基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的機(jī)制＊

胡 駿，陳恒文，廖江銓，談鈺濛，劉蘭椿，王 階＊＊

（1. 中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院 北京 100053；2. 中日友好醫(yī)院 北京 100029；3. 北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 北京 100029）

冠心?。–oronary heart disease，CHD）是指由于冠狀動脈及其分支發(fā)生粥樣硬化或痙攣，使管腔狹窄或阻塞，導(dǎo)致心肌缺血、缺氧而引起的心臟病變[1]。近年來，我國冠心病的發(fā)病率、死亡率日趨提高，且呈年輕化趨勢，其住院患者的比例呈逐年上升的趨勢，已成為我國乃至全球的重大公共衛(wèi)生問題[2，3]。冠心病屬于中醫(yī)“胸痹”“心痛”“真心痛”等病范疇，病機(jī)為“本虛標(biāo)實(shí)”，本虛以氣虛為主、標(biāo)實(shí)以血瘀為主[4]，血瘀證作為冠心病的基本證型之一，其主要表現(xiàn)包括了胸痛位置固定，舌質(zhì)紫暗，有瘀斑瘀點(diǎn)，以及冠狀動脈狹窄、冠狀動脈血栓等[5]。故活血化瘀法是冠心病治療的基本法則，丹參通絡(luò)方是由丹參、三七、銀杏葉3 味藥組成，全方具有活血化瘀的功效，可用于治療冠心病血瘀證。

冠心病血瘀證證候生物學(xué)基礎(chǔ)的研究開始于上世紀(jì)70年代，經(jīng)過幾十年的積累，成果斐然。宏觀層面上，冠心病血瘀證即是人體各級血管出現(xiàn)結(jié)構(gòu)及功能異常的外在表現(xiàn)[6，7]；病理生理層面也已證實(shí)，冠心病血瘀證與微循環(huán)障礙[8]、血流動力學(xué)功能異常[9]、凝血功能障礙關(guān)系密切[10]；而炎癥因子及其他相關(guān)細(xì)胞因子的異常過表達(dá)則在分子水平上進(jìn)一步詮釋了冠心病血瘀證的內(nèi)涵[11]。近年來，基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)等生物技術(shù)的高速發(fā)展，為冠心病血瘀證提供了新的研究方法。通過生物信息學(xué)方法，篩選出冠心病血瘀證所特有的基因、蛋白質(zhì)以及代謝產(chǎn)物，根據(jù)其之間的調(diào)控關(guān)系，可以構(gòu)建出冠心病血瘀證的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從多角度、深層次揭示冠心病血瘀證的本質(zhì)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)即是通過對生物網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，并與藥物作用靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行整合，構(gòu)建“藥物成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)”，綜合研究藥物作用機(jī)制的一種方法[12，13]。目前，將網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)應(yīng)用于中醫(yī)證候的研究已經(jīng)取得一定的進(jìn)展，如李梢等[14]發(fā)現(xiàn)寒證網(wǎng)絡(luò)以激素為主，熱證網(wǎng)絡(luò)以免疫因子為主，且與寒證、熱證相關(guān)的基因均存在于神經(jīng)活性配體-受體相互作用的信號通路中。本研究結(jié)合課題組前期成果，發(fā)揮中醫(yī)“病證結(jié)合”的特色，將冠心病的靶基因與血瘀證靶基因取交集作為疾病靶基因，旨在運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的可能機(jī)制，為中藥新藥研發(fā)等提供思路。

1 方法

1.1 篩選有效成分及靶點(diǎn)

