液液萃取-場(chǎng)放大進(jìn)樣-毛細(xì)管電泳非接觸式電導(dǎo)分離檢測(cè)醬油中的安賽蜜

陳湖水,江建坤,易 佳,謝天堯

(中山大學(xué)化學(xué)學(xué)院, 廣東 廣州 510275)

安賽蜜(acesulfame-K,簡(jiǎn)稱(chēng)AK糖)是食品中最常見(jiàn)的磺胺類(lèi)人工合成甜味劑,具有價(jià)格低廉和配制方便的特點(diǎn),因此在食品生產(chǎn)行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用[1,2]。近年來(lái),人工合成甜味劑的安全性越來(lái)越引起人們的重視,長(zhǎng)期過(guò)量食用磺胺類(lèi)人工合成甜味劑超標(biāo)的食品,會(huì)對(duì)人體的健康造成危害,特別是對(duì)代謝排毒能力較弱的老人、孕婦、小孩[3-5]。目前,一些歐盟國(guó)家對(duì)磺胺類(lèi)合成甜味劑的使用實(shí)行嚴(yán)格的用量限制及在一些特殊的食品中禁止使用磺胺類(lèi)合成甜味劑。我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了各種類(lèi)型食品中安賽蜜的最大使用量,其中調(diào)味品中的最大使用量為0.50 g/kg[6]。醬油作為一種常見(jiàn)的調(diào)味品,也普遍存在使用安賽蜜的情況。由于醬油具有十分復(fù)雜的基體,微量組分的安賽蜜與大量的無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)物共存,直接進(jìn)樣分析難以滿足測(cè)試的要求。因此,建立操作簡(jiǎn)單、快速靈敏的分離檢測(cè)新方法尚屬于一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的研究課題。

由于安賽蜜在醬油樣品中的含量較低,在實(shí)際樣品測(cè)定時(shí)存在基體嚴(yán)重干擾問(wèn)題,需采用對(duì)樣品進(jìn)行凈化、富集和濃縮的前處理方法。常用的樣品前處理技術(shù)包括固相萃取法(SPE)和液液萃取法(LLE)。對(duì)于檢測(cè)復(fù)雜基體食品樣品中安賽蜜的樣品前處理方法主要采用SPE法,例如,李健和劉寧[7]以中性氧化鋁柱為固相萃取柱,采用HPLC-UV對(duì)醬油中糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜3種人工合成甜味劑進(jìn)行分析檢測(cè);徐琴等[8]以分子印跡聚合物微粒為固相萃取吸附劑,結(jié)合HPLC-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定了泡菜中的安賽蜜。但對(duì)于采用LLE處理醬油樣品中安賽蜜則鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。針對(duì)不同分析方法,SPE和LLE各有其優(yōu)勢(shì)或不足。就本文分析方法而言,采用LLE較SPE有明顯優(yōu)勢(shì),避免了SPE處理后需要進(jìn)一步洗脫的步驟,從而簡(jiǎn)化了操作過(guò)程,節(jié)約了分析時(shí)間。

目前,安賽蜜的檢測(cè)方法主要包括分光光度法[9]、離子色譜法[10]、HPLC、HPLC-MS[11-14]和毛細(xì)管電泳法(CE)[15,16]。分光光度法需借助化學(xué)計(jì)量學(xué)方法作后續(xù)處理,比較復(fù)雜;離子色譜法存在重疊峰的問(wèn)題;HPLC是目前應(yīng)用最為廣泛的一種分析方法,但也存在操作復(fù)雜、分析成本高、色譜柱昂貴且容易污染的缺點(diǎn)。CE具有高效、分離速度快、樣品和試劑消耗少的特點(diǎn),是一種環(huán)境友好型的分析方法。電容耦合非接觸電導(dǎo)檢測(cè)(C4D)是新發(fā)展起來(lái)的一種CE檢測(cè)技術(shù)[17],由于C4D中電極不與溶液接觸,因而具有良好的適用性、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。場(chǎng)放大進(jìn)樣(FASI)是一種簡(jiǎn)單高效的毛細(xì)管電泳在線富集方法,富集因子可達(dá)數(shù)百以上,可以很好地解決常規(guī)CE在痕量分析中靈敏度不足的問(wèn)題[18,19]。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外對(duì)于FASI-CE-C4D在食品分析方面的應(yīng)用研究表明,FASI-CE-C4D具有靈敏度高、適用性廣、抗干擾能力強(qiáng)和重現(xiàn)性好的優(yōu)勢(shì),適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè),是食品分析中行之有效的檢測(cè)新技術(shù)[20-22]。

