血清HSP70、NTN1、CRABP2聯(lián)合檢測診斷早期原發(fā)性支氣管肺癌的研究

杜 鵬

(長江航運(yùn)總醫(yī)院/武漢腦科醫(yī)院呼吸內(nèi)科,湖北武漢 430010)

原發(fā)性支氣管肺癌是一種起源于鰓裂囊腫的惡性腫瘤,1882年首次提及,自那時(shí)以來,原發(fā)性支氣管肺癌的診斷一直受到激烈的討論[1-2]。目前,沒有任何其他可見的原發(fā)病灶足以診斷原發(fā)性支氣管肺癌而所致診斷技能有限[3-5]。熱休克蛋白家族70(HSP70)涉及細(xì)胞周期控制和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[6]。HSP70及影響肺癌引起的炎癥因子的功能,并涉及細(xì)胞外基質(zhì)重塑的過程[7]。神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子(NTN1)在發(fā)育過程中參與軸突導(dǎo)向和細(xì)胞遷移[8]。YILDIRIM等[9]發(fā)現(xiàn)與健康對照組相比,晚期原發(fā)性支氣管肺癌血清中NTN1濃度升高,并且化療后NTN1濃度降低。細(xì)胞維甲酸結(jié)合蛋白2(CRABP2)參與類視黃醇信號傳導(dǎo)途徑,并且與循環(huán)的低密度脂蛋白膽固醇增加有關(guān)[10]。JUN等[11]發(fā)現(xiàn)血清CRABP2水平可能是肺癌中新的診斷和預(yù)后標(biāo)志物。本研究旨在探討血清中HSP70、 NTN1、CRABP2聯(lián)合檢測對早期原發(fā)性支氣管肺癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2019年1月本院收治的90例早期原發(fā)性支氣管肺癌患者為研究組,其中男64例,女26例；年齡29～83歲,平均(62.95±7.49)歲；TNM分期Ⅰ期61例,Ⅱ期29例。90例早期原發(fā)性支氣管肺癌患者均經(jīng)本院病理科確證。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)抽取肘前靜脈血前接受任何治療的患者；(2)患有其他腫瘤的患者；(3)患有全身性自體免疫疾??；(4)嚴(yán)重心、肝、腎功能損害者；(5)長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者。同時(shí)選取同期本院體檢健康者90例作為對照組,其中男63例,女27例；年齡26～89歲,平均(64.20±8.34)歲。各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可納入此次分析。受試者均知情同意且獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法 采取90例早期原發(fā)性支氣管肺癌患者和90例體檢健康者的肘前靜脈血。進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。HSP70的ELISA試劑盒購自上海晶抗生物工程有限公司[貨號:JK-(a)-0150]。NTN1的ELISA試劑盒購自南京賽泓瑞生物科技有限公司(貨號:SEB827Ga02)。CRABP2的ELISA試劑盒購自上海圻明生物科技有限公司(貨號:mEA-H12283)。按照試劑盒說明書操作。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用RISM7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間比較采用t檢驗(yàn)。應(yīng)用受試者工作特征曲線(ROC曲線)的曲線下面積(AUC)分析血清中HSP70、 NTN1、CRABP2檢測早期原發(fā)性支氣管肺癌的臨床診斷價(jià)值。陽性臨界值為ROC曲線中靈敏度-(1-特異度)的最大值所對應(yīng)的數(shù)值。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組基礎(chǔ)臨床資料比較 早期原發(fā)性支氣管肺癌患者和體檢健康者在年齡、男性比例、吸煙史上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 兩組基礎(chǔ)臨床資料比較

注:-表示無數(shù)據(jù)。

2.2兩組血清中HSP70、NTN1、CRABP2的表達(dá)量比較 研究組血清中HSP70、 NTN1、CRABP2的表達(dá)量均高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。相比于對照組,研究組受試人員血清中HSP70的平均表達(dá)量增高2.57倍、NTN1的平均表達(dá)量增高2.81倍、CRABP2的平均表達(dá)量增高1.51倍,見表2。