檢索TCMSP 數(shù)據(jù)庫[15]（https://tcmspw.com/tcmsp.php/）和TCMID 數(shù) 據(jù) 庫（https://119.3.41.228: 8000/tcmid/）得到丹參通絡(luò)方中丹參、三七、銀杏葉3味藥的成分。TCMSP 數(shù)據(jù)庫中包含了500 余種常見中藥、30000多個中藥化合物及其藥代謝動力學(xué)、藥物-靶標(biāo)蛋白網(wǎng)絡(luò)-疾病網(wǎng)絡(luò)信息，TCMID 數(shù)據(jù)庫包含了47000余種中藥方劑、8000余種中藥、25000余種化合物及其個對應(yīng)的疾病信息[16]。TCMID數(shù)據(jù)庫的優(yōu)勢在于其中藥品種更加齊全，而TCMSP數(shù)據(jù)庫的中藥化學(xué)成分信息更加全面，實(shí)際操作中一般綜合考慮2 個數(shù)據(jù)庫信息。同時查閱文獻(xiàn)，補(bǔ)充該方治療冠心病血瘀證可能的其他有效成分。由于中藥的成分復(fù)雜，結(jié)構(gòu)多樣，需設(shè)置生物利用度OB ≥30%和類藥性DL ≥0.18篩選出活性成分。運(yùn)用TCMSP 數(shù)據(jù)庫以及ChEMBL 數(shù)據(jù)庫（https://www.ebi.ac.uk/chembl/）預(yù)測丹參通絡(luò)方活性成分的靶基因。ChEMBL化合物靶標(biāo)作用平臺是用于預(yù)測已知的化合物和蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系的平臺，應(yīng)用較多。將獲得的靶點(diǎn)應(yīng)用UniProt 數(shù)據(jù)庫（https://www.uniprot.org/）校正統(tǒng)一命名。

1.2 獲取丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的靶基因

1.2.1 冠心病血瘀證差異基因的獲取

選取2015年5月-2016年1月于中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院心血管科門診及病房診斷為冠心病不穩(wěn)定型心絞痛的患者進(jìn)行證型診斷。冠心病不穩(wěn)定型心絞痛診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2011年ACCF/AHA 制定的《不穩(wěn)定型心絞痛/非ST 段抬高型心肌梗死診療指南更新》[17]；血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1988年王階、陳可冀制定的《血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)量表》[18]，根據(jù)量表進(jìn)行評分，≥19分為血瘀證，＜19分為非血瘀證。冠心病不穩(wěn)定型心絞痛患者根據(jù)其證型診斷納入冠心病血瘀證組（A組）和冠心病非血瘀證組（B組），另外，選取中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院體檢中心健康查體者作為健康對照組（N 組），每組各20 例。每組5 例用于mRNA 高通量測序，將各組測序結(jié)果兩兩導(dǎo)入Cufflinks 軟件，使用Cuffdiff 命令篩選出差異基因。將A 組和B 組之間的差異基因以及A組和N組之間差異基因取交集則獲得冠心病血瘀證差異基因。剩余15 例標(biāo)本用于熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，QRT-PCR）驗證其中的關(guān)鍵差異基因[19，20]。

1.2.2 冠心病血瘀證靶基因的獲取

在GeneCards數(shù)據(jù)庫[21]（https://www.genecards.org/）中搜索冠心病的關(guān)鍵詞“coronary heart disease”，與冠心病血瘀證差異基因取交集，作為冠心病血瘀證的靶基因，將丹參通絡(luò)方活性成分的靶基因與疾病基因取交集，得到丹參通絡(luò)方組方干預(yù)冠心病血瘀證的可能靶基因，并繪制韋恩圖。

1.3 構(gòu)建藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)

將冠心病血瘀證的靶基因與篩選出的丹參通絡(luò)方活性成分映射，創(chuàng)建包含“疾病-靶點(diǎn)”“藥物-靶點(diǎn)”“藥物-成分”的“network”文件及描述節(jié)點(diǎn)類型的“type”文件，將兩個文件導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2 軟件，繪制“成分-靶點(diǎn)-疾病”的交互網(wǎng)絡(luò)圖。網(wǎng)絡(luò)中的節(jié)點(diǎn)（node）代表活性成分、關(guān)鍵靶基因及冠心病血瘀證，邊（edge）代表上述節(jié)點(diǎn)間的相互作用關(guān)系。