本文以醬油中安賽蜜的分離檢測(cè)為研究對(duì)象,開(kāi)發(fā)出一種快速高效的液液萃取樣品凈化處理技術(shù),消除醬油樣品中復(fù)雜基體對(duì)安賽蜜的測(cè)定干擾,結(jié)合FASI-CE-C4D對(duì)其進(jìn)行靈敏檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)對(duì)影響萃取效率和CE分離檢測(cè)的關(guān)鍵因素進(jìn)行了詳細(xì)的探討,包括萃取溶液種類(lèi)、樣品pH值、萃取體積和時(shí)間、CE分離和FASI條件等，為市售醬油樣品中安賽蜜的快速檢測(cè)提供了一種靈敏、簡(jiǎn)單和低成本的檢測(cè)新方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

CES2008毛細(xì)管電泳儀(實(shí)驗(yàn)室研制開(kāi)發(fā))由高壓電源、接觸式/非接觸式雙通道電導(dǎo)檢測(cè)器、毛細(xì)管電泳數(shù)據(jù)工作站等部件組成。石英毛細(xì)管柱(45 cm×50 μm,有效長(zhǎng)度為40 cm;河北永年光導(dǎo)纖維廠); KQ2200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司); H1650型電動(dòng)離心機(jī)(湖南湘儀公司); MTN-2800W氮吹濃縮裝置(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

冰乙酸、氫氧化鈉、乙酸乙酯、鹽酸(廣州化學(xué)試劑廠);安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品(色譜純,北京國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)試劑公司)。所用試劑除注明外均為分析純。水為超純水,由Millipore超純水機(jī)制備。

用超純水配制質(zhì)量濃度為500 mg/L的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于4 ℃冰箱儲(chǔ)存。實(shí)驗(yàn)時(shí),取適量安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用超純水配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

用超純水和冰乙酸直接配制20 mmol/L乙酸溶液作為電泳運(yùn)行液,現(xiàn)用現(xiàn)配。0.100 mol/L的鹽酸溶液經(jīng)標(biāo)定后使用(精確至0.001 mol/L)。

1.2 樣品前處理

醬油樣品(包括海天、李錦記、中邦、鳳球麥、東古、一滴香等不同品牌和規(guī)格)均采集于中山大學(xué)南校區(qū)超市。

移取1.0 mL市售醬油樣品并準(zhǔn)確稱(chēng)重(精確至0.000 1 g),置于100 mL容量瓶中,用超純水稀釋定容至刻度。取0.50 mL上述稀釋后的樣品,置于5 mL具塞塑料離心管中,加入0.100 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH值至1.7左右(通常加入150 μL經(jīng)標(biāo)定的0.100 mol/L HCl即可),搖勻。加入3.0 mL乙酸乙酯,先手動(dòng)振蕩離心管1 min,再于超聲池中超聲萃取3 min,靜置5 min,然后以5 000 r/min離心5 min,靜置5 min。取上層有機(jī)相500 μL至進(jìn)樣瓶中,于60 ℃氮?dú)饬髦写蹈?。吹干溶劑后的殘留物用適量超純水溶解,隨后進(jìn)行FASI-CE-C4D測(cè)定。

1.3 分析方法

毛細(xì)管在使用前,先將毛細(xì)管的兩端在超聲波清洗器中超聲清洗30 s以消除因端口黏附微粒所引起的毛細(xì)管堵塞,然后按照以下次序分別沖洗毛細(xì)管3 min:超純水→0.1 mol/L NaOH溶液→超純水→0.1 mol/L HNO3溶液→超純水→電泳運(yùn)行液。實(shí)驗(yàn)中,每2次進(jìn)樣分析之間僅需用新鮮的運(yùn)行液沖洗3 min,基線運(yùn)行時(shí)間為5 min。分析過(guò)程運(yùn)行10次后,需更換新鮮的電泳運(yùn)行液。分離電壓-12 kV,電動(dòng)進(jìn)樣-11 kV×8 s。非接觸式電導(dǎo)檢測(cè)器輸出的信號(hào)通過(guò)數(shù)據(jù)工作站采集到微機(jī)中進(jìn)行CE圖譜的記錄和分析。實(shí)驗(yàn)在室溫(25 ℃)、相對(duì)濕度≤70%的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行。

