牛皰疹病毒1型誘發(fā)牛呼吸道綜合征的研究進(jìn)展

柳翠翠，于秀劍，杜萬年，劉勃興，張志強(qiáng)，吳同壘，史秋梅

(河北科技師范學(xué)院 河北省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點實驗室，河北 秦皇島 066604)

牛皰疹病毒1型(BHV-1)是α皰疹病毒亞科成員，根據(jù)抗原和基因組分析確定可分為3個亞型，BHV-1.1(1),BHV-1.2a (2a)和BHV-1.2b (2b)。1型毒株是牛傳染性鼻氣管感染(IBR)的病原體，常在呼吸道和流產(chǎn)胎兒中發(fā)現(xiàn)。1亞型毒株在歐洲、北美和南美流行。2a亞型常與呼吸道和生殖道的廣泛臨床表現(xiàn)相關(guān)，如IBR、傳染性膿皰外陰道炎(IPV)、傳染性膿皰龜頭炎(IPB)和流產(chǎn)。2a亞型在歐洲、巴西流行。2b亞型毒株與呼吸系統(tǒng)疾病和IPV/IPB有關(guān)，但與流產(chǎn)無關(guān)。2b亞型毒株的致病性低于1亞型毒株，通常在澳大利亞或歐洲分離到。

1 BHV-1引起的疾病及臨床癥狀

在牛的養(yǎng)殖過程中，BHV-1的呼吸型最常見。而流產(chǎn)或生殖感染更為常見[1]。生殖器感染可在與受感染動物密切接觸后發(fā)生。BHV-1的呼吸和生殖形式的潛伏期為2～6 d。在呼吸系統(tǒng)疾病方面，臨床癥狀包括高燒、結(jié)膜炎伴流淚、鼻孔發(fā)炎、喉部因膿性物質(zhì)堵塞而出現(xiàn)呼吸困難等。鼻部病變在鼻中隔黏膜上可見大量灰白色壞死灶。在沒有細(xì)菌性肺炎的情況下，康復(fù)通常發(fā)生在臨床癥狀出現(xiàn)后4～5 d。流產(chǎn)可能與呼吸道疾病同時發(fā)生，但也可能在感染后100 d內(nèi)出現(xiàn)，這可能是由于潛伏期的重新激活。

生殖器感染最初的臨床癥狀是尿頻和輕微的陰道感染，然后黏膜表面出現(xiàn)糜爛和潰瘍，公牛的陰莖和包皮也有類似的損傷。如果繼發(fā)性細(xì)菌感染，可能在數(shù)周有炎癥的子宮和短暫性不孕伴膿性陰道分泌物[1]。在沒有細(xì)菌感染的情況下，動物通常在感染后2周內(nèi)痊愈。不考慮繼發(fā)性細(xì)菌感染，BHV-1在急性感染后建立終身潛伏期。

2 BHV-1誘導(dǎo)的免疫抑制與牛呼吸道疾病的關(guān)系

牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRDC)，也被稱為“運輸熱”，BHV-1通過短暫抑制受感染牛的免疫系統(tǒng)誘發(fā)BRDC，以及繼發(fā)性細(xì)菌感染(例如溶血性巴氏桿菌、多殺性巴氏桿菌和睡眠嗜血桿菌)，從而導(dǎo)致肺炎。繼發(fā)性感染的易感性增加與BHV-1感染后細(xì)胞免疫功能低下有關(guān)，感染細(xì)胞的CD4+T細(xì)胞識別受到抑制，主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I類和與抗原表達(dá)相關(guān)的轉(zhuǎn)運蛋白的表達(dá)，CD4+T細(xì)胞功能在犢牛急性感染過程中受到損害，原因都是BHV-1感染CD4+T細(xì)胞并誘導(dǎo)其凋亡。在沒有其他病毒基因的情況下，bICP0和UL41.5 2種病毒基因會抑制特定的免疫反應(yīng)。

