內(nèi)生甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌對羅漢果斑枯病的拮抗作用

蔣 妮，宋利沙，蔣水元，馮世鑫，陳乾平，張占江，黃夕洋

(1.廣西藥用植物園，廣西 南寧 530023；2.廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所，廣西 桂林 541006)

【研究意義】羅漢果(Siraitiagrosvenorii)為葫蘆科多年生藤本植物，其干燥果實為我國傳統(tǒng)中藥，具有清熱止咳、化痰、潤肺及生津止渴等功效，被中國歷版藥典收載[1]。羅漢果還是我國特有的藥食同源植物，果實中含有高甜度且低熱量的羅漢果苷類，作為最佳的天然甜味劑得以廣泛應(yīng)用并大量出口到歐美和日本等地[2-3]。廣西是羅漢果的主產(chǎn)區(qū)及道地產(chǎn)區(qū)，全國80 %以上的羅漢果產(chǎn)自廣西北部山區(qū)[4-6]。2015年筆者首次報道[7]在桂林等主產(chǎn)區(qū)發(fā)生一種嚴重影響羅漢果生長的新病害——羅漢果斑枯病，經(jīng)鑒定病原菌為子囊菌(Stagonosporopsiscucurbitacearum)，惡霉靈、戊唑醇和咪鮮胺等化學藥劑對其病原菌絲的生長具有強抑制作用。目前，羅漢果斑枯病已成為羅漢果栽培過程中普遍發(fā)生、為害嚴重的一種病害。據(jù)農(nóng)戶反饋，化學藥劑能在一定程度上控制該病害的發(fā)生，但需逐年不斷增加用藥濃度和使用次數(shù)，部分嚴重發(fā)生的果園已開始出現(xiàn)抗藥性。甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)抗病譜廣、抗逆性強、對作物安全且環(huán)境友好，目前已成為植物病害生防菌家族的后起之秀，是近年來生防細菌研究的熱點之一[8]。bjq-a是分離自藥用植物的內(nèi)生細菌[9]，將其應(yīng)用于防控羅漢果斑枯病，對開展綠色、安全、有效、可控的羅漢果生產(chǎn)具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】國內(nèi)外大量研究表明，從土壤中分離的芽孢桿菌(Bacillus)、假單孢菌(Pseudomonas)和土壤放射桿菌(Agrobacterium)等拮抗細菌在植物病害生物防治中發(fā)揮了非常重要的作用[10-13]。但是，隨著土壤微生物資源的日趨枯竭，人們轉(zhuǎn)而從植物內(nèi)生菌或海洋中尋求新的拮抗資源[14-15]。已有研究表明，內(nèi)生細菌存在于植物根際和葉片周圍，生存環(huán)境穩(wěn)定，是其他病原菌的絕佳競爭者，利用內(nèi)生細菌是篩選拮抗細菌的一條重要途徑，而藥用植物作為一類具有特殊用途的植物，可從中獲取具有重要研究價值的菌株[16-17]。據(jù)報道，從人參中分離到的內(nèi)生細菌——甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌、從白術(shù)中分離到的拮枯草芽孢桿菌及從溫郁金中分離到的貝萊斯芽孢桿菌分別對人參銹腐病、白術(shù)根腐病菌和鐵皮石斛炭疽病菌等病原菌表現(xiàn)出較好的拮抗活性[16-18]。本研究課題組前期從廣西特色藥用植物山牽牛葉片中分離到一株活性極強的拮抗內(nèi)生細菌——甲基營養(yǎng)型酶芽孢桿菌菌株(bjq-a)，對山牽牛及三七的炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、三七根腐病菌(Fusaiumsolani)、三七黑斑病 菌(Alternariapanax)、廣西莪術(shù)葉斑病菌(Phomopsissp.)和苦玄參葉斑病 菌(Alternariasp.)等多種藥用植物病原菌均表現(xiàn)出較強的拮抗活性[9]。【本研究切入點】羅漢果斑枯病是羅漢果產(chǎn)區(qū)新發(fā)病害，迄今關(guān)于該病害的研究僅限于病原鑒定及化學藥劑室內(nèi)篩選，利用甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌對其進行防治的研究未見報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】開展bjq-a拮抗羅漢果斑枯病病原菌活性測定及初步防治試驗，為羅漢果斑枯病的綠色防控提供生防資源，為該病害生防菌劑的開發(fā)利用提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試bjq-a為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌，羅漢果斑枯病病原菌株為子囊菌真菌，均由本研究課題組分離純化后試管保藏在廣西藥用植物園植物病理研究室。

