中毒家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶的分布研究*

王 勇，吳玉紅，卜 娟，封 宇，吳 偉，楊潤鑫

1.重慶警察學院刑事科學技術系，重慶 401331；2.重慶市“毒物毒品分析”重點實驗室，重慶 401331;3.重慶警察學院2015級刑事科學專業(yè)，重慶 401331

鹽酸哌替啶為人工合成的阿片受體激動劑，屬于苯基哌啶衍生物，是一種應用于臨床的合成鎮(zhèn)痛藥，為白色結晶性粉末，味微苦，無臭。鹽酸哌替啶系嗎啡的人工代用品，其作用機制與嗎啡相似，藥理作用及臨床應用均與嗎啡相同，但鎮(zhèn)靜、麻醉作用較小，僅為嗎啡的1/10～1/8。鹽酸哌替啶反復作用也可成癮，不良反應與嗎啡相似，被列為嚴格管制的麻醉藥品。因此，無論從其藥理作用、成癮性，以及對人體的危害，還是從法律文件規(guī)定上講，鹽酸哌替啶都是一種毒品[1]。

部分研究顯示，鹽酸哌替啶檢材的前處理方法主要有液液萃取、固相萃取等[2-4]。目前有關鹽酸哌替啶的研究主要為檢測方法以及鹽酸哌替啶作為麻醉劑在臨床的應用等，而有關鹽酸哌替啶的法醫(yī)毒物動力學相關研究較少[5-7]。本文采用LDHW-FFZ1-WuYH層析柱優(yōu)化生物樣品中鹽酸哌替啶的分離和提取，分析鹽酸哌替啶在家兔體內(nèi)的分布，旨在為鹽酸哌替啶濫用引起中毒事件的檢測提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 選擇家兔6只，中位體質(zhì)量2 kg。隨機分為實驗組(鹽酸哌替啶)和干擾組(鹽酸哌替啶+氫氯噻嗪)。實驗組中3只家兔分別標號1、2、3號，同時，分別抽取0.8 mL鹽酸哌替啶生理鹽水溶液(4 mg/mL)，經(jīng)耳緣靜脈注射，觀察家兔的呼吸與心跳等生命體征。干擾組中3只家兔分別標號4、5、6號，同時，分別抽取0.8 mL鹽酸哌替啶生理鹽水溶液(4 mg/mL)，經(jīng)耳緣靜脈注射，觀察家兔的呼吸與心跳等生命體征；30 min后，將50 mg氫氯噻嗪生理鹽水溶液經(jīng)口灌胃。死后解剖，取心臟、肝臟、脾、肺、腎臟、腦組織標本冷凍保存待檢。

1.2儀器與試劑 儀器為超聲波細胞粉碎機JY88-IIN。島津GC-2010plus型氣相色譜儀條件：Rtx-5ms(30 m×0.25 μm×0.25 mm)毛細管柱，柱溫為100 ℃(保持1 min)，以10 ℃/min升至250 ℃(保持8 min)；檢測器(NPD)，溫度260 ℃；Inject溫度280 ℃；載氣：氮氣(99.99%)，流速1 mL/min；氫氣流速1.5 mL/min；空氣流速145 mL/min；尾吹27.5 mL/min；分流比為20.0。LDHW-FFZ1-WuYH層析柱。

島津GC/MS條件： 毛細管柱DB-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，EI 源(70 eV)。柱溫：80 ℃(1 min)→10 ℃/min→250 ℃(8 min)；離子源溫度200 ℃，進樣口溫度250 ℃；分流比為50∶1；載氣：高純氦氣(99.999 9%)流速為1.0 mL/min，恒流模式。

試劑為乙酸乙酯、甲醇，均為分析純。鹽酸哌替啶標準品(1.0 μg/μL，購于公安部第二研究所)；內(nèi)標SKF525A標準液(1.0 μg/μL，購于公安部第二研究所)；氫氯噻嗪藥片(每片25 mg)購于天津力生制藥股份有限公司(生產(chǎn)批號：1708011)。

1.3方法

1.3.1檢材前處理和檢測 精確稱取1 g檢材，超聲波細胞粉碎機粉碎，移入試管，加入1 mL純凈水，振蕩30 s，加SKF525A內(nèi)標液20 μL(1 mg/mL)，振蕩1 min，采用LDHW-FFZ1-WuYH層析柱進行前處理，乙酸乙酯洗脫提取，氮吹干，甲醇20 μL定容，抽取1 μL，采用氣相色譜(GC/NPD)定量檢測其中鹽酸哌替啶水平。依據(jù)Rt法進行定性分析，采用內(nèi)標法和工作曲線法進行定量分析。