2.1 bICP0蛋白激活病毒基因表達(dá)，抑制干擾素(IFN)信號通路bICP0蛋白是主要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白，因為它激活所有病毒啟動子的表達(dá)[2]。在生產(chǎn)感染過程中，bICP0轉(zhuǎn)錄本呈結(jié)構(gòu)性表達(dá)。由BHV-1和單純皰疹病毒1型(HSV-1)編碼的ICP0同源基因在其各自的n端附近含有1個保守的C3HC4鋅環(huán)。突變分析表明了C3HC4鋅環(huán)指結(jié)構(gòu)域?qū)ICP0和ICP0的重要性。ICP0和bICP0與含早幼粒細(xì)胞白血病蛋白的原癌基因核區(qū)域共定位并破壞其結(jié)構(gòu)。bICP0鋅環(huán)的斷裂阻止了簡單病毒啟動子的反式激活[3]，并破壞了將BHV-1 DNA轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的牛腎細(xì)胞后bICP0刺激斑塊形成的能力[4]。

bICP0蛋白包含2個轉(zhuǎn)錄激活域(TAD)和1個核定位信號(NLS)，這是高效轉(zhuǎn)錄激活所必需的[4]。與大多數(shù)轉(zhuǎn)錄因子不同，bICP0或ICP0與特定的DNA序列沒有明顯的結(jié)合，這表明bICP0通過與細(xì)胞轉(zhuǎn)錄機(jī)制相互作用來激活轉(zhuǎn)錄。

在沒有其他病毒基因的情況下，blCP0抑制IFN信號。bICP0(直接或間接)降低人或牛細(xì)胞中IRF3 (IFN調(diào)節(jié)因子3)蛋白水平，從而導(dǎo)致IFN-β啟動子活性降低[5]。此外，bICP0抑制IRF7激活I(lǐng)FN-β啟動子活性的能力，但不會顯著降低IRF7蛋白水平[5]。ICP0[6]和bICP0的環(huán)指蛋白是E3泛素連接酶，表明bICP0環(huán)指蛋白介導(dǎo)IRF3降解。功能蛋白酶對于bICP0誘導(dǎo)的IRF3降解是必要的[5],這一發(fā)現(xiàn)支持了bICP0環(huán)指蛋白介導(dǎo)IRF3降解的觀點。環(huán)指蛋白并不是bICP0誘導(dǎo)的IRF3降解的唯一必要成分，因為bICP0 c端附近的特定突變也很重要[5]。需要進(jìn)一步的研究來了解bICP0如何抑制IRF7誘導(dǎo)IFN-β啟動子活性，以及bICP0誘導(dǎo)IRF3降解的機(jī)制。

病毒感染后，細(xì)胞蛋白激酶IKK-ε或TBK-1在IRF3的c端磷酸化絲氨酸殘基，誘導(dǎo)IRF3同源二聚和核易位核IRF3與其他轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)合，直接結(jié)合和刺激IFN-P啟動子活性。IRF3還可以直接結(jié)合多個一致的DNA結(jié)合位點，包括ISRE(IFN反應(yīng)元件)，從而在沒有IFN的情況下刺激IFN刺激基因的轉(zhuǎn)錄IRF3的激活是IFN反應(yīng)的直接早期調(diào)控因子，而IRF7被認(rèn)為是早期反應(yīng)的一個組成部分。然而，在比較小鼠IRF3和IKF7敲除時，IRF7在抑制病毒感染方面更為重要[7]。因為BHV-1不會在小鼠體內(nèi)生長，除非它們?nèi)狈FN受體，很明顯，BHV-1有抑制先 d免疫反應(yīng)的能力，如IFN，在牛和宿主的發(fā)病范圍中是一種重要的因子。

2.2 UL49.5BHV-1 UL49.5開放閱讀框(ORF)，也稱為糖蛋白N(gN)，編碼1種96-氨基酸蛋白，相對分子質(zhì)量為9 000。UL49.5 ORF包含1個信號肽(n端22個氨基酸)、1個由32個氨基酸組成的胞外結(jié)構(gòu)、1個由25個氨基酸組成的跨膜結(jié)構(gòu)域和1個由17個氨基酸組成的長細(xì)胞質(zhì)尾部。UL49.5蛋白表達(dá)為非糖基化I型膜蛋白。迄今為止，所有g(shù)N皰疹病毒同源物都與UL10 ORF編碼的糖蛋白M(gM)形成復(fù)合物。PRV和BHV-1編碼的gN同源蛋白抑制了轉(zhuǎn)運蛋白相關(guān)抗原處理(TAP)介導(dǎo)的胞質(zhì)多肽向ER的轉(zhuǎn)運，從而阻斷了含肽的三元MHCⅠ復(fù)合物在病毒感染細(xì)胞中的體外組裝[8]。此外，BHV-1 gN針對TAP復(fù)合物進(jìn)行蛋白酶體降解[9]。TAP復(fù)合物由TAPl/TAP2異二聚體組成，二者都屬于ABC(ATP-binding cassette)。