1.4 構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)

利用STRING 數(shù)據(jù)庫（https://string-db.org/）整合預(yù)測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，可視化展示蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)功能[22]。選擇“multiple proteins”輸入關(guān)鍵靶基因，對“Homo sapiens”進(jìn)行檢索，選擇0.40置信度，得到核心靶蛋白的相關(guān)信息。

1.5 基因本體GO及KEGG通路富集分析

利用R 軟件（Version 3.6.1）和Bioconductor 軟件包對靶基因進(jìn)行靶基因GO 與KEGG 功能富集分析，以P＜0.05作為篩選條件，并將結(jié)果以條形圖形式輸出。

2 結(jié)果

2.1 丹參通絡(luò)方有效成分及靶基因

在TCMSP 以及TCMSID 數(shù)據(jù)庫中檢索丹參通絡(luò)方的所有有效成分，以O(shè)B ≥30%和DL ≥0.18 進(jìn)行篩選，篩選得到丹參活性成分65 個，三七活性成分8 個，銀杏葉活性成分27 個，查閱文獻(xiàn)[23，24]補(bǔ)充活性成分4個：人參皂苷Rg1（Ginsenoside Rg1）、人參皂苷Rb1（Ginsenoside Rb1）、人參皂苷Re（Ginsenoside Re）、三七皂苷（Notoginsenoside R1），共99 個活性成分。利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫和ChEMBL 數(shù)據(jù)庫獲得丹參對應(yīng)靶點(diǎn)61 個，三七對應(yīng)靶點(diǎn)178 個，銀杏葉對應(yīng)靶點(diǎn)118 個，經(jīng)Uniprot統(tǒng)一校正并去重后，共得到丹參通絡(luò)方活性成分對應(yīng)靶點(diǎn)214個。

2.2 治療冠心病血瘀證的相關(guān)基因

通過GeneCards 獲得6785 個冠心病相關(guān)基因，課題組前期通過高通量測序篩選出冠心病血瘀證差異基因221 個，兩者取交集作為冠心病血瘀證的靶點(diǎn)共84個（表1）。與丹參通絡(luò)方活性成分的靶基因去重后進(jìn)行映射，共得到8 個丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的活性成分：木犀草素（Luteolin）、丹參酮IIA（Tanshinone IIA）、甘草素（DFV）、鄰苯二甲酸二異辛酯（Diop）、β-谷甾醇（β-Sitosterol）、豆甾醇（Stigmasterol）、人參皂苷Rh2（Ginsenoside Rh2）、槲皮素（Quercetin）（表2）以及7 個對應(yīng)靶基因：ADRB2、NFKBIA、FOS、JUN、ERBB2、CXCL8、INSR（圖1）。

表1 冠心病血瘀證靶點(diǎn)

表2 丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的活性成分

2.3 藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用Cytoscape（3.7.2）軟件構(gòu)建的活性成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)（圖2）。大圓圈8 個黃色節(jié)點(diǎn)代表丹參通絡(luò)方3種中藥的活性化學(xué)成分。7 個紅色三角形節(jié)點(diǎn)代表丹參通絡(luò)方與冠心病血瘀證交集靶點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果為網(wǎng)絡(luò)集中度0.337，網(wǎng)絡(luò)密度0.199，網(wǎng)絡(luò)異質(zhì)性0.561，最短路徑342（100%）。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn) 的 度 值（degree）和 中 介 中 心 度（Betweenness centrality）進(jìn)行分析，排名前五的活性化合物中分別是：槲 皮 素（Quercetin），degree 9，中 介 中 心 度：0.40715445；木犀草素（Luteolin），degree 4，中介中心度：0.07917237；丹參酮IIA（Tanshinone IIA），degree 3，中介中心度：0.05050913；β-谷甾醇（β-Sitosterol），degree 3，中介中心度：0.01817017；人參皂苷Rh2（Ginsenoside Rh2），degree 2，中介中心度：0.02445673。7個靶基因排名分別是ADRB2，degree 6，中介中心度：0.19730598；NFKBIA，degree 5，中 介 中 心 度：0.17702002；FOS，degree 3，中介中心度：0.05380434；ERBB2，degree 3，中 介 中 心 度：0.04583293；JUN，degree 3，中介中心度：0.02999081；CXCL8，degree 2，中介中心度：0.00216269；INSR，degree 2，中介中心度：0.00216269。