1.2 試驗方法

1.2.1 平板對峙試驗 從保存羅漢果斑枯病病原菌菌種的試管中挑取少量菌絲體移至PDA培養(yǎng)基，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，用無菌打孔器在菌落邊緣取直徑為6 mm 的菌餅，接種至新鮮PDA培養(yǎng)基中央，同時在距培養(yǎng)基中央2.5 cm處的3個角，點接培養(yǎng)好的bjq-a(即3個接種bjq-a處理)，以僅接種羅漢果斑枯病病原菌為對照1(CK1)。各接種bjq-a處理和CK1均設(shè)3個重復，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7、14、21和30 d時用十字交叉法測量病原菌菌落直徑，取平均值，計算病原菌抑菌率。

病原菌抑菌率(%)=(CK1菌落直徑-接種株bjq-a處理菌落直徑)/CK1菌落直徑×100

1.2.2 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌菌絲生長和形態(tài)影響試驗 bjq-a無菌發(fā)酵液的制備：將bjq-a在LBA培養(yǎng)基上劃線活化，挑取3個單菌落于內(nèi)裝100 mL LB的三角瓶中(容量為250 mL)，在28 ℃、180 r/min 條件下振蕩培養(yǎng)72 h。取出培養(yǎng)液，在10 000 r/min離心機上離心10 min，取上清液經(jīng)直徑為0.22 μm的微孔濾膜過濾即得bjq-a無菌發(fā)酵液。將羅漢果斑枯病病原菌株在PDA上活化5 d后，用直徑為6 mm的打孔器在菌落上打孔制成若干菌餅備用。將制備好的bjq-a無菌發(fā)酵液與加熱溶解后溫度降至40 ℃左右的PDA，按照表1所示比例快速混勻，倒入已滅菌的直徑為10 cm的平皿中，10 mL/皿，每個濃度5皿。待混合PDA冷卻凝固后，將羅漢果斑枯病病原菌菌餅接入各平皿中央(共5個bjq-a無菌發(fā)酵液處理)，以相同體積的無菌水與PDA混合作為對照2(CK2)。在28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14 d后，用十字交叉法測量各平皿中菌落的直徑，計算菌絲生長抑制率及半最大效應(yīng)濃度(EC50)。用經(jīng)滅菌的接種針分別從20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理和CK2的平皿中挑取少量菌絲，在倒置顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)，并于40倍物鏡下拍照記錄。

表1 bjq-a無菌發(fā)酵液及對照1的濃度Table 1 The concentration of bjq-a fermentation liquid and control 1

1.2.3 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌孢子萌發(fā)及形態(tài)影響試驗 參考殷曉敏[19]的方法，用無菌水將羅漢果斑枯病病原菌孢子配置為1×106CFU/mL的懸浮液，用此孢子懸浮液稀釋bjq-a發(fā)酵液，使發(fā)酵液最終濃度為 50.0 %、25.0 %、12.5 %、6.0 %和3.0 %，每處理3個重復。以無菌水與羅漢果斑枯病病原菌孢子懸浮液混合為對照3(CK3)。28 ℃保濕器中保濕培養(yǎng)24 h，取出顯微觀察病原菌孢子形態(tài)及萌發(fā)情況，計算孢子萌發(fā)率、抑制率和EC50。