TAP轉(zhuǎn)運是MHCⅠ類抗原呈遞的關(guān)鍵步驟。在缺乏功能性TAP轉(zhuǎn)運體的情況下，大多數(shù)MHCⅠ類分子不含多肽。然而，它們被保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，最終被蛋白酶降解。缺失胞質(zhì)尾部的gN突變體仍可與TAP復(fù)合物結(jié)合，阻斷肽轉(zhuǎn)運，但該突變體的gN蛋白不能降解TAP[9]。但是，當(dāng)除胞質(zhì)尾部外的跨膜被截斷時，gN不再阻斷TAP功能[9]。因此，gN跨膜域中的序列可能與TAP相互作用。表達(dá)多種gN突變蛋白的病毒株的表型尚未在病毒和病毒感染細(xì)胞的環(huán)境中進(jìn)行測試。綜上所述，推測gN抑制TAP的能力是為了防止病毒感染細(xì)胞被CD8+T細(xì)胞殺死。

3 病毒編碼的結(jié)構(gòu)蛋白介導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入及傳播

為了充分了解BHV-1在BRDC中所起的作用，必須了解BHV-1是如何引發(fā)生產(chǎn)性感染。

α-皰疹病毒糖蛋白是病毒顆粒結(jié)合并穿透受納細(xì)胞所必需的。此外，病毒糖蛋白是病毒釋放、細(xì)胞融合和細(xì)胞間傳播所必需的。12個BHV-1包膜蛋白(gB,gC,gD,gE,gG,gH,gI,gL,gM和gK)中有10個是糖基化的，2個(gN和Us9)是非糖基化的。5種包膜蛋白(gB,gD,gH,gL和gK)是培養(yǎng)細(xì)胞生長所必需的，而其余7種包膜蛋白(gC,gE,gG,gI,gM,gN和Us9)則不是培養(yǎng)細(xì)胞生長所必需的。所有α-皰疹病毒gC同系物(包括BHV-1)通過與硫酸肝素蛋白聚糖結(jié)合，促進(jìn)病毒顆粒附著在細(xì)胞表面。在沒有g(shù)C的情況下，gB通過與硫酸肝素結(jié)合來補(bǔ)充gC的附著功能。繼gB和或gC介導(dǎo)的初始附著后，病毒進(jìn)入的下一步需要gD與細(xì)胞受體內(nèi)連接蛋白1(也稱為HveC)的相互作用或HVEM，腫瘤壞死因子家族蛋白的成員。結(jié)合素1屬于細(xì)胞間黏附分子家族，其外結(jié)構(gòu)域包含3個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域[10]。腫瘤壞死因子家族的某些成員可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，表示gD與HVEM相互作用可誘導(dǎo)某些細(xì)胞類型的凋亡。在gD受體結(jié)合后，gB和/或gH-gL復(fù)合物與細(xì)胞膜蛋白相互作用，導(dǎo)致病毒包膜與細(xì)胞膜融合。除了gD受體結(jié)合必須發(fā)生在融合過程之前，病毒和細(xì)胞膜融合的其他機(jī)制還沒有很好地了解。病毒進(jìn)入相鄰細(xì)胞(細(xì)胞間傳播)也需要gD，因為刪除gD基因的病毒不能在細(xì)胞間傳播。在表達(dá)gD的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，野生型病毒的細(xì)胞間傳播受到限制，這表明gD與假定的細(xì)胞受體結(jié)合，這些受體存在于細(xì)胞表面的頂端細(xì)胞膜和位于細(xì)胞間連接處的外側(cè)細(xì)胞膜上。雖然gD是病毒進(jìn)入細(xì)胞的必要糖蛋白，但gH在氨基酸殘基450處的代償性突變(甘氨酸向色氨酸的突變)介導(dǎo)了gD的獨立于gD的進(jìn)入和細(xì)胞間的傳播。gE和gI之間相互作用也促進(jìn)細(xì)胞間病毒的傳播，而gE和或gI缺失突變體在細(xì)胞間傳播中存在缺陷。gE缺失病毒通過三叉神經(jīng)節(jié)(TG)的從鼻子和眼睛逆向運輸，它們在其中的感覺神經(jīng)元中建立潛伏期[11]。gE缺失病毒不能從潛伏期重新激活，因為它們不能從TG的感覺神經(jīng)元向鼻或眼腔的非神經(jīng)元細(xì)胞順向傳播[11]。包膜蛋白(Us9)對順行性神經(jīng)元傳播也很重要，因為在地塞米松誘導(dǎo)的活化后，潛伏感染Us9缺失病毒不會在鼻子和眼睛中傳播病毒。另外，Us9缺失的BHV-1和偽狂犬病病毒(PRV)在培養(yǎng)中感染上皮細(xì)胞后沒有表型。PRV，Us9缺失病毒具有缺陷的順行神經(jīng)元傳播表型，因為在Us9缺失的情況下，病毒糖蛋白或含有病毒糖蛋白的囊泡的軸突轉(zhuǎn)運不會發(fā)生。因此，Us9功能是神經(jīng)元特異性的，只有在順行神經(jīng)元轉(zhuǎn)運的情況下才需要。

