維生素C對單試劑氧化酶法檢測總膽固醇和三酰甘油的干擾分析*

李得娟，唐云芳，羅靜萍，鞏琳莉，李 紅，張 瑤，梁珊珊，賀 勇△

(1.四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗醫(yī)學(xué)科，四川成都 610041；2.青海省心腦血管病專科醫(yī)院檢驗科, 青海西寧 810000；3.云南省云縣人民醫(yī)院檢驗科，云南臨滄 675800；4.四川省成都市 武侯區(qū)第三人民醫(yī)院檢驗科，四川成都 610041；5.四川省成都市民用航空醫(yī)學(xué)中心檢驗科， 四川成都 610041；6.四川省廣元市旺蒼中醫(yī)院檢驗科，四川廣元 628200； 7.四川省仁壽縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，四川眉山 620500)

隨著人們生活水平的提高，動脈粥樣硬化的患病率逐年上升，高脂血癥作為動脈粥樣硬化的危險因素日益受到重視[1-3]，血清總膽固醇(CHOL)和三酰甘油(TG)是臨床普遍應(yīng)用的重要血脂常規(guī)檢測指標(biāo)，目前，國內(nèi)實(shí)驗室多采用單試劑氧化酶法檢測，最后顯色反應(yīng)均為偶聯(lián)終點(diǎn)比色法(Trinder反應(yīng))，該反應(yīng)易受到維生素C(VC)、膽紅素等還原性物質(zhì)的負(fù)干擾作用，造成檢測值降低[4-9]。而臨床對VC的應(yīng)用越來越廣泛[10-13]，大量地補(bǔ)充VC可使其在患者體內(nèi)大量蓄積，對臨床部分檢驗項目如CHOL、TG、葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)等檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，現(xiàn)在還沒有文獻(xiàn)報道關(guān)于VC對CHOL和TG檢測的干擾及多大干擾會使臨床檢測不可接受。本實(shí)驗針對不同濃度的VC干擾濃度對CHOL、TG檢測的干擾進(jìn)行了系列干擾試驗，分析了干擾值及干擾率與CHOL、TG濃度和VC干擾濃度的關(guān)系,臨床及實(shí)驗室分析提供相關(guān)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 收集四川大學(xué)華西醫(yī)院2018年10月住院患者新鮮血清40例，覆蓋CHOL、TG線性范圍(CHOL的線性范圍：0.10～20.70 mmol/L；TG的線性范圍:0.22～8.95 mmol/L)，將CHOL分成4個濃度梯度(0.10～<5.00、5.00～<10.00、10.00～<15.00、15.00～≤20.70 mmol/L)、TG分成4個濃度梯度(0.22～<2.00、2.00～<4.00、4.00～<6.00、6.00～≤8.95 mmol/L)進(jìn)行收集。因無法獲取高濃度CHOL標(biāo)本，所以CHOL只覆蓋到11.43 mmol/L。每個梯度收集10個標(biāo)本，然后制備成10個不同濃度的混合血清；VC標(biāo)準(zhǔn)液(10 mmol/L)：取VC(相對分子質(zhì)量為176.13)分析純品0.176 1 g，加純水稀釋至100 mL。所用儀器和試劑為羅氏c702全自動生化分析儀和配套的CHOL、TG試劑和校準(zhǔn)品，檢測方法為單試劑氧化酶法(GPO)，單試劑未含抗壞血酸鹽。

1.2樣品制備 如表1所示，配置系列干擾樣品管，基礎(chǔ)管中不加VC，7個干擾管中各加入不同濃度的VC。

表1 干擾試驗樣品制備

1.3CHIOL、TG樣本檢測方法 CHOL、TG室內(nèi)質(zhì)控檢測在控后檢測基礎(chǔ)管及干擾管濃度。干擾物加入濃度、干擾值及干擾率按照干擾實(shí)驗中公式計算：

干擾值(mmol/L)=干擾管測定值-基礎(chǔ)管測定值；

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS18.0進(jìn)行實(shí)驗數(shù)據(jù)處理和分析，計算干擾值與干擾率，根據(jù)國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T403-2012)《臨床生物化學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量指標(biāo)》總允許誤差(TEa)作為標(biāo)準(zhǔn)判斷相對偏差是否具有臨床意義，若相對偏差>1/2TEa則有臨床意義，若相對偏差≤1/2TEa則無臨床意義。

2 結(jié) 果

2.1VC對CHOL及TG的干擾 VC可降低CHOL、TG的測定值，干擾為負(fù)干擾；干擾值與VC干擾濃度呈正相關(guān)關(guān)系，隨著干擾濃度的增加，干擾值越大；雖然同一VC干擾濃度對CHOL、TG測定的干擾值基本相同，但干擾率與CHOL、TG濃度相關(guān)，同一VC干擾濃度下，隨著CHOL、TG濃度增加，干擾率越小。根據(jù)國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，CHOL檢測分析的TEa為9.0%，TG的TEa為14.0%，以1/2TEa(CHOL為4.5%，TG為7.0%)為判斷是否具有臨床意義的標(biāo)準(zhǔn)。見表2、3。