1.2.4 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病離體抑制試驗 將羅漢果斑枯病病原菌在PDA上活化5 d后，用直徑為6 mm的打孔器在菌落邊緣處打孔制成菌餅備用。選擇新鮮、健康的羅漢果葉片洗凈晾干后，用無菌接種針將葉片刺出若干個傷口，形成一個直徑約6 mm的圓形接種點，每張葉片2個接種點。

將菌餅接種至傷口處，24 h后用小型噴瓶將20 % bjq-a無菌發(fā)酵液噴施到葉片的正反兩面，每張葉片噴10 mL，此后每隔24 h噴1次，共噴3次。對照4(CK4)葉片亦接種羅漢果斑枯病病原菌餅，每張葉片噴施10 mL無菌水。取噴施20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理及CK4各10張葉片，分別置于培養(yǎng)皿中，28 ℃恒溫保濕培養(yǎng)。于接種后48、72、96和168 h觀察發(fā)病情況，用十字交叉法測量各病斑直徑，取平均值，計算菌落抑制率。

平均病斑直徑=各病斑直徑之和/測量的病斑數(shù)

菌落抑菌率(%)=(CK4平均菌落直徑-噴施20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理平均菌落直徑) /CK4平均菌落直徑×100

1.2.5 bjq-a活性代謝產(chǎn)物分析 參考仇艷肖[20]的方法分別制備含幾丁質(zhì)、羧甲基纖維素鈉和酪蛋白的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中央移入直徑為6 mm 的bjq-26菌餅，28 ℃恒溫培養(yǎng)2 d，觀察有無透明圈產(chǎn)生，以檢測菌株是否含有幾丁質(zhì)酶、纖維素酶(β-1,4葡聚糖酶)和蛋白酶。參考宋利沙等[8]的方法，采用ELISA酶活試劑盒說明測定bjq-26發(fā)酵液原液中的蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶活性及吲哚乙酸含量。

1.3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2007進行整理，以SPSS 19.0進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 bjq-a菌株對羅漢果斑枯病病原菌的抑制作用

由表2可知，bjq-a與羅漢果斑枯病病原菌共同培養(yǎng)7 d時，羅漢果斑枯病病原菌的抑制率為44.16 %，顯著低于其他培養(yǎng)時間接種bjq-a處理(P<0.05，下同)；培養(yǎng)14 d時，接種bjq-a的羅漢果斑枯病病原菌受到抑制(圖1-A)，平均菌落直徑僅3.62 cm，病原菌抑制率最高，為63.8 %，而CK1的羅漢果斑枯病病原菌已長滿全皿(圖1-B)；培養(yǎng)21和30 d時，接種bjq-a的羅漢果斑枯病病原菌抑制率均為62.5 %，與培養(yǎng)14 d時的羅漢果斑枯病病原菌抑制率差異不顯著(P>0.05，下同)。后期觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)30 d后，接種bjq-a的羅漢果斑枯病病原菌菌絲漸變稀疏，顏色稍深，羅漢果斑枯病病原菌菌落直徑與培養(yǎng)14和21 d時差異不明顯，表明培養(yǎng)30 d后接種bjq-a的病原菌菌絲體已完全受到抑制不再生長。說明bjq-a與羅漢果斑枯病病原菌共同培養(yǎng)14 d對其病原菌菌絲的抑制作用最大，且共同培養(yǎng)30 d時仍保持與培養(yǎng)14 d相近的抑制效果。

表2 bjq-a對羅漢果斑枯病病原菌絲生長的抑制效果Table 2 Inhibitory activity of antagonistic bacteria bjq-a against S. cucurbitacearum hypha

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。
Note:Different lowercase letters in the same column represented significant difference(P<0.05). The same as below.