表2 兩組血清中HSP70、NTN1、CRABP2的表達(dá)量比較

注:與對照組比較,*P<0.05。

2.3研究組各指標(biāo)的表達(dá)量與肺部感染、累及胸膜或心包膜、肺門淋巴結(jié)腫大的相關(guān)性 早期原發(fā)性支氣管肺癌患者血清中HSP70的表達(dá)量與肺部感染存在相關(guān)性(P<0.05),而與累及胸膜或心包膜和肺門淋巴結(jié)腫大無相關(guān)性(P>0.05)；血清中NTN1的表達(dá)量與累及胸膜或心包膜存在相關(guān)性(P<0.05),而與肺部感染和肺門淋巴結(jié)腫大無相關(guān)性(P>0.05)；血清中CRABP2的表達(dá)量與累及胸膜或心包膜存在相關(guān)性(P<0.05),而與肺部感染和肺門淋巴結(jié)腫大無相關(guān)性(P>0.05),見表3。

2.4兩組血清中HSP70、NTN1、CRABP2的ROC曲線、AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù) 為了評估血清中HSP70、NTN1、CRABP2在早期原發(fā)性支氣管肺癌患者和體檢健康者中的診斷價(jià)值,繪制90例早期原發(fā)性支氣管肺癌患者和90例體檢健康者的ROC曲線,見圖1、表4。

表3 研究組各指標(biāo)的表達(dá)量與肺部感染、累及胸膜或心包膜、肺門淋巴結(jié)腫大的相關(guān)性

注:1為NTN1;2為HSP70;3為CRABP2;4為參考線。

圖1兩組血清中HSP70、NTN1、CRABP2的ROC曲線

表4 兩組血清中HSP70、NTN1、CRABP2的AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù)

表5 血清中HSP70、NTN1、 CRABP2對早期原發(fā)性支氣管肺癌的聯(lián)合診斷(n)

2.5血清中HSP70、NTN1、CRABP2對早期原發(fā)性支氣管肺癌的聯(lián)合診斷 患有早期原發(fā)性支氣管肺癌的為真陽性,未患有早期原發(fā)性支氣管肺癌的為真陰性。以HSP70的陽性臨界值9.884 ng/mL、NTN1的陽性臨界值541.5 pg/mL、CRABP2的陽性臨界值29.96 ng/mL為診斷標(biāo)準(zhǔn),三者均滿足為聯(lián)合診斷陽性,反之則為聯(lián)合診斷陰性。血清中HSP70、NTN1、CRABP2聯(lián)合檢測對早期原發(fā)性支氣管肺癌的診斷的靈敏度為88.89%(80/90),特異度為90.00%(81/90),準(zhǔn)確度為89.44%(161/180),見表5。

3 討 論

原發(fā)性支氣管肺癌是一種常見的臨床疾病,也稱為肺癌,并且通常發(fā)生在老年患者身上[12-13]。咳嗽、胸痛和發(fā)燒是其主要臨床癥狀,對患者的生命構(gòu)成嚴(yán)重威脅。然而,支氣管癌的病因尚未得到醫(yī)學(xué)界的廣泛認(rèn)可,一些研究表明其發(fā)生與長期大量吸煙密切相關(guān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界近18%的癌癥患者是支氣管肺癌患者[14]。因此,早診早治尤為重要。本研究比較一般資料后通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測研究組和對照組血清中HSP70、NTN1、CRABP2的表達(dá)量并評價(jià)其聯(lián)合診斷早期原發(fā)性支氣管肺癌的價(jià)值,發(fā)現(xiàn)血清中HSP70、 NTN1、 CRABP2聯(lián)合檢測對早期原發(fā)性支氣管肺癌的診斷的靈敏度為88.89%,特異度為90.00%,準(zhǔn)確度為89.44%。

CRABP2是一種與視黃酸結(jié)合的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)結(jié)合蛋白,被認(rèn)為可以調(diào)節(jié)細(xì)胞中的視黃酸信號傳導(dǎo)[15]。視黃酸信號傳導(dǎo)的CRABP2增強(qiáng)通常被認(rèn)為是抗腫瘤發(fā)生活性增強(qiáng)。然而,有相互矛盾的報(bào)道[16],CRABP2在一般腫瘤發(fā)生中的確切作用需要進(jìn)一步研究。在本研究中,發(fā)現(xiàn)早期原發(fā)性支氣管肺癌患者血清中CRABP2的表達(dá)量高于體檢健康者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清中CRABP2單向診斷早期原發(fā)性支氣管肺癌患者和體檢健康者的靈敏度和特異度分別為87.00%和88.00%。最近的一項(xiàng)蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn),高水平的CRABP2是雌激素受體陰性乳腺腫瘤的不良預(yù)后指標(biāo)[17],另一項(xiàng)研究已將CRABP2鑒定為卵巢癌的亞型特異性生物標(biāo)志物[18]。該研究指出CRABP2是在漿液性卵巢癌標(biāo)本中上調(diào),CRABP2表達(dá)與腫瘤分級和癌癥分期呈正相關(guān)。提示CRABP2在原發(fā)性支氣管肺癌中與原發(fā)性支氣管肺癌腫瘤分級和癌癥分期相關(guān),暗示CRABP2除了作為診斷的潛在標(biāo)志物,還可作為潛在的預(yù)后標(biāo)志物。