圖1 丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證靶基因Venn圖

圖2 丹參通絡(luò)方活性成分-靶點(diǎn)-冠心病血瘀證網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過STRING 構(gòu)建丹參通絡(luò)方與冠心病血瘀證的交集靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖（圖3），其中節(jié)點(diǎn)代表靶蛋白，邊代表靶蛋白間的作用關(guān)系，圖中節(jié)點(diǎn)所連接的邊的數(shù)量越多則說明該蛋白在互作網(wǎng)絡(luò)中的作用越顯著。排名前4 的靶蛋白為原癌基因蛋白（FOS）、白細(xì)胞介素-8（CXCL8）、受體酪氨酸激酶（ERBB2）、轉(zhuǎn)錄因子AP（JUN）。冠心病、血小板、炎癥三者聯(lián)系密切，吳彩鳳[25]研究發(fā)現(xiàn)IL-8 具有激活血小板的作用，對血小板的聚集、釋放功能均有一定程度的影響。因此，IL-8可能是通過影響血小板活化來參與了冠心病的發(fā)病。

2.5 關(guān)鍵靶基因GO功能富集

通過關(guān)鍵靶基因，共富集23 個生物學(xué)過程和功能，根據(jù)校正后P進(jìn)行排序，選擇前20 個進(jìn)行條形圖展示（圖4）。為控制假陽性率，對富集進(jìn)行了校正，校正后P＜0.05 認(rèn)為交集靶基因在該通路或GO 功能存在顯著富集情況。結(jié)果丹參通絡(luò)方有效成分主要參與R-Smad 蛋白結(jié)合、肽結(jié)合、RNA 聚合酶II激活轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、酰胺結(jié)合、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性等生物過程，進(jìn)而發(fā)揮對冠心病的治療作用。

2.6 關(guān)鍵靶基因KEGG功能富集

對關(guān)鍵靶基因與KEGG 進(jìn)行映射，共富集60 條通路，根據(jù)校正后P進(jìn)行排序，選取與心血管疾病相關(guān)的前20個富集通路進(jìn)行條形圖展示（圖5）。根據(jù)P值大小可推測，靶基因主要參與白介素-17 信號通路（IL-17 signaling pathway）、Toll 樣受體信號通路（Toll-like receptor signaling pathway）、環(huán)磷酸腺苷信號通路（cAMP signaling pathway）及部分感染性疾病相關(guān)信號通路。

3 討論

丹參通絡(luò)方藥味少，配伍精當(dāng)，對于冠心病血瘀諸證有較好的療效。姜文睿[26]選取40 例冠心病心絞痛心血瘀阻證患者隨機(jī)分為兩組，在常規(guī)西藥治療基礎(chǔ)上，治療組使用丹參通絡(luò)方，對照組使用安慰劑，結(jié)果治療組總有效率、心絞痛發(fā)作次數(shù)、心絞痛積分、硝酸甘油用量、中醫(yī)血瘀證療效等顯著優(yōu)于對照組。在本研究中，丹參通絡(luò)方發(fā)揮治療作用的成分包括丹參酮IIA、槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、人參皂苷Rh2等。丹參功能祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩，能增加冠脈流量，是多種臨床用于治療心血管病的中成藥的主要藥味。藥理研究已表明，丹參酮IIA 磺酸鈉能夠降低冠心病患者溶栓后早期再灌注損傷，保護(hù)心肌，并能起到改善患者預(yù)后的作用[27]；活性成分β-谷甾醇具有鎮(zhèn)痛[28]、抑制血小板聚集[29]、抗動脈硬化[30]等多種生物學(xué)作用；人參皂苷Rh2 具有顯著的抗腫瘤、改善心肌缺血作用[31]。三七、銀杏葉中的有效成分槲皮素則具有降血壓、降血糖、降血脂、護(hù)心血管等作用[32]，但目前對槲皮素的研究多集中在動物實(shí)驗中，關(guān)于槲皮素的臨床研究較少。丹參、銀杏葉中含有的木犀草素具有降血脂、預(yù)防胰島素抵抗、減少心肌細(xì)胞的凋亡等多種生物學(xué)作用[33]。

