15122806;真空采血管，江蘇宇力醫(yī)療器械有限公司，批號(hào)20160303；一次性使用靜脈血樣采集針，山東奧賽特醫(yī)療器械有限公司，批號(hào)20150108；2 ml一次性注射器；75%醫(yī)用酒精；醫(yī)用無菌敷料；解剖臺(tái)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 麻醉

采用腹腔麻醉的方法。用雙氧水將水合氯醛粉末制成10%水合氯醛溶液，按3 ml/kg劑量用注射器抽取麻醉藥，從大鼠左下腹30°進(jìn)皮下，再成45°進(jìn)入腹腔，回抽注射器有阻力后進(jìn)行腹腔注射。待大鼠安靜下來，四肢酥軟，麻醉狀態(tài)達(dá)到最佳，其時(shí)效為3～5分鐘，可維持1小時(shí)左右。

1.2.2 固定

從籠內(nèi)取出大鼠時(shí)，右手抓住大鼠尾巴根部，左手拇指和食指捏住大鼠頸部皮膚，固定住大鼠頭部，右手將尾巴和右腿向上提起0.5～1 cm，這時(shí)腹壁張力最大，保證同伴順利進(jìn)行腹腔麻醉。待麻醉完畢，將大鼠仰臥位放置解剖臺(tái)，使身體完全展開，保證胸廓無扭曲現(xiàn)象并固定四肢。

1.4 采血方法

由于大鼠仰臥位時(shí)，心臟位于胸腔正中央，心尖稍偏向左側(cè)。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇胸部正中脫毛、酒精消毒、剪皮，暴露劍突和肋骨，然后用大剪刀剪開胸骨，完全暴露心臟。輸液針于心尖部插入，向心內(nèi)滴注生理鹽水，大鼠心率可達(dá)216～600次/分[2]，易引起出血，需固定住輸液針，防止其脫落。采血同時(shí)并進(jìn)行心臟灌流，保證足夠的血量。實(shí)驗(yàn)者持采血針?biāo)浇嵌却滔蛴倚氖?，另一端連接肝素化負(fù)壓采血管，利用負(fù)壓狀態(tài)使血液流入管內(nèi)，抽血較容易。進(jìn)針深度亦可影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，常為刺入心臟后感覺進(jìn)針無阻力即可抽血。

2 結(jié) 果

2.1 真空采血法優(yōu)勢(shì)分析

與傳統(tǒng)采血法相比，真空采血法優(yōu)勢(shì)如下[3-4]：血液采集過程密封性好，無菌程度高，一次性將血液標(biāo)本注入真空管內(nèi)，直接用于離心，省略掉注射器抽血后注入試管的環(huán)節(jié)，消除了致污因素;注射器采血不可避免的推拉對(duì)固定很不利，而采血針易于固定，可縮短抽血時(shí)間，避免因采血時(shí)間過長造成的溶血，血液檢測(cè)與分析結(jié)果的準(zhǔn)確性高。同時(shí)分離膠管可快速將血清與血漿分離，減少血液污染和細(xì)胞與血清間的相互干擾，維持血清中被測(cè)組分的穩(wěn)定。

2.2 不同采血方法對(duì)比結(jié)果

根據(jù)查閱文獻(xiàn)資料進(jìn)行分析，對(duì)大鼠多種采血方法進(jìn)行整理，最終選擇心臟采血方式。依據(jù)如表1。

2.3 采血量結(jié)果

依據(jù)對(duì)比結(jié)果，選用心臟采血法，采集大鼠血樣，為之后血清生化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)做輔助。兩組中SD大鼠血液量收集結(jié)果記錄如表2。

表1 不同采血方式對(duì)比結(jié)果

表2 SD大鼠血液采集量（ml）

3 討 論

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中，經(jīng)常對(duì)大鼠的血樣進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)通過右心室采集血液樣本為下一步進(jìn)行血液細(xì)胞分析及生化指標(biāo)檢測(cè)提供材料，通過血清生化檢測(cè)結(jié)果可得到實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的異同，判斷實(shí)驗(yàn)組注射磁性氧化石墨烯對(duì)大鼠是否有影響，從而明確氧化石墨烯的作用效果，為實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行打下基礎(chǔ)。

然而血樣指標(biāo)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于采血的成敗，若因采血操作技術(shù)不合格而導(dǎo)致血量不足，將會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察。而直接心臟采血法由于其操作簡(jiǎn)便，定位準(zhǔn)確，可降低實(shí)驗(yàn)操作失誤率。

由于大鼠個(gè)體較小，靜脈血管較細(xì)，肉眼直接穿刺失誤率較高，而其他的采血方法均有不同程度的缺點(diǎn)，若需得到更多血液，僅可采用挖眼或斷頸處死動(dòng)物的方式，且存在潛在的危害[5-7]。本實(shí)驗(yàn)中采用活體心臟采血的方式，符合國際上遵循的“3R”原則(Replacement替代,Reduction減少,Refinement優(yōu)化)，避免動(dòng)物資源的浪費(fèi)，對(duì)尊重實(shí)驗(yàn)動(dòng)物方面有積極的意義。

操作過程中，保證熟練操作采血技術(shù)，需注意以下幾點(diǎn)：（1）麻醉藥的劑量需適中，過量將會(huì)直接處死動(dòng)物，影響心臟灌流的進(jìn)行；過少可能會(huì)出現(xiàn)動(dòng)物麻醉不徹底，操作過程中覺醒的現(xiàn)象，影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)度；（2）大鼠固定需“直、正”：頭與身體保持平正；拉直頭部，使身體完全伸展開，避免由于體位不正，影響定位準(zhǔn)確性；（3）心臟穿刺采血時(shí)，應(yīng)注意掌握針頭進(jìn)針的深度,動(dòng)作迅速，防止凝血。（4）如需獲取血漿,注射器應(yīng)先用稀釋的肝素潤濕，以防止凝血的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)活體心臟采血的方法，由于其肉眼觀測(cè)方便，進(jìn)針較淺，穿刺極易成功，操作人員可經(jīng)短暫訓(xùn)練即可成功完成。因此，選擇此種方法可提高實(shí)驗(yàn)的精確性，避免個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

本文編輯：吳 衛(wèi)