BHV-1 gG是蛋白水解后分泌的。此外，gG存在于病毒包膜上，并與受感染的細(xì)胞膜有關(guān)。與其他a-皰疹病毒gG同源物一樣，BHV-1 gG具有趨化因子結(jié)合活性，因為它阻斷趨化因子與細(xì)胞受體和糖胺聚糖(GAGS)的相互作用。由于在膜上gG與各種趨化因子結(jié)合，gG的趨化因子結(jié)合活性也發(fā)生在細(xì)胞膜上。由于突變病毒的免疫原性更強(qiáng)，編碼gG的BHV-1基因的缺失導(dǎo)致犢牛病毒的衰減[12]。BHV-1 gG編碼的趨化因子結(jié)合活性是小牛感染后表型減弱的原因。研究表明，許多病毒基因是啟動生產(chǎn)性感染和細(xì)胞間傳播的必要條件。

4 BHV-1的再活化周期

4.1 急性感染導(dǎo)致高水平的病毒產(chǎn)生BRDC并不總是與急性BHV-1感染相關(guān)。一般認(rèn)為，BHV-1從潛伏感染中重新激活的能力可以啟動BRDC。急性BHV-1感染是在高水平的程序性細(xì)胞死亡的黏膜表面和殘留上引起的受納細(xì)胞感染。BHV-1也會導(dǎo)致細(xì)胞快速死亡，部分原因是凋亡。病毒基因表達(dá)受3個不同階段的調(diào)控:極早期(IE)、早期(E)或晚期(L)。IE基因的表達(dá)是由一種病毒粒子組分(α-TIF)控制的。存在兩個IE轉(zhuǎn)錄單元:IE轉(zhuǎn)錄單元IEtul和IEtu2。IEtul編碼2種HSV-1 IE蛋白ICP0和ICP4的功能同源蛋白。IEtu2編碼的蛋白與HSV IE蛋白ICP22相似[13]。一般來說，IE蛋白激活E基因表達(dá)，然后病毒DNA復(fù)制發(fā)生。L基因表達(dá)也被bICP0激活，最終在病毒粒子組裝和釋放中達(dá)到頂峰。如上所述，bICP0對生產(chǎn)感染很重要，因為它轉(zhuǎn)錄激活所有病毒啟動子，并在感染過程中高表達(dá)[14]。急性感染導(dǎo)致高水平的病毒生產(chǎn)和分泌在眼睛，口腔或鼻腔。如果在生殖道開始急性感染，則很容易在生殖道組織中發(fā)現(xiàn)病毒脫落。無論感染的部位如何，病毒的脫落可在感染后持續(xù)7～10 d。