2 結(jié)果與討論

2.1 CE分離條件的選擇

選擇合適的電泳運(yùn)行液體系可以獲得較高的靈敏度和良好的分離度。安賽蜜在水溶液中以陰離子形式存在,因此采用負(fù)高壓分離模式,可以獲得良好的分離效果。但在負(fù)高壓模式中,電滲流的方向與陰離子的電泳方向相反,且電滲流的速度常大于陰離子的電泳速度。因此,電泳運(yùn)行液中常需加入電滲流抑制劑,如十六烷基溴化銨等。本課題組[15]前期已報(bào)道發(fā)現(xiàn),采用20 mmol/L乙酸溶液作為電泳運(yùn)行液(pH=3.2)時(shí),體系的電滲流極小可以忽略不計(jì),因而不需要添加其他的電滲流抑制劑。同時(shí),該體系具有基線平穩(wěn)、檢測(cè)靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。因此,本文采用20 mmol/L乙酸溶液作為電泳運(yùn)行液,分離電壓為-12 kV。

圖 1 安賽蜜經(jīng)(a)常規(guī)重力進(jìn)樣(5.0 mg/L)和(b)FASI(0.10 mg/L)的CE-C4D電泳譜圖Fig. 1 CE-C4D electropherograms of acesulfame-K by (a) normal hydrodynamic injection (5.0 mg/L) and (b) FASI (0.10 mg/L) C4D: capacitively coupled contactless conductivity detection; FASI: field-amplified sample injection.

2.2 場(chǎng)放大進(jìn)樣在線富集條件的選擇

CE在線富集技術(shù)中,場(chǎng)放大進(jìn)樣富集具有操作簡(jiǎn)單、富集效果好的優(yōu)點(diǎn)。FASI通過(guò)樣品直接溶于低電導(dǎo)背景值的基質(zhì)溶液中或是超純水中就可以簡(jiǎn)單實(shí)現(xiàn),這是由于毛細(xì)管管中充滿高電導(dǎo)的背景緩沖溶液,樣品溶解于低電導(dǎo)溶液中,在電動(dòng)進(jìn)樣時(shí),毛細(xì)管中的高電導(dǎo)與進(jìn)樣瓶中的低電導(dǎo)之間的差異使得進(jìn)樣端口區(qū)間上的電場(chǎng)強(qiáng)度遠(yuǎn)大于毛細(xì)管內(nèi)的電場(chǎng)強(qiáng)度,從而使樣品離子在高電場(chǎng)強(qiáng)度下快速進(jìn)入毛細(xì)管內(nèi)，并在端口界面上達(dá)到富集,從而得到電堆積效果,富集因子可達(dá)到100以上,進(jìn)而使檢測(cè)靈敏度大幅提高[19]。在場(chǎng)放大進(jìn)樣富集中,需要優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件主要有:進(jìn)樣介質(zhì)的組成、進(jìn)樣電壓和時(shí)間、進(jìn)樣前的水塞(water plug)。同樣,在前文[15]中已對(duì)FASI的條件作了優(yōu)化,本文也采用前文的參數(shù):進(jìn)樣介質(zhì)為超純水,進(jìn)樣電壓為-11 kV,進(jìn)樣時(shí)間8 s,重力進(jìn)樣5 s的水塞。在上述的實(shí)驗(yàn)條件下,測(cè)定了人工合成甜味劑安賽蜜的富集因子,結(jié)果表明:通過(guò)場(chǎng)放大進(jìn)樣的在線富集技術(shù),安賽蜜的檢測(cè)靈敏度與按常規(guī)進(jìn)樣方法相比,得到顯著提高(見(jiàn)圖1)。圖1a采用的是常規(guī)的重力進(jìn)樣,安賽蜜的進(jìn)樣含量是5.0 mg/L;圖1b采用的是FASI,進(jìn)樣含量是0.10 mg/L,經(jīng)計(jì)算其富集因子為600。應(yīng)指出的是,進(jìn)樣前的水塞并非為必需步驟,在滿足檢測(cè)靈敏度的前提下可以省略,從而簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟。