圖1 bjq-a 對S. cucurbitacearum的拮抗作用Fig.1 Antagonistic effects of strain bjq-a on the S. cucurbitacearum

2.2 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌菌絲生長及形態(tài)的影響

由表3可知，20 %和40 % bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌菌絲生長的抑制率分別為96.2 %和99.5 %，抑制效果較明顯。經(jīng)毒力測定，發(fā)酵液的EC50=3.65 %(毒力回歸方程Y=1.915X+4.006，相關(guān)系數(shù)r=0.8186)。從圖2-A可看出，在bjq-a無菌發(fā)酵液濃度為40 %的PDA平皿中，羅漢果斑枯病病原菌菌絲幾乎不能生長，抑制率達99.5 %，而CK2的PDA平皿中長滿羅漢果斑枯病病原菌菌絲。與2.1的試驗結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，PDA中bjq-a發(fā)酵液濃度>20 %時，羅漢果斑枯病病原菌菌絲的抑制率均>90.0 %，而2.1的試驗結(jié)果中羅漢果斑枯病病原菌的最高抑制率為63.8 %，說明bjq-a進行發(fā)酵培養(yǎng)可能更利于其抑菌活性物質(zhì)釋放。

在40×顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，在含bjq-a發(fā)酵液(濃度為40 %)的PDA培養(yǎng)基中，羅漢果斑枯病病原菌菌絲畸形、膨大為念珠狀(圖2-B)，而CK2的菌絲體細直，不彎曲(圖2-C)。

表3 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌菌絲生長的抑制效果Table 3 The Inhibitory activity of bjq-a fermentation liquid to the mycelial growth of S. cucurbitacearum

A ：40 % bjq-a發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌生長的抑制作用(左平皿為處理，右平皿為CK2)；B：40 % bjq-a發(fā)酵液處理的羅漢果斑枯病病原菌菌絲形態(tài)；C：CK2的羅漢果斑枯病病原菌菌絲形態(tài)A：Antagonistic effects of 40 % bjq-a fermentation on the S. cucurbitacearum(the left plate was the treatment and the right plate was the CK2)；B：Hyphae treated by 40 % bjq-a fermentation liquid；C：Hyphae treated by CK2圖2 bjq-a發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌菌絲生長及形態(tài)的影響Fig.2 Effects of fermentation liquid of bjq-a on the mycelial growth and morphology of S. cucurbitacearum

2.3 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌孢子萌發(fā)及形態(tài)的影響

由表4可知，50 % bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌孢子萌發(fā)的抑制率達90.5 %，隨著bjq-a無菌發(fā)酵液濃度的降低，抑制活性減弱。經(jīng)毒力測定，發(fā)酵液的EC50=6.85 %(毒力回歸方程Y=1.915X+4.006，相關(guān)系數(shù)r=0.9839)。從圖3-A和圖3-B可看出，CK3中正常的羅漢果斑枯病病原菌孢子形態(tài)為短桿棒狀，萌發(fā)的芽管細長，侵染活力強；而發(fā)酵液中的羅漢果斑枯病病原菌孢子膨大為原體積的數(shù)十倍，孢子不萌發(fā)，或萌發(fā)的芽管較短或彎曲，難以侵染。

表4 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌孢子萌發(fā)的抑制效果Table 4 Inhibitory activity of bjq-a fermentation liquid to the spore germination of S. cucurbitacearum

A：正常孢子及萌發(fā)狀(CK3)；B：畸形孢子及萌發(fā)狀A：Normal spore and germination(CK3)；B：Deformed spore and germination圖3 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌孢子形態(tài)及萌發(fā)的影響Fig.3 Effects of fermentation liquid of bjq-a on the spores morphology and germination of S. cucurbitacearum

表5 20 % bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病的防治效果Table 5 Biological control efficacy of 20 % bjq-a fermentation against S. cucurbitacearum on the S. grosvenorii leaves