病毒顆粒，或者亞病毒顆粒，通過細(xì)胞-細(xì)胞擴(kuò)散進(jìn)入周圍神經(jīng)系統(tǒng)。如果感染是通過口腔、鼻腔或眼孔開始的，潛伏的主要部位是TG內(nèi)的感覺神經(jīng)元[15]。病毒基因表達(dá)水平較高或感染性病毒可在感染后1～6 d的TG中檢測到。病毒基因表達(dá)和檢測的傳染性病毒隨后被消滅，但病毒基因組可以檢測在TG(建立潛伏期)。與培養(yǎng)細(xì)胞的生產(chǎn)性感染相比，大量受感染的神經(jīng)元存活下來，這些神經(jīng)元含有潛伏的基因組。潛伏期的一個特征是由潛伏期相關(guān)基因(LR)產(chǎn)生的大量轉(zhuǎn)錄水平和ORF-E這表明LR轉(zhuǎn)錄是第一個在受感染神經(jīng)元中表達(dá)的病毒轉(zhuǎn)錄，因為我們在犢牛感染24 h后在TG中檢測到拼接的LR轉(zhuǎn)錄。相比之下，我們不能同時使用RT-PCR檢測IE或E基因表達(dá)，這表明LR基因產(chǎn)物在編程感覺神經(jīng)元病毒感染的結(jié)果中起著關(guān)鍵作用[16]。支持這一預(yù)測的是LR基因產(chǎn)物通過抑制凋亡促進(jìn)潛伏期的建立和病毒基因表達(dá)。ORF-E可誘導(dǎo)小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的神經(jīng)元樣生長[17]，從而促進(jìn)潛伏期的有效建立[18]。因此，ORF-E可促進(jìn)感染成熟神經(jīng)元功能的恢復(fù)。由于LR基因和ORF-E在潛伏期的維持過程中大量表達(dá)，預(yù)測它們在潛伏期的維持中發(fā)揮積極作用。

皮質(zhì)類固醇水平升高(壓力)和/或免疫抑制可以從潛伏期開始重新激活。牛的運輸所帶來的壓力是一種明顯的刺激，它可以觸發(fā)潛伏期和BRDC的再激活。在從延遲重新激活期間，會產(chǎn)生3種情況：在感覺神經(jīng)元中容易檢測到生產(chǎn)性病毒基因表達(dá);ORF-E和LR基因表達(dá)顯著下降;感染性病毒由鼻或眼分泌。對潛伏感染BHV-1的小?；蚣彝媒o予地塞米松可重復(fù)地激活病毒基因表達(dá)并從潛伏期重新激活。雖然許多潛伏感染的神經(jīng)元表面上不產(chǎn)生感染病毒，但在感染病毒的環(huán)境中檢測到的神經(jīng)元病毒基因表達(dá)發(fā)生的數(shù)量要高得多，表明產(chǎn)生病毒的神經(jīng)元并不常見。

4.2 BoHV-1在牛的非神經(jīng)位點持續(xù)潛伏性存在雖然神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元潛伏性的建立是BHV-1和其他α-皰疹病毒亞科成員潛伏性的主要部位，但潛伏性或持續(xù)性感染也發(fā)生在非神經(jīng)部位，例如扁桃體和淋巴結(jié)。即使沒有發(fā)現(xiàn)感染病毒，BHV-1 DNA始終可以在扁桃體，外周血細(xì)胞，淋巴結(jié)和脾臟潛伏感染小牛檢測出。與感覺神經(jīng)元的潛伏期相比，LR-RNA在潛伏感染的淋巴組織中沒有大量表達(dá)。當(dāng)從潛伏感染的犢牛扁桃體的生發(fā)中心進(jìn)行移植時，可以檢測到傳染性病毒，這為BHV-1已經(jīng)在淋巴細(xì)胞中建立了潛伏或持續(xù)感染的假設(shè)提供了支持。

4.3 LR基因在潛伏期大量表達(dá)，是潛伏期再激活周期所必需的如上所述，LR-RNA在潛伏感染的神經(jīng)元中大量轉(zhuǎn)錄與bICP0基因是相反的。LR-RNA的裂解起始位點位于TG所用起始位點的下游。LR基因有2個ORF(ORF-1和ORF-2)，以及2個缺少初始ATG(RF-B和RF-C)的閱讀框。針對ORF-2的肽抗體可以識別LR基因編碼的蛋白質(zhì)。部分LR-RNA被聚腺苷酸化，并在TG中選擇性剪接，表明表達(dá)了不止1個LR蛋白。LR基因產(chǎn)物抑制細(xì)胞增殖，抑制bICP0 RNA表達(dá)和凋亡。LR蛋白的表達(dá)對于抑制細(xì)胞凋亡是必要的，而對于細(xì)胞生長或bICP0的表達(dá)必需的。