圖3 交集靶蛋白的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖4 關(guān)鍵靶基因GO功能富集

圖5 關(guān)鍵靶基因KEGG功能富集

現(xiàn)有研究可以證實(shí)網(wǎng)絡(luò)圖中部分活性成分-靶點(diǎn)的對應(yīng)關(guān)系。如腦缺血再灌注后有NF-κB 的持續(xù)高表達(dá)，而槲皮素能有效降低NF-κB 的激活，對急性腦缺血再灌注有保護(hù)作用[34]。丹參酮IIA 可以抑制AngII誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大，這可能與其抑制了原癌基因FOS 和JUN 的表達(dá)有關(guān)[35]；丹參酮IIA 也具有降低阿爾茨海默病模型大鼠的NF-κB 的表達(dá)水平的作用[36]。人參皂苷Rh2 可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖，并且對肝癌細(xì)胞EGFR 的表達(dá)具有明顯的抑制作用[37]。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)degree分析出的排名靠前的靶基因包括ADRB2、NFKBIA、FOS、ERBB2、JUN。已有研究顯示，上述部分治療靶點(diǎn)與冠心病具有相關(guān)性。有研究顯示，心肌梗死或冠狀動脈疾病患者中ADRB2基因突變頻率比健康者更高[38]。NFKBIA 過表達(dá)可以降低心肌細(xì)胞凋亡，并增強(qiáng)心肌細(xì)胞活力[39]；NFKBIA 的基因多態(tài)性也與新疆漢族、維吾爾族人群的冠心病易感性相關(guān)[40]。

實(shí)驗研究顯示，丹參注射液能夠阻斷IL-23/IL-17反應(yīng)軸，可以降低博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化程度[41]；三七總皂具有降低哮喘小鼠氣道炎癥反應(yīng)的作用，顯著降低哮喘小鼠肺組織中IL-17 表達(dá)量[42]；銀杏葉提取物能夠調(diào)節(jié)潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠腸道炎癥反應(yīng)，使結(jié)腸組織中IL-17 等炎癥因子的染色減少[43]。血瘀是多種疾病的共同的病因病機(jī)，炎癥是機(jī)體對有害刺激的一種防御性反應(yīng)。目前大量研究已經(jīng)證實(shí)，冠心病血瘀證與炎癥關(guān)系密切，一方面是因為炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，促進(jìn)冠狀動脈粥樣硬化斑塊的形成；另一方面，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷使炎癥受體激活，白細(xì)胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎性因子大量分泌[44]，能進(jìn)一步加重血管內(nèi)皮的損傷，形成血栓，導(dǎo)致斑塊破裂等。如彭菊琴等[45]研究發(fā)現(xiàn)，冠心病血瘀證積分水平與超敏C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）存在相關(guān)性，且隨著積分水平的提高，hs-CRP 水平有遞增趨勢。周菁等[46]發(fā)現(xiàn)與冠心病氣虛證患者相比，血瘀證患者的炎癥反應(yīng)更為嚴(yán)重，使用加味血府逐瘀湯治療，能有效降低冠心病血瘀證患者白細(xì)胞介素-6（IL-6）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VACM-1）和TNFα水平。丹參通絡(luò)方中的有效成分主要參與IL-17 信號通路、Toll 樣受體信號通路、cAMP 信號通路等相關(guān)信號通路。冠狀動脈粥樣硬化本質(zhì)上是慢性炎癥反應(yīng)的過程，其中IL-17 信號通路就是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的信號通路，在冠心病的發(fā)生發(fā)展、血栓形成、多種不良心血管事件的發(fā)生中起到重要作用。另外，IL-17 在衰老小鼠中的表達(dá)顯著增加，與血管內(nèi)皮細(xì)胞的衰老密切相關(guān)[47]，IL-17 在穩(wěn)定型冠心病患者中的表達(dá)增加，能促進(jìn)心室重構(gòu)[48]。臨床研究顯示，血清IL-17 水平可為冠心病新的獨(dú)立危險因素[49，50]。