2.3 前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

對(duì)于含人工合成甜味劑安賽蜜的簡(jiǎn)單基體食品樣品(如飲料),可以直接用超純水稀釋至合適濃度后,用FASI-CE-C4D分析測(cè)定[15]。但是對(duì)于具有復(fù)雜基體的醬油樣品,其中含有的大量無(wú)機(jī)鹽(如NaCl,含量一般為18%),十分不利于FASI對(duì)微量安賽蜜的富集,嚴(yán)重時(shí),會(huì)使富集效應(yīng)消失。這是因?yàn)镕ASI在負(fù)高壓模式下,樣品中大量無(wú)機(jī)陰離子(如氯離子)與共存的安賽蜜陰離子在FASI過(guò)程中存在著競(jìng)爭(zhēng),結(jié)果使得微量組分的安賽蜜進(jìn)樣量很少,導(dǎo)致安賽蜜的場(chǎng)放大進(jìn)樣富集效果消失殆盡。因此,在FASI-CE-C4D分析前,對(duì)于醬油這種復(fù)雜基體樣品必須進(jìn)行“凈化”處理,以消除樣品中共存的大量無(wú)機(jī)鹽的基體干擾,安賽蜜陰離子的進(jìn)樣量在FASI過(guò)程中得到顯著增強(qiáng),進(jìn)而獲得很高的檢測(cè)靈敏度。樣品凈化處理的內(nèi)容主要由3個(gè)步驟組成:首先,將醬油樣品酸化,使以陰離子形式存在于水溶液中的安賽蜜轉(zhuǎn)化為中性分子,以利于轉(zhuǎn)入有機(jī)相中;其次,用有機(jī)萃取劑對(duì)酸化后的樣品進(jìn)行萃取,使安賽蜜完全轉(zhuǎn)移到有機(jī)相中,而無(wú)機(jī)鹽等則保留在原溶液中,實(shí)現(xiàn)復(fù)雜基體的去除;最后,將有機(jī)相蒸發(fā)除去,用超純水溶解殘留物后,再進(jìn)行FASI-CE-C4D測(cè)定。

以下將對(duì)樣品凈化前處理過(guò)程中萃取劑及用量、樣品溶液pH值、萃取方式和萃取時(shí)間、樣品蒸干和再溶解等條件進(jìn)行討論。

2.3.1萃取劑及其用量的選擇

以空白醬油樣品加入2.0 mg/L安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液作為測(cè)試樣品,采用不同的有機(jī)萃取溶劑,包括環(huán)己烷、乙醚、乙酸乙酯和氯仿,考察其對(duì)安賽蜜回收率的影響。結(jié)果表明:環(huán)己烷幾乎不能從水溶液中萃取安賽蜜;采用乙醚和氯仿時(shí)回收率低;而乙酸乙酯可以獲得滿意結(jié)果。所以本實(shí)驗(yàn)選乙酸乙酯作為萃取溶劑。

實(shí)驗(yàn)同時(shí)考察了乙酸乙酯的用量(1.0～5.0 mL)對(duì)回收率的影響。結(jié)果如圖2所示,當(dāng)乙酸乙酯的用量達(dá)到3.0 mL時(shí),安賽蜜的回收率可達(dá)到95%以上,進(jìn)一步加大萃取劑的用量,安賽蜜的回收率趨于穩(wěn)定。因此本實(shí)驗(yàn)乙酸乙酯的萃取量選用3.0 mL。

圖 2 萃取溶劑用量對(duì)安賽蜜回收率的影響(n=5)Fig. 2 Effect of the amount of extraction solution on the recovery of acesulfame-K (n=5)

2.3.2樣品溶液pH值的選擇

圖 3 醬油樣品酸化后的pH值對(duì)安賽蜜回收率的影響(n=5)Fig. 3 Effect of pH values of soy sauce samples after acidification on the recovery of acesulfame-K (n=5)

安賽蜜以鉀鹽的形式穩(wěn)定存在,其pKa值為2.0[15],因此在pH呈中性的水溶液介質(zhì)中,安賽蜜分子將電離成陰離子存在于樣品溶液中。在LLE過(guò)程中,存在安賽蜜在水相中的電離平衡,以及安賽蜜在乙酸乙酯有機(jī)相與水相之間的分配平衡。在這2個(gè)平衡中,分配平衡是主要因素,分配系數(shù)愈大則萃取率逾高。電離平衡是次要因素,但會(huì)影響萃取率。為了有效地抑制安賽蜜分子的電離,促使安賽蜜陰離子向中性分子轉(zhuǎn)化,從而有利于安賽蜜進(jìn)入有機(jī)相。因此,十分有必要對(duì)原始樣品進(jìn)行酸化處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,樣品如果未用鹽酸酸化處理,幾乎不能萃取安賽蜜;當(dāng)用鹽酸酸化樣品溶液的pH值至1.7左右時(shí),安賽蜜的萃取回收率可達(dá)95%以上(見(jiàn)圖3)。但進(jìn)一步酸化,pH值<1.3時(shí),回收率開(kāi)始降低,同時(shí)在色譜圖中會(huì)出現(xiàn)醬油樣品中其他同存組分的干擾電泳峰。因此,本實(shí)驗(yàn)中樣品溶液經(jīng)鹽酸酸化后的pH值設(shè)為1.7。