4.4 ORF-E編碼一種在潛伏感染小牛的TG中表達(dá)的蛋白質(zhì)存在于LR啟動子內(nèi)的小ORF被指定為OW-E。OW-E是LR轉(zhuǎn)錄本和blCP0 ORF下游的反義。包含ORF-E的轉(zhuǎn)錄本在被感染的牛細(xì)胞和潛伏感染小牛的TG中表達(dá)。將ORF-E蛋白編碼序列與綠色熒光蛋白(GFIJ)序列融合，在小鼠或人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的細(xì)胞核中檢測到GFP蛋白的表達(dá)。相反，ORF-E-GFP融合蛋白在兔上皮細(xì)胞中表達(dá)。

針對ORF-E肽或整個ORF-E蛋白的多克隆抗血清特異性地識別了轉(zhuǎn)染ORF-E表達(dá)質(zhì)粒的潛伏感染小牛和小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞TG中感覺神經(jīng)元的細(xì)胞核[18]，ORF-E還在這些小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)神經(jīng)元樣突起。相比之下，用空載體轉(zhuǎn)染小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞后，神經(jīng)元樣突起沒有發(fā)生變化，這表明ORF-E誘導(dǎo)了神經(jīng)元細(xì)胞的生理變化。構(gòu)建不表達(dá)ORF-E蛋白的BHV-1突變體來檢測ORF-E是否在延遲活化周期中起作用是很有必要的。

4.5 急性感染后對BHV-1的免疫反應(yīng)雖然BHV-1有可能抑制牛的免疫，但最終會產(chǎn)生有效的免疫反應(yīng)，從而防止全身感染。關(guān)于BRDC，這意味著BHV-1啟動的免疫抑制是短暫的。

宿主對BHV-1感染的免疫反應(yīng)包括先 d免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。 先 d免疫反應(yīng)包括干擾素的抗病毒作用、補(bǔ)體途徑的選擇以及淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞(NK)的局部浸潤。在BHV-1感染后，IFN-α和IFN-P在感染后5 h就可在鼻腔分泌物中檢測到，在感染后72～96 h達(dá)到最高水平，并可在感染后持續(xù)8 d。在感染初期，IFN-α和IFN-P促進(jìn)白細(xì)胞遷移，激活巨噬細(xì)胞，增加NK細(xì)胞活性。巨噬細(xì)胞的活化和NK細(xì)胞活性的增加刺激細(xì)胞對病毒感染細(xì)胞的溶細(xì)胞活性。NK細(xì)胞是一種缺乏T細(xì)胞和B細(xì)胞標(biāo)記物的非貼壁效應(yīng)細(xì)胞。這些細(xì)胞需要與目標(biāo)細(xì)胞長時間作用，以達(dá)到最佳的裂解效果。此外，NK樣細(xì)胞毒性也與CD3+CD45+群有關(guān)，F(xiàn)c受體陽性淋巴細(xì)胞可能代表γδT細(xì)胞的1個亞群。適應(yīng)性或體液免疫反應(yīng)導(dǎo)致產(chǎn)生中和抗體，這種抗體結(jié)合病毒顆粒并抑制生產(chǎn)性感染。包膜糖蛋白gB,gC,gD和gH是病毒中和抗體最有效的誘導(dǎo)劑。此外，非中和抗體可能介導(dǎo)包膜病毒或細(xì)胞膜上表達(dá)病毒蛋白的細(xì)胞的破壞，這個過程被稱為抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。針對包膜蛋白產(chǎn)生的中和抗體和非中和抗體也可以通過幾種不同的機(jī)制抑制病毒感染：抗體和補(bǔ)體介導(dǎo)的病毒包膜和病毒感染細(xì)胞的膜攻擊復(fù)合物(MAC)裂解；抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，其中IgG與Fc受體陽性細(xì)胞(巨噬細(xì)胞)相互作用；C3b與IgM結(jié)合介導(dǎo)與C3b受體陽性細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)結(jié)合。在所有病例中，病毒感染的細(xì)胞都被裂解。感染后8～12 d可檢測到病毒中和抗體和非中和抗體(IgG)的產(chǎn)生。局部/黏膜免疫依賴于分泌的中和抗體(IgA分子)，全身體液免疫依賴于IgG。