NTN1是一種通過DCC、DSCA、UNC5H受體家族在胚胎發(fā)生過程中指導(dǎo)軸突遷移的蛋白質(zhì)[19]。在本研究中,發(fā)現(xiàn)早期原發(fā)性支氣管肺癌患者血清中NTN1的表達(dá)量高于體檢健康者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清中NTN1單向診斷早期原發(fā)性支氣管肺癌患者和體檢健康者的靈敏度和特異度均為93.00%。研究表明,NTN1通過調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、運(yùn)動、增殖和凋亡,不僅在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中起作用,而且在上皮組織如乳腺,胰腺和肺中發(fā)揮作用[20]。NTN1同時(shí)調(diào)節(jié)炎癥,細(xì)胞凋亡和血管生成,并且已經(jīng)顯示出增加許多癌組織中的表達(dá)。提示NTN1可作為早期原發(fā)性支氣管肺癌的潛在標(biāo)志。

HSP70在無應(yīng)激的健康細(xì)胞中以低水平或不可檢測的水平產(chǎn)生[21-22]。其表達(dá)通過絲裂原活化蛋白激酶/細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(MAPK/ERK)和應(yīng)激激活蛋白激酶(SAPK)信號級聯(lián)快速誘導(dǎo),在各種應(yīng)激下激活熱休克因子(HSFs)。在本研究中,發(fā)現(xiàn)早期原發(fā)性支氣管肺癌患者血清中HSP70的表達(dá)量高于體檢健康者(P<0.05)。血清中HSP70單向診斷早期原發(fā)性支氣管肺癌患者和體檢健康者的靈敏度和特異度分別為88.00%和90.00%。HSP70通過標(biāo)準(zhǔn)化未折疊和變性蛋白質(zhì)的濃度來恢復(fù)細(xì)胞蛋白質(zhì)組的平衡[23-25]。該因子參與先天和后天的免疫反應(yīng)。它可以通過TLR2/TLR4受體與抗原呈遞細(xì)胞(APS)相互作用并激活NK細(xì)胞。與TLR結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞因子的釋放增加,例如IL-1β、IL-6、IL-12、TNFα和GM-CSF,并激活CTL/CD8+應(yīng)答。然而,在各種癌細(xì)胞中經(jīng)常觀察到高水平的HSP70,其中它可增強(qiáng)細(xì)胞生長,抑制衰老,并賦予對應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抗性。HSP70表達(dá)水平在幾種癌癥中構(gòu)成診斷價(jià)值,其升高的濃度可與癌細(xì)胞的增殖增加,疾病的分級和臨床分期及較短的總體存活相關(guān)。

在本研究中,發(fā)現(xiàn)早期原發(fā)性支氣管肺癌患者血清中HSP70的表達(dá)量與肺部感染存在相關(guān)性(P<0.05)；血清中NTN1和CRABP2的表達(dá)量與累及胸膜或心包膜存在相關(guān)性(P<0.05)。HSP70可以通過上調(diào)熱休克因子1的選擇性磷酸化和通過富含AU的元件促進(jìn)外源感染微生物的增殖或復(fù)制[26]。NTN1有助于腦室下區(qū)的血管重塑,并促進(jìn)脫髓鞘后的祖細(xì)胞遷移[27]。CRABP2在腫瘤微環(huán)境中不同細(xì)胞類型之間的旁分泌中起重要作用[28]。因此,NTN1和CRABP2可能是通過對血管產(chǎn)生特異性影響使腫瘤加速生長,加重正常組織的阻塞癥狀,同時(shí)通過上調(diào)某些分泌蛋白質(zhì)附著于胸膜或心包膜,使其受到牽拉,從而參與腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。

4 結(jié) 論

血清中HSP70、NTN1、CRABP2的表達(dá)量檢測可作為早期原發(fā)性支氣管肺癌的潛在標(biāo)志。