A：接種48 h的CK4葉片；B：接種48 h、20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理的葉片；C：接種96 h的CK4葉片；D：接種96 h、20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理的葉片A：The leaves of CK4 were inoculated for 48 hours；B：The leaves inoculated with pathogen and treated by 20 % bjq-a fermentation for 48 hours；C：The leaves of CK4 were inoculated for 96 hours；D：The leaves inoculated with pathogen and treated by 20 % bjq-a fermentation for 48 hours圖4 接種羅漢果斑枯病病原菌48和96 h后20 % bjq-a發(fā)酵液對羅漢果斑枯病的防治效果Fig.4 The control effects of bjq-a fermentation against S. cucurbitacearum on Siraitia grosvenorii leaves 48 and 96 hours after inoculation

2.4 bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病的離體抑制效果

由表5可知，接種羅漢果斑枯病病原菌24 h時，20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理及CK4均未發(fā)?。唤臃N48 h時，CK4全部發(fā)病，20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理未發(fā)病(圖4-A和圖4-B)；接種72 h時，CK4全部發(fā)病，病斑平均直徑為2.50 cm，20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理有6個接種點發(fā)病，平均病斑直徑為0.40 cm，羅漢果斑枯病病原菌抑制率為84.0 %；接種96 h時，CK4病斑顏色加深至黃褐色，直徑為4.50 cm，20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理發(fā)病數(shù)有8個接種點發(fā)病，病斑直徑比接種72 h時略有擴大，為0.80 cm，但葉片尚為正常綠色(圖4-C和圖4-D)，羅漢果斑枯病病原菌抑制率為82.2 %；接種168 h時，CK4葉片整張發(fā)病，而20 % bjq-a無菌發(fā)酵液處理的病斑數(shù)及病斑直徑不再擴大。說明接種20 % bjq-a無菌發(fā)酵液168 h可有效防治羅漢果斑枯病。

2.5 bjq-a產(chǎn)酶能力及生長素活性的測定

圖5顯示，在含酪蛋白、羧甲基纖維素鈉和幾丁質(zhì)的培養(yǎng)基中，bjq-a菌落周圍均形成透明的水解圈，表明bjq-a菌株同時產(chǎn)生了蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶，能分解培養(yǎng)基中的相應(yīng)成分。表6結(jié)果表明，bjq-a發(fā)酵液原液中含有較高劑量的幾丁質(zhì)酶(56.70 pg/mL)、纖維素酶(62.68 pg/mL)、蛋白酶(14.34 pg/mL)及吲哚乙酸(3.62 pmol/L)，且均顯著高于對照。其中蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶是細孢壁的主要水解酶，推測這些水解酶即為bjq-a抗菌活性物質(zhì)的一部分，是其產(chǎn)生拮抗活性的機理之一；而吲哚乙酸是促進植物生長的有效生長激素，因此bjq-a發(fā)酵液除能抑制羅漢果斑枯病病原菌生長外還具有促進羅漢果生長的潛能。

A：酪蛋白培養(yǎng)基；B：羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基；C：幾丁質(zhì)酶培養(yǎng)基A：Casein medium；B：Sodium carboxymethylcellulose medium；C：Chitinase medium圖5 bjq-a的產(chǎn)酶能力Fig.5 The enzyme-producing ability of strain bjq-a

表6 bjq-a發(fā)酵液中的細孢壁水解酶酶活性Table 6 The activity of cell wall hydrolase and IAA in the bjq-a fermentation liquid