細(xì)胞介導(dǎo)免疫(CMI)反應(yīng)在殺死細(xì)胞表面表達(dá)病毒抗原的病毒感染細(xì)胞中起著重要作用[19]，例如，CD8+CTL反應(yīng)是對BHV-1的重要防御，因為上呼吸道上皮細(xì)胞間傳播發(fā)生在血行傳播之前[19]。細(xì)胞毒性和增殖T淋巴細(xì)胞反應(yīng)發(fā)生在感染后8 d左右的血液中。gB和gD DNA疫苗已誘導(dǎo)小鼠CTL反應(yīng)。此外，gC和gD已被確定為牛CTL應(yīng)答的靶點，gB DNA疫苗在牛中誘導(dǎo)CTL應(yīng)答。其他結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)病毒蛋白也可能在CMI反應(yīng)中發(fā)揮作用，因為只有有限數(shù)量的BHV-1蛋白被評估為CTL活性。除了破壞感染的細(xì)胞外，T淋巴細(xì)胞還釋放出許多淋巴因子，這些因子具有特異性和非特異性免疫反應(yīng)。例如，IFN-γ等因子進(jìn)一步激活巨噬細(xì)胞。BHV-1蛋白(gB-,gC-,gD-和VP8[20])是免疫牛的CD4+T輔助細(xì)胞。細(xì)胞膜上表達(dá)gB,gC或gD的細(xì)胞也被確定為CD4+T細(xì)胞的靶細(xì)胞。通常，CD4+T細(xì)胞對抗體反應(yīng)的發(fā)生和CD8+T細(xì)胞的有效記憶起著重要作用。因此，CD4+T和CD8+T細(xì)胞以及抗體都需要長期的保護(hù)。

4.6 潛伏期外周神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)較長時間的CMI反應(yīng)研究表明，T細(xì)胞，特別是CD8+T淋巴細(xì)胞，在潛伏期控制感覺神經(jīng)節(jié)的HSV-1感染[21]。病毒抗原陽性的神經(jīng)元被TNF-a,IL-2,IL-6,IL-10或IFN-γ的非神經(jīng)細(xì)胞包圍，在潛伏感染HSV-1的小鼠中也可檢測到。未感染的小鼠TG中未檢測到淋巴細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞。在潛伏感染HSV-2的小鼠或豚鼠的感覺神經(jīng)節(jié)和脊髓中也可檢測到淋巴細(xì)胞的持續(xù)浸潤。犢牛感染BHV-1后，急性感染時容易發(fā)現(xiàn)浸潤淋巴細(xì)胞灶。最后，在潛伏感染HSV-1的TC中，也觀察到慢性免疫反應(yīng)[19]。總之，T細(xì)胞在潛伏期長期存在于感覺神經(jīng)節(jié)具有調(diào)節(jié)潛伏期-再活化周期的潛力。

免疫細(xì)胞在TC中的持續(xù)存在可能是由于病毒蛋白在罕見的神經(jīng)元或衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)。在潛伏感染BHV-1的犢牛TG中，可以檢測到表達(dá)病毒轉(zhuǎn)錄和蛋白的罕見細(xì)胞，提示分子自發(fā)活化發(fā)生在BHV-1潛伏期。

產(chǎn)生IFN-γ的CD8+T細(xì)胞被認(rèn)為在阻止?jié)摲腥綡SV-1的小鼠感覺神經(jīng)元的潛伏性活化方面發(fā)揮了重要作用。2項獨立研究也得出結(jié)論，IFN-α和IFN-γ控制復(fù)發(fā)性皰疹性病變[22]。除了IFN外，淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性還可以抑制病毒在TG中的傳播。顆粒胞吐是淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性誘導(dǎo)兩種有效的凋亡途徑之一。顆粒胞吐途徑主要被CD8+，NK和淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞所利用。表明BHV-1 LR基因在急性感染LR突變病毒的犢牛TG中，淋巴細(xì)胞浸潤增強(qiáng)，從而發(fā)揮調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞浸潤的作用[18]。地塞米松誘導(dǎo)潛伏性BHV-1感染小牛TG炎癥細(xì)胞凋亡的能力與潛伏性再活化有關(guān)[13]。

綜上所述，BHV-1病原體的特殊性在于編碼了抑制免疫系統(tǒng)的特定蛋白，不僅引起了免疫抑制，而且激發(fā)和誘導(dǎo)潛伏期感染，這對于本病的消滅帶來了極大的難度，所以根據(jù)3種晚期蛋白質(zhì)(gG，UL49.5和VP8)等來設(shè)計預(yù)防BHV-1的疫苗是很好的思路和方向。