狗皮膏抗炎鎮(zhèn)痛作用試驗研究

趙貴琴，李帆帆，李純剛，張燕，曾勇，孟憲麗

狗皮膏作為傳統(tǒng)黑膏藥制劑，為國家基本藥物，并收載于中國藥典。狗皮膏處方含有生川烏、生草烏、羌活、獨活、青風(fēng)藤、香加皮、防風(fēng)等29味中藥，具有祛風(fēng)散寒，活血止痛的功效，用于風(fēng)寒濕邪、氣血瘀滯所致的痹癥，癥見四肢麻木、腰腿酸痛、筋脈拘攣，或跌打損傷、閃腰岔氣、局部腫痛，或寒濕瘀滯所致的腕腹冷痛、行經(jīng)腹痛、寒濕帶下、積聚痞塊[1]。目前對狗皮膏的研究主要集中在制備工藝控制指標(biāo)[2]、基質(zhì)[3]、提取溶劑、提取工藝及劑型改進(jìn)[4]，而關(guān)于狗皮膏藥效學(xué)的研究尚未見報道。因此，我們對狗皮膏進(jìn)行了小鼠抗炎鎮(zhèn)痛試驗研究，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，體重18～22 g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，動物合格證號：SCXK（川）2008-24。

1.2 藥物

狗皮膏及基質(zhì)：由天全縣中醫(yī)醫(yī)院提供，參照2010年版中國藥典制備項[1]進(jìn)行制備，批號20100219；紅花油（五環(huán)牌）：廣東泰恩康制藥廠有限公司生產(chǎn)，批號100702。

1.3 實驗試劑

硫化鈉：天津市博迪化工有限公司，批號20090226（臨用前用75%乙醇配置成8%的溶液）；二甲苯：成都市科龍化工試劑廠，批號20091225；冰醋酸: 成都市科龍化工試劑廠，批號20100701；瓊脂: 成都市科龍化工試劑廠，批號20091110。

1.4 主要儀器

智能熱板測痛儀、打孔器（6mm）、計時器、電子天平。

2 方法

2.1 給藥方法

于給藥前24小時將小鼠背部用8%硫化鈉脫毛2×2 cm2，將小鼠隨機分為5組，即狗皮膏基質(zhì)組、狗皮膏大、中 、小 3個劑量組 、紅花油組，每組10只，各給藥組在小鼠背部脫毛部位敷藥。其中大、中、小劑量組分別按7.5 g.kg-1、5.0 g.kg-1、2.5 g.kg-1給藥，狗皮膏基質(zhì)組按7.5 g.kg-1給藥，紅花油組按0.2mL/只給藥。每天給藥6 h后去藥，于實驗前1 h再給藥一次。

2.2 抗炎試驗[5]

2.2.1 對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 昆明種小鼠50只，雄性，分組及給藥方法見“2.1”項下。連續(xù)用藥5天，末次給藥1 h后，各組動物右耳面涂二甲苯0.02mL致炎，30min后將小鼠脫頸椎處死，用直徑為6mm的打孔器分別在左右耳對稱處取圓形耳片，稱重，以左右耳的重量差異作為腫脹度，計算腫脹抑制率。

2.2.2 對瓊脂所致小鼠肉芽腫的影響 昆明種小鼠50只，雄性，分組及給藥方法見“2.1”項下。所有小鼠均在左側(cè)肋下皮下注射2%瓊脂0.2mL/只，并于第二天開始連續(xù)用藥6天，第7天將小鼠脫頸椎處死，小心剝離瓊脂肉芽塊，并稱濕重（g）。

2.3 鎮(zhèn)痛試驗[6]

2.3.1 對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗的影響 昆明種小鼠，雌性，給藥前 24 h背部脫毛后將小鼠置于恒溫?zé)岚迳?，溫度保持?55±0.5) ℃ 范圍，測痛閾2次，間隔時間5min，以平均值在 5～30s之間的小鼠為合格。篩選合格小鼠50只，分組及給藥方法見“2.1”項下。測定各鼠正常痛閾值后連續(xù)用藥5天，末次給藥 1 h、2 h、3 h、4 h時分別測各鼠痛閾值。

2.3.2 對小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實驗的影響 昆明種小鼠50只，雌雄各半，分組及給藥方法見“2.1”項下，連續(xù)用藥5天后，于末次給藥后1小時，每鼠腹腔注射0.7%冰醋酸0.2mL/只，并立即記時，觀察小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期（min）及15min內(nèi)扭體反應(yīng)的次數(shù)（以小鼠腹部凹陷，雙后肢伸展為扭體反應(yīng)指標(biāo)）。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)均以(x±s)表示，并采用spss 13.0進(jìn)行組間t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(見表1)

表1 對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

表1結(jié)果表明：狗皮膏大劑量組能夠抑制小鼠耳腫脹（P＜0.05），狗皮膏中、小劑量組同基質(zhì)組在統(tǒng)計上并無顯著性差異（P>0.05），但對小鼠耳腫脹的抑制率呈現(xiàn)一定的趨勢。提示狗皮膏對小鼠耳腫脹有一定的抑制作用。

3.2 對瓊脂所致小鼠肉芽腫的影響（見表2）

表2 對瓊脂所致小鼠肉芽腫的影響

表2結(jié)果表明：各給藥組與狗皮膏基質(zhì)組比較，狗皮膏大劑量組對小鼠肉芽腫具有一定的抑制作用

（P＜0.05）。

3.3 對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗的影響（見表3）

表3 對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗的影響

表3的結(jié)果表明：狗皮膏大劑量組在給藥2 h后，與基質(zhì)組比較具有顯著性差異（P＜0.05），狗皮膏中劑量組在給藥4 h與基質(zhì)組比較也有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），說明狗皮膏能提高小鼠痛閾值。

3.4 對小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實驗的影響（見表4）

表4 對小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實驗的影響

表4結(jié)果表明：狗皮膏大、中劑量組均能延長潛伏期（P＜0.05），且大劑量組在15min內(nèi)的扭體次數(shù)也明顯減少，說明狗皮膏具有較好的鎮(zhèn)痛作用。

4 討論

本研究所選擇的4個抗炎鎮(zhèn)痛試驗均為驗證藥物抗炎鎮(zhèn)痛作用的經(jīng)典試驗方法。本實驗結(jié)果表明，狗皮膏大劑量組對小鼠耳腫脹及肉芽腫具有一定的抑制作用，且能明顯提高小鼠痛閾值，延長潛伏期并減少扭體次數(shù)。因此，狗皮膏具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。這些結(jié)果為狗皮膏用于治療腰腿疼痛、局部腫痛及跌打損傷提供了藥理學(xué)實驗依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].中國醫(yī)藥科技出版社,2010,844.

[2]張金蓮,陳小榮.狗皮膏制備工藝控制指標(biāo)的研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,14(4):26.

[3]張金蓮,陳宇帆.狗皮膏基質(zhì)改進(jìn)的初步研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,14(3):26.

[4]高小春,韓建偉.狗皮膏的完善改進(jìn)研究概況[J].中國中醫(yī)藥咨訊,2009,1(6):38.

[5]李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].上?？萍汲霭嫔?1987.

[6]徐淑云.藥理實驗方法學(xué)(第三版)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001.