3 討 論

甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)是2010年Madhaiyan等[21]從水稻根系土中分離出的芽孢桿菌屬新種，由于具有良好的抗逆能力，在生防菌劑的開發(fā)利用中備受關(guān)注。目前報道的甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌大多從土壤、植物根系及海洋中分離得到，從植物內(nèi)生菌中分離得到的報道相對較少，而從藥用植物分離的目前也僅見對人參、夏枯草和山牽牛等的報道[9，16，22-24]。已有研究認為，植物內(nèi)生菌作為生防菌具有效果顯著、有效作用時間長、更易定殖等多種優(yōu)勢[25]。本研究應(yīng)用山牽牛內(nèi)生細菌——甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌bjq-a菌株防治羅漢果斑枯病，其發(fā)酵液對羅漢果斑枯病病原菌菌絲生長的抑制率達99.5 %，孢子萌發(fā)抑制率達90.5 %，對離體接種羅漢果斑枯病病原菌的抑制率達84.0 %，表現(xiàn)出較強的拮抗活性，且通過后期觀察發(fā)現(xiàn)防效穩(wěn)定，持效期長，可見藥用植物內(nèi)生甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌bjq-a菌株是一株具有較好應(yīng)用前景的生防菌株。

目前關(guān)于甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌對病原菌的作用機理的報道主要集中在競爭作用、拮抗作用和誘導抗性3個方面，其中報道較多的是拮抗作用，誘導抗性其次，競爭作用最少[24]。本研究中，菌株bjq-a與羅漢果斑枯病菌平皿進行對峙培養(yǎng)，對羅漢果斑枯病病原菌的抑制率為63.8 %，顯著低于40 % bjq-a發(fā)酵液對羅漢果斑枯病菌病原菌的抑制率99.5 %，從初步的研究結(jié)果來看，bjq-a的空間競爭優(yōu)勢不及拮抗作用顯著，而bjq-a是否具有誘導抗性將在下一步工作中開展相關(guān)研究。已有大量研究認為，甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌的拮抗作用主要是通過產(chǎn)生各種代謝產(chǎn)物來抑制甚至殺死病原菌，目前報道較多的代謝產(chǎn)物是抗菌肽、蛋白酶和纖維素酶等[24-26]。本研究通過相關(guān)試劑盒檢測bjq-a無菌發(fā)酵液中幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和蛋白酶的活性分別為56.70、62.68和14.34 pg/mL，均顯著高于空白對照。bjq-a發(fā)酵液中含有較高劑量的細孢壁水解酶類，推測這些水解酶即為抗菌活性物質(zhì)的一部分，與吳一晶等[27]報道的結(jié)果相似。Liu等[28]提取純化枯草芽孢桿菌B-916產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)，分離到一種新蛋白(Bacisubin)，發(fā)現(xiàn)其能使立枯絲核菌菌絲頂端腫大、破裂。本研究顯微觀察結(jié)果表明，在bjq-a無菌發(fā)酵液作用下羅漢果斑枯病病原菌菌絲和孢子都有不同程度的畸形膨大表現(xiàn)，但是否由此類新蛋白(Bacisubin)或其他代謝產(chǎn)物引起，還需進一步探究。近年來陸續(xù)有報道稱甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌具有很好的抑菌作用和促生活性[24-26]，如甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌LW-4和H34對煙草青枯病的防治效果分別達70.37 %和60.98 %，且能不同程度地促進煙株生長[29-30]；利用甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌N5制備的生物有機肥不僅可以有效防治番茄青枯病，防效達69.00 %，還可促進番茄生長及提高根系活力[31]等。本研究還發(fā)現(xiàn)，bjq-a發(fā)酵液中含有一定劑量能促進植物生長的吲哚乙酸，故推測bjq-a不僅具有抑菌活性，可能也有一定的促生作用。該發(fā)現(xiàn)為將生防菌bjq-a開發(fā)成防病促生的生防菌劑或者微生物菌肥提供參考依據(jù)。

4 結(jié) 論

源自藥用植物山牽牛的內(nèi)生細菌——甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌菌株bjq-a無菌發(fā)酵液對羅漢果斑枯病菌具有較強的拮抗作用，能使其病原菌絲及孢子畸形膨大，無菌發(fā)酵液中能檢測出蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶等多種細孢壁水解酶，是其產(chǎn)生拮抗作用的機理之一。因此，甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌菌株bjq-a在羅漢果斑枯病生物防治中具有潛在應(yīng)用價值。