小兒氨酚黃那敏顆粒溶出度的研究及評價(jià)

★ 宋曉園 賴佐發(fā) 廖婷 吳曉勇（贛州市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 江西 贛州 341000）

小兒氨酚黃那敏顆粒收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)第三冊［1］，其處方為對乙酰氨基酚125g，人工牛黃5g，馬來酸氯苯那敏0.5g，輔料適量制成1000袋，為抗感冒藥［1］。感冒是兒童的四季常見病多發(fā)病，因此抗感冒咳嗽藥物是目前兒童藥品市場的當(dāng)家品種，而小兒氨酚黃那敏是國內(nèi)重點(diǎn)城市藥店零售市場居第一位的小兒感冒用藥［2］?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)［1］及征求意見稿［3］無溶出度檢查，目前報(bào)道多關(guān)于含量測定［4-6］，未見溶出度，本文參考標(biāo)準(zhǔn)［7-8］、文獻(xiàn)［9-10］及普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則［11］建立高效液相色譜法測定小兒氨酚黃那敏顆粒中主要成分對乙酰氨基酚的溶出度，并對市場上10個(gè)不同廠家的13批次樣品進(jìn)行溶出度測定，為今后該品種標(biāo)準(zhǔn)提高提供