GPC-3、CD147、CD10、CD138在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及臨床意義*

劉杜先,張杰東,方 媛,劉蘭俠

(東南大學(xué)附屬第二醫(yī)院/南京市第二醫(yī)院病理科,江蘇南京 210003)

肝癌系常見(jiàn)惡性腫瘤,起病隱匿,確診時(shí)患者多已處于中晚期,病死率高,按組織學(xué)類型可分為肝細(xì)胞肝癌(HCC)、膽管細(xì)胞肝癌及混合型肝癌,其中以HCC最為常見(jiàn),約占90%[1-2]。早期治療是改善HCC患者預(yù)后的關(guān)鍵,但中晚期HCC患者已錯(cuò)過(guò)根治手術(shù)最佳時(shí)機(jī),易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,多數(shù)患者預(yù)后較差[3]。磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)屬癌胚蛋白,可通過(guò)糖基磷脂酰肌醇與細(xì)胞膜連接,起到形態(tài)生成及控制細(xì)胞生長(zhǎng)分化的重要作用[4]。白細(xì)胞分化抗原147(CD147)屬高度糖基化蛋白,參與能量代謝、再生、發(fā)展等多種生理病理過(guò)程,何拓等[5]研究提示,腫瘤惡性程度越高,CD147表達(dá)越高。白細(xì)胞分化抗原10(CD10)屬金屬蛋白酶家族,腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生可溶性因子刺激間質(zhì)細(xì)胞分泌CD10,以起到促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的作用[6]。多配體蛋白聚糖-1(又名CD138)屬細(xì)胞表面跨膜蛋白多糖,參與細(xì)胞表面介導(dǎo)及細(xì)胞外基質(zhì)間的黏附作用,可提高細(xì)胞黏附穩(wěn)定性,促進(jìn)細(xì)胞增殖,維持細(xì)胞分化類型,并抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),與骨髓瘤、乳腺癌等多種惡性腫瘤表達(dá)缺失相關(guān)[7]。本研究旨在探究GPC-3、CD147、CD10、CD138在HCC中的表達(dá)及臨床意義,報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年1月至2018年12月本院行手術(shù)治療并經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)的HCC患者的肝癌組織標(biāo)本120例,按照標(biāo)本分化程度分為高分化組46例,中低分化組74例。其中男82例,女38例,年齡33～75歲,平均(56.21±11.12) 歲?；颊呔橥?術(shù)前未接受放化療。另收集120例癌旁組織(距癌灶邊緣2 cm)標(biāo)本。

1.2免疫組化檢測(cè) 經(jīng)10%甲醛溶液固定癌組織及癌旁組織標(biāo)本后,脫水、石蠟包埋連續(xù)切片,置入3%雙氧水中室溫孵育5 min,抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗3次,每次5 min；取出標(biāo)本置于檸檬酸緩沖液(pH=6)中高溫修復(fù)抗原,高壓鍋噴氣后加熱2 min后,調(diào)整為中火加熱2 min,關(guān)火悶10 min,置于冷水中待其冷卻至37 ℃；PBS緩沖液清洗3次,每次5 min,加入一抗,4 ℃冰箱中過(guò)夜,取出后PBS緩沖液清洗3次,每次5 min,加入通用型二抗,37 ℃水浴10 min,PBS緩沖液清洗3次,每次5 min,至3,3′-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽(DAB)顯色終止染色,蘇木素復(fù)染,乙醇由低濃度至高濃度逐漸脫水,加入二甲苯,常規(guī)封片。GPC-3一抗:鼠抗人單克隆抗體；CD147一抗:兔抗人多克隆抗體；CD10一抗:鼠抗人單克隆抗體；CD138一抗:鼠抗人單克隆抗體。以上試劑均購(gòu)自北京中杉生物試劑公司。癌旁組織可使用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定

1.3.1GPC-3陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒。CD147陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒。CD10陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒。CD138陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒。

1.3.2陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 在高倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野,觀察陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)及占比率,陰性(-):占比率<10%；弱陽(yáng)性(+):占比率10%～25%；中等陽(yáng)性(++):占比率25%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性(+++):占比率>50%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件處理數(shù)據(jù),GPC-3、CD147、CD10、CD138在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)陽(yáng)性率均以n(%)表示,組間比較行Wilcoxon秩和檢驗(yàn),均為雙側(cè)檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1GPC-3在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá) GPC-3主要在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)表達(dá),呈棕黃色,HCC GPC-3標(biāo)記示癌細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)而癌周組織弱陽(yáng)性,見(jiàn)圖1。120例肝癌組織中共100例表達(dá),陽(yáng)性率83.33%；120例癌旁組織中共28例表達(dá),陽(yáng)性率23.33%；GPC-3在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 GPC-3在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