2.3.3萃取方法和萃取時(shí)間的選擇

實(shí)驗(yàn)分別采用手動(dòng)振蕩萃取和超聲振蕩萃取兩種方法對(duì)樣品進(jìn)行萃取。結(jié)果表明,手動(dòng)振蕩萃取與超聲振蕩萃取相結(jié)合,可以取得更好的萃取效果和更穩(wěn)定的回收率結(jié)果。這是因?yàn)槭謩?dòng)振蕩萃取可以使樣品溶液乳化,這樣在隨后的超聲振蕩萃取中可以取得更好的萃取效果。因此,本實(shí)驗(yàn)采用1 min手動(dòng)振蕩萃取與3 min超聲振蕩萃取相結(jié)合的萃取方式。

2.3.4靜置時(shí)間和離心時(shí)間的選擇

超聲振蕩萃取后,為使含有安賽蜜的有機(jī)相與原水溶液相良好分層,需進(jìn)行靜置和離心處理。實(shí)驗(yàn)中考察了靜置時(shí)間和離心時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明:5 min靜置時(shí)間和5 min的離心處理,可有效降低氯離子在測(cè)試溶液中的殘留量,故選為實(shí)驗(yàn)所用。

圖 4 醬油樣品經(jīng)凈化處理(a)前、(b)后的FASI-CE-C4D電泳譜圖Fig. 4 FASI-CE-C4D electropherograms of the soy sauce sample (a) before and (b) after clean-up procedure

2.3.5有機(jī)試劑的去除和殘留物再溶解

經(jīng)萃取和離心后,移取適量上層有機(jī)相溶液轉(zhuǎn)移至干凈的進(jìn)樣瓶中,在60 ℃的氮?dú)饬髦袑⑷軇]發(fā)至干,得到殘留物。殘留物用適量的超純水溶解后,進(jìn)行FASI-CE-C4D進(jìn)樣測(cè)定。

樣品經(jīng)上述凈化處理后,共存的大量無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)物基質(zhì)可以得到較好去除,醬油中的安賽蜜獲得了良好的分離檢測(cè)。圖4為含安賽蜜的醬油樣品在凈化處理前、后的FASI-CE-C4D電泳譜圖。由圖可知,凈化處理前因大量共存的無(wú)機(jī)鹽陰離子(即氯離子)與安賽蜜陰離子在FASI過(guò)程中存在著競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)樣,幾乎屏蔽了安賽蜜的進(jìn)樣,使得微量組分的安賽蜜進(jìn)樣量很少,結(jié)果檢測(cè)不到安賽蜜的電泳峰。在樣品凈化處理后,圖4a中極大的Cl-峰在圖4b中顯著降低,干擾物質(zhì)得到有效去除,少量殘留的Cl-已不再干擾安賽蜜的FASI富集效果,安賽蜜得以靈敏檢出。

2.4 醬油中其他共存組分的干擾情況

市售醬油中通常會(huì)含有一定量的其他食品添加劑,如防腐劑以及風(fēng)味劑等。因此,實(shí)驗(yàn)中著重考察了食品中常見(jiàn)的防腐劑(苯甲酸、山梨酸)、風(fēng)味劑(檸檬酸、蘋(píng)果酸)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果未檢測(cè)到苯甲酸、山梨酸的電泳峰,不干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這是因?yàn)楸郊姿?、山梨酸具有與電泳運(yùn)行液乙酸較接近的電離常數(shù)值而不能遷移至檢測(cè)器端,因此未能檢出。檸檬酸、蘋(píng)果酸的干擾在樣品凈化處理過(guò)程中已完全除去,不干擾安賽蜜的測(cè)定。

醬油樣品相對(duì)復(fù)雜,即使經(jīng)LLE處理后,也可能是多種物質(zhì)共存。由于以下3方面的原因,使得FASI-CE-C4D色譜圖并不復(fù)雜。①醬油樣品中部分組分在LLE處理過(guò)程中,保留在水相中而得以除去,未能進(jìn)入有機(jī)相。②在負(fù)高壓分離模式下,只有陰離子組分才能遷移至檢測(cè)器中被檢出,而陽(yáng)離子組分則不能被檢出。③由于采用的是乙酸電泳運(yùn)行液,對(duì)于那些小于乙酸電離常數(shù)值的陰離子,不能遷移至檢測(cè)器,也不能被檢出。那些稍大于乙酸電離常數(shù)值的陰離子,電泳峰的出峰時(shí)間較長(zhǎng)(10 min以上)而落在檢測(cè)窗口之外。因此其他與安賽蜜一起萃取轉(zhuǎn)移到測(cè)試溶液中的少量其他組分并不會(huì)全部顯現(xiàn)在電泳分離圖中。