1.3.2回收率計算 取空白家兔肝臟1.0克/份，超聲波細胞粉碎機勻漿后加入1.0 mL純凈水，分別加入1.0、2.0、3.0 μg/μL的鹽酸哌替啶標準溶液，按1.3.1步驟進行檢測，計算回收率。

1.3.3工作曲線的建立 取空白家兔肝臟1.0 g，加蒸餾水1.0 mL振蕩，固性檢材超聲細胞粉碎(JYD-650L智能型)勻漿3 min，振蕩搖勻，加入鹽酸哌替啶標準溶液(1.0 μg/μL)，配制成1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、24.0、48.0、64.0 μg/g的鹽酸哌替啶溶液，按1.3.1步驟進行提取及檢測。以鹽酸哌替啶水平(μg/g)為橫坐標(Y)，鹽酸哌替啶與內(nèi)標SKF525A的峰面積之比為縱坐標(X)進行線性回歸分析。

2 結 果

2.1鹽酸哌替啶中毒致死家兔解剖所見 解剖鹽酸哌替啶中毒致死家兔，可見腰大肌出血。

2.2回收率 結果顯示，不同標準水平的鹽酸哌替啶在肝臟中的檢出水平分別為(0.94±0.20)、(1.92±0.40)、(2.85±0.30)μg/g，回收率分別為94.0%±0.3%、96.0%±0.2%、95.0%±0.3%。平均回收率96.0%，檢出限為2 μg/g。

2.3工作曲線 所得線性回歸方程為Y=1.415X-0.24，R2=0.998 1，結果表明，肝臟中鹽酸哌替啶在2～64 μg/g時線性關系良好。

2.4實驗組和干擾組家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶水平比較 結果顯示，干擾組心臟、肝臟、脾、肺、腎臟、腦組織標本鹽酸哌替啶水平均低于實驗組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 實驗組和干擾組家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶水平比較

3 討 論

本研究結果顯示，鹽酸哌替啶回收率均大于90.0%，充分說明LDHW-FFZ1-WuYH層析柱能夠應用于生物檢材中鹽酸哌替啶前處理提取，結合文獻[5-6]報道，此層析柱具有成本低、操作簡便、耗時短的優(yōu)點。同時，此層析柱不需調(diào)節(jié)檢材的酸堿性，不需對固相萃取柱進行活化，可直接將勻漿后的檢材過柱，然后用乙酸乙酯有機溶劑洗脫，加入內(nèi)標揮干，定容后直接檢測；其次，此層析柱既具有很強的吸水性，同時對檢材中的色素具有很強的吸附性，因此，經(jīng)其提取的洗脫液雜質(zhì)含量較少。

解剖鹽酸哌替啶中毒家兔尸體，可見腰大肌出血，分析原因可能為給家兔注射鹽酸哌替啶后，致全身肌肉抽搐、發(fā)生強直性收縮[1]，導致血管撕裂，從而表現(xiàn)為腰大肌出血。

同時，本研究結果顯示，兩組家兔各臟器組織鹽酸哌替啶水平從高到低分別為腦組織、腎臟、肝臟、脾、肺、心臟。鹽酸哌替啶在不同標本中分布不均勻與文獻[8]報道一致。兩組臟器中鹽酸哌替啶水平最高的臟器組織均為腦組織和腎臟，可能原因為腦組織為鹽酸哌替啶的靶向器官，腎臟為鹽酸哌替啶的排泄器官[1]。

同時，干擾組各臟器中鹽酸哌替啶水平均低于實驗組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。原因為干擾組家兔在耳緣靜脈注射鹽酸哌替啶30 min后，經(jīng)口灌胃氫氯噻嗪，此藥作用于腎臟，加速腎臟排泄，產(chǎn)生大量尿液，從而加速了家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶的排泄。因此，干擾組家兔體內(nèi)鹽酸哌替啶水平較實驗組有顯著下降。

綜上所述，法醫(yī)在處理鹽酸哌替啶濫用中毒案件時，在無法采集到血液檢材時，腦組織是最好的檢材，腎臟次之。對于利用氫氯噻嗪逃避處罰的鹽酸哌替啶濫用者，由于氫氯噻嗪能夠加速體內(nèi)鹽酸哌替啶的排泄，應盡快采集檢材，方可避免漏檢。