表2 TG干擾試驗結(jié)果

注：*表示檢測受干擾具有臨床意義；-表示無數(shù)據(jù)。

表3 CHOL干擾試驗結(jié)果

注：*表示檢測受干擾具有臨床意義；-表示無數(shù)據(jù)。

2.2VC干擾濃度與干擾值的相關(guān)關(guān)系 CHOL、TG檢測干擾值與VC干擾濃度呈正相關(guān)關(guān)系，隨著干擾濃度的增加，干擾值越大。相關(guān)關(guān)系方程式為TG：Y=-1.002 1X(r2=0.995 6);CHOL：Y=-0.997X-0.021 3(r2=0.997 6)，從相關(guān)方程式可以看出，VC干擾濃度將產(chǎn)生約等摩爾濃度的負(fù)干擾值。

2.3CHOL、TG受VC負(fù)干擾具有臨床意義的最低濃度 根據(jù)原數(shù)據(jù)算出的干擾值和干擾率反推出CHOL、TG受VC負(fù)干擾具有臨床意義的最低濃度見表4。當(dāng)TG濃度為1.00 mmol/L時，0.07 mmol/L的VC干擾濃度對TG產(chǎn)生的干擾就具有臨床意義；當(dāng)TG濃度為5.00 mmol/L時，0.35 mmol/L的VC干擾濃度對TG產(chǎn)生的干擾大于1/2TEa,具有臨床意義；隨著TG濃度的增加，產(chǎn)生臨床意義的VC干擾濃度也增加;當(dāng)TC濃度為1.00 mmol/L時，0.05 mmol/L的VC干擾濃度對TC產(chǎn)生的干擾就具有臨床意義；當(dāng)TC濃度為7.00 mmol/L時，0.32 mmol/L的VC干擾濃度對TC產(chǎn)生的干擾大于1/2TEa,具有臨床意義；隨著TC濃度的增加，產(chǎn)生臨床意義的VC干擾濃度也增加。

表4 CHOL、TG受VC負(fù)干擾具有臨床意義的最低濃度

續(xù)表4 CHOL、TG受VC負(fù)干擾具有臨床意義的最低濃度

注：干擾值=樣本濃度×1/2TEa。

3 討 論

目前，國內(nèi)實(shí)驗室檢測CHOL、TG、血糖(GLU)、尿酸(UA)等項目最后顯色反應(yīng)均為Trinder反應(yīng)，VC能還原Trinder反應(yīng)過程中產(chǎn)生的H2O2，使反應(yīng)過程中生成的紅色醌亞胺化合物減少而使檢測結(jié)果呈負(fù)干擾，給實(shí)際檢測結(jié)果帶來一定的分析誤差[14-17]。GLU和UA多采用雙試劑，加入的抗壞血酸鹽可以避免VC帶來的干擾，但CHOL、TG檢測多采用單試劑，無法避免VC的負(fù)干擾。

VC作為一種還原劑在臨床大量使用時，在體內(nèi)通常以脫氧型和還原型兩種形式存在，可以經(jīng)尿液從體內(nèi)排出，因此在一般情況下，患者在空腹采血時不會存在干擾。但是對于住院患者來說，在使用大劑量VC治療，或采血非空腹的情況下，CHOL、TG等檢測項目很容易受到干擾；另外腎功能不良患者也會易存在干擾的情況[14]。

VC對單試劑氧化酶法檢測CHOL、TG會產(chǎn)生負(fù)干擾,這與其他研究結(jié)果相近[3-5]，結(jié)合研究報道[18-20]，本研究首次采用國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T403-2012)《臨床生物化學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量指標(biāo)》TEa作為標(biāo)準(zhǔn)判斷相對偏差是否具有臨床意義。經(jīng)過相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)VC干擾濃度將產(chǎn)生約等摩爾濃度的負(fù)干擾值，通過1/2TEa，計算出了CHOL、TG不同濃度下，干擾具有臨床意義的VC干擾濃度，給實(shí)驗室及臨床提供了數(shù)據(jù)依據(jù)。

4 結(jié) 論

因此，當(dāng)實(shí)驗室采用單試劑氧化酶法檢測CHOL、TG時，應(yīng)了解患者的用藥情況，對檢測結(jié)果造成的負(fù)干擾作出合理解釋，協(xié)助臨床醫(yī)生的診療。另外，還應(yīng)積極改進(jìn)檢驗方法，消除干擾，減少誤差，提高了實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。