“病證結(jié)合”的診療模式由來已久，當(dāng)代的“病證結(jié)合”是指借助現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷疾病、通過中醫(yī)四診確立證候的中西醫(yī)結(jié)合的疾病診療模式[51]。所謂“證”即是指疾病過程中某一階段或某一類型的病理概括，傳統(tǒng)中醫(yī)受限于歷史條件，對“證”的認(rèn)識停留在四診可得的癥狀、體征等外在表象的層面。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，借助現(xiàn)代醫(yī)學(xué)手段，中醫(yī)學(xué)者對中醫(yī)“證”生物學(xué)基礎(chǔ)的研究不斷深入，使得通過檢測特異性的生物標(biāo)志物診斷證候成為可能。通過證候的生物學(xué)基礎(chǔ)研究，尋找證候特異性的生物標(biāo)志物，能夠規(guī)范中醫(yī)證候的臨床診斷；同時，證候生物標(biāo)志物也應(yīng)該是中藥發(fā)揮作用的靶點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)基于證候的中藥精準(zhǔn)治療，為中藥新藥研發(fā)提供新思路。由于目前仍缺少中醫(yī)證候相關(guān)的基因靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫等，影響了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測中藥的作用機(jī)制及靶點(diǎn)、通路的準(zhǔn)確性。受限于上述原因，以往的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究多采用疾病的靶基因代替“病證結(jié)合”靶基因，預(yù)測結(jié)果較為寬泛，與實(shí)際情況也有偏差。本研究結(jié)合了前期研究結(jié)果，創(chuàng)新性的采用冠心病血瘀證基因作為靶基因，與以往研究相比，縮小了預(yù)測范圍，使得預(yù)測結(jié)果更加精準(zhǔn)、更為可信。

綜上，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，構(gòu)建丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的“藥物成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)”，篩選可能發(fā)揮作用的關(guān)鍵基因，并進(jìn)行通路富集，推測丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證可能與IL-17信號通路調(diào)控的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。鑒于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)為一種預(yù)測手段，會受制于數(shù)據(jù)來源的可靠性和可行性，另外，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的結(jié)果僅提示丹參通絡(luò)方與冠心病血瘀證的相關(guān)性，故在進(jìn)行通路富集后，仍需實(shí)驗驗證通路上下游關(guān)鍵蛋白的表達(dá)水平，為后續(xù)深入研究冠心病的機(jī)制和中醫(yī)藥治療手段提供參考。

4 結(jié)論

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，最終得到8 個丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的相關(guān)的有效成分，排名前五的分別是槲皮素、木犀草素、丹參酮IIA、β-谷甾醇、人參皂苷Rh2；7 個作用靶基因，ADRB2、NFKBIA、FOS、ERBB2、JUN、CXCL8、INSR。其有效成分主要參與R-Smad 蛋白結(jié)合、肽結(jié)合、RNA 聚合酶II激活轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、酰胺結(jié)合、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性等生物過程；主要涉及的信號通路為IL-17信號通路、Toll 樣受體信號通路、cAMP 信號通路等。因此，丹參通絡(luò)方治療冠心病血瘀證的機(jī)制具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)，該預(yù)測結(jié)果仍需進(jìn)一步實(shí)驗驗證。