2.2GPC-3與腫瘤分化程度的關(guān)系 高分化組GPC-3陽(yáng)性率(65.22%)顯著低于中低分化組(94.59%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 GPC-3與腫瘤分化程度的關(guān)系

2.3CD147在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá) CD147主要在細(xì)胞膜上表達(dá),少量表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),呈棕黃色,HCC CD147標(biāo)記示癌細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性而癌周組織陰性,見(jiàn)圖2。120例肝癌組織中共104例表達(dá),陽(yáng)性率86.67%；120例癌旁組織中共20例表達(dá),陽(yáng)性率16.67%；CD147在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 CD147在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

2.4CD147與腫瘤分化程度的關(guān)系 高分化組CD147陽(yáng)性率(78.26%)顯著低于中低分化組(91.89%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 CD147與腫瘤分化程度的關(guān)系

2.5CD10在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá) CD10主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá),呈棕黃色,瘤周肝組織CD10標(biāo)記灶性弱陽(yáng)性,見(jiàn)圖3；HCC CD10免疫組化標(biāo)記強(qiáng)陽(yáng)性,見(jiàn)圖4。120例肝癌組織中共86例表達(dá),陽(yáng)性率71.67%；120例癌旁組織中共32例表達(dá),陽(yáng)性率26.67%；CD10在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 CD10在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

2.6CD10與腫瘤分化程度的關(guān)系 高分化組CD10陽(yáng)性率(56.52%)顯著低于中低分化組(81.08%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表6。

2.7CD138在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá) CD138主要在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá),呈棕黃色,HCC CD138標(biāo)記灶性陽(yáng)性,見(jiàn)圖5；瘤周肝組織CD138標(biāo)記中等強(qiáng)度陽(yáng)性,見(jiàn)圖6。120例肝癌組織中共46例表達(dá),陽(yáng)性率38.33%；120例癌旁組織中共82例表達(dá),陽(yáng)性率68.33%；CD138在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著低于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表7。

表6 CD10與腫瘤分化程度的關(guān)系

表7 CD138在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

2.8CD138與腫瘤分化程度的關(guān)系 高分化組CD138陽(yáng)性率(69.57%)顯著高于中低分化組(18.92%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表8。

表8 CD138與腫瘤分化程度的關(guān)系

圖1 HCC GPC-3標(biāo)記(×200)

圖2 HCC CD147標(biāo)記(×100)

圖3 瘤周肝組織CD10標(biāo)記(×100)

圖4 HCC CD10標(biāo)記(×400)

圖5 HCC CD138標(biāo)記(×400)

圖6 瘤周肝組織CD138標(biāo)記(×400)

3 討 論

GPC-3屬硫酸類肝素糖蛋白聚糖家族成員,目前研究關(guān)于GPC-3分子功能尚不明確,有研究指出在人體胚胎期,胎盤(pán)及胎兒組織中GPC-3 mRNA含量豐富,胃腸道、肝、腎、肺組織中均有GPC-3高度表達(dá)(以肝臟表達(dá)最高)[8-9]；而在成人中,GPC-3僅在胎盤(pán)組織中高表達(dá),在卵巢、腎、心臟等組織中低水平表達(dá),正常肝臟組織中無(wú)GPC-3表達(dá)。MONTALBANO 等[10]研究發(fā)現(xiàn)GPC-3蛋白在肝癌組織中高表達(dá),非癌組織中低表達(dá)或沒(méi)有表達(dá),提示GPC-3與肝癌具一定關(guān)系。本研究中發(fā)現(xiàn)GPC-3在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織；同時(shí)隨肝癌組織分化程度降低,GPC-3陽(yáng)性率明顯升高。表明GPC-3在肝癌組織細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展中承擔(dān)著重要角色,王娟等[11]認(rèn)為這一作用在于GPC-3可通過(guò)調(diào)節(jié)Wnts信號(hào)途徑使Wnts基因高表達(dá),參與腫瘤的發(fā)生,同時(shí)還可以加速其特異Frizzled受體結(jié)合速率,促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤增殖。