2.5 方法學(xué)評(píng)價(jià)

用空白醬油樣品作為基體,配制安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.50～150 mg/kg)。對(duì)安賽蜜含量(x, mg/kg)與其峰面積(y)進(jìn)行線性回歸,方程為y=361.51x+26.68,線性相關(guān)系數(shù)為0.998 1。

在上述選定的實(shí)驗(yàn)條件下,對(duì)空白加標(biāo)醬油樣品作適當(dāng)稀釋后進(jìn)行樣品前處理和FASI-CE-C4D測(cè)定。醬油中安賽蜜的理論含量(x′, mg/kg)與實(shí)際測(cè)出含量(x, mg/kg)之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系:x=1.012 1x′-0.057 5,線性相關(guān)系數(shù)為0.999 1。上述線性方程的斜率和線性相關(guān)系數(shù)接近1,表明方法具有良好的測(cè)定準(zhǔn)確度。

以目標(biāo)物的峰高與背景噪聲的3倍和10倍信噪比(S/N)計(jì)算方法的檢出限和定量限,得出醬油樣品中安賽蜜的檢出限和定量限分別為0.15 mg/kg和0.48 mg/kg。為了進(jìn)一步消除待測(cè)樣品中殘余的基體干擾,可以采用標(biāo)準(zhǔn)加入法或其他定量方法[18]。本文實(shí)驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法。

為了考察方法的精密度,進(jìn)行了日內(nèi)(intra-day)和日間(inter-day)精密度測(cè)定。對(duì)含2.0 mg/kg安賽蜜的醬油樣品在同一日和不同日平行測(cè)定5次,結(jié)果表明,日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為6.1%和6.6%。表明該方法具有較高的靈敏度和較好的重復(fù)性,可以滿足醬油中安賽蜜的定量分析要求。

圖 5 空白醬油樣品和加標(biāo)醬油樣品凈化處理后的FASI-CE-C4D電泳譜圖Fig. 5 FASI-CE-C4D electropherograms of acesulfame-K in the blank and spiked soy sauce samples a. blank sample; b. spiked with 0.80 mg/kg acesulfame-K; c. spiked with 2.0 mg/kg acesulfame-K.

2.6 實(shí)際樣品測(cè)定

為進(jìn)一步評(píng)價(jià)本文方法的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值,將建立的方法用于6個(gè)不同品牌和規(guī)格醬油樣品中安賽蜜含量的測(cè)定(見(jiàn)表1)。結(jié)果表明,6個(gè)醬油樣品有3個(gè)檢測(cè)出安賽蜜,含量分別為230、161和189 mg/kg(均在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)允許的范圍內(nèi)); 3個(gè)醬油樣品未檢出安賽蜜,與產(chǎn)品的瓶簽標(biāo)注一致?？瞻揍u油樣品和加標(biāo)醬油樣品經(jīng)過(guò)樣品凈化預(yù)處理后的FASI-CE-C4D電泳譜圖見(jiàn)圖5。對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),加標(biāo)水平為2.0 mg/kg,加標(biāo)回收率為92.3%～108.1%。每個(gè)水平進(jìn)行5次平行試驗(yàn),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于8.0%。

表 1 6個(gè)醬油樣品中安賽蜜含量及加標(biāo)回收率(n=5)

a): the original soy sauce samples diluted 100 times. ND: not detected.

3 結(jié)論

采用場(chǎng)放大進(jìn)樣富集技術(shù)-毛細(xì)管電泳非接觸式電導(dǎo)檢測(cè)法,結(jié)合液液萃取樣品凈化處理技術(shù),對(duì)醬油樣品中人工合成甜味劑安賽蜜進(jìn)行了分離檢測(cè)。本文方法具有操作過(guò)程簡(jiǎn)單、靈敏度高、分析時(shí)間短、試劑消耗少的優(yōu)點(diǎn),是一種經(jīng)濟(jì)實(shí)用、環(huán)境友好的醬油中安賽蜜的分析方法,為復(fù)雜基體食品中安賽蜜的快速分析檢測(cè)提供了新途徑。