CD147屬免疫球蛋白超家族成員,廣泛存在于多種細(xì)胞中,不僅參與胚胎發(fā)育、生精過(guò)程、淋巴細(xì)胞發(fā)育,還在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)化、心臟功能衰竭、肺組織損傷、病毒侵入細(xì)胞等做種生理病理過(guò)程中起重要作用[12-13]。病毒性肝炎及肝硬化是肝癌發(fā)生的主要病因,CD147已被證實(shí)與乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)致癌作用相關(guān)[14]。LIAN 等[15]研究提示,CD147可通過(guò)促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)刺激微環(huán)境細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)。FU等[16]研究發(fā)現(xiàn),CD147胞外Ⅰ型結(jié)構(gòu)域可與整合素α3β1及α6β1的整合素β1金屬離子依賴黏附位點(diǎn)結(jié)合,激活下游FAK信號(hào)途徑,從而起到刺激MMPs分泌,促進(jìn)腫瘤新生血管生長(zhǎng)的作用。本研究中CD147在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織；同時(shí)隨肝癌組織分化程度降低,CD147陽(yáng)性率明顯升高。表明CD147很可能在細(xì)胞由正常細(xì)胞變?yōu)榘┘?xì)胞的過(guò)程中起重要支點(diǎn)作用,是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲及血管生成的關(guān)鍵因子。

CD10屬金屬蛋白酶家族成員,廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周各種組織中,可降解具有生理活性的肽,調(diào)節(jié)生物活性肽局部濃度,抑制肽類遞質(zhì)與受體結(jié)合及信號(hào)傳遞,從而參與細(xì)胞生長(zhǎng)、成熟、分化、增殖、遷移等生理調(diào)節(jié)過(guò)程[17]。于靜等[18]研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌間質(zhì)細(xì)胞CD10表達(dá)陽(yáng)性的惡性腫瘤患者預(yù)后較差,腫瘤惡性程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高。CARLMCGRATH等[19]研究發(fā)現(xiàn),胃癌組織中間質(zhì)細(xì)胞CD10表達(dá)不僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),還與脈管侵犯正相關(guān),說(shuō)明胃癌組織間質(zhì)細(xì)胞可通過(guò)產(chǎn)生CD10降解細(xì)胞外基質(zhì),并刺激間質(zhì)細(xì)胞肌纖維母細(xì)胞化,從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。而肝臟及肝臟腫瘤中,CD10作為毛細(xì)膽管標(biāo)記物,呈特征性小管狀、分支狀著色,且未在其他腫瘤中發(fā)生此特征性著色。本研究中CD10在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織中；同時(shí)隨肝癌組織分化程度降低,CD10陽(yáng)性率明顯升高。進(jìn)一步證實(shí)CD147很可能參與正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變的過(guò)程,且隨著腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)展及后續(xù)遷移,CD10可通過(guò)影響毛細(xì)膽管上皮表達(dá)起到重要作用,維持腫瘤細(xì)胞增殖活性及發(fā)展動(dòng)力。

CD138屬整合素家族成員,起連接細(xì)胞表面介導(dǎo)與細(xì)胞外配體的作用,維持細(xì)胞黏附穩(wěn)定性,與細(xì)胞遷移密切相關(guān),細(xì)胞表面的CD138與周?chē)?xì)胞上的血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子等受體結(jié)合,可增強(qiáng)黏附作用。在機(jī)體多種惡性實(shí)體腫瘤形成過(guò)程中,均發(fā)現(xiàn)CD138蛋白在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)明顯缺失,從而導(dǎo)致細(xì)胞-基質(zhì)間黏附作用降低,細(xì)胞失去生長(zhǎng)接觸抑制功能,造成具有較強(qiáng)侵襲活性的腫瘤細(xì)胞大量增殖[20]。本研究中,CD138在肝癌組織中的陽(yáng)性率顯著低于癌旁組織；同時(shí)隨肝癌組織分化程度降低,CD138陽(yáng)性率明顯降低。表明CD138可抑制正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變,當(dāng)肝細(xì)胞表面CD138蛋白表達(dá)降低后,肝細(xì)胞與基質(zhì)間黏附性降低,可使肝細(xì)胞失控生長(zhǎng)并發(fā)生惡性病變,通過(guò)溶解基質(zhì)及誘導(dǎo)間質(zhì)血管生成參與腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。

但本研究?jī)H單純分析了GPC-3、CD147、CD10、CD138在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)及其腫瘤分化程度的關(guān)系,未分析其與肝癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系,及其鑒別診斷HCC的臨床價(jià)值等,還有待后續(xù)深入研究證實(shí)。

4 結(jié) 論

綜上所述,GPC-3、CD147、CD10、CD138在肝癌組織及癌旁組織中差異明顯,且在不同分化程度肝癌組織中亦有明顯差異,提示可將其作為腫瘤標(biāo)志物,用于HCC的臨床診斷及鑒別,指導(dǎo)治療方案的制定,更好地評(píng)估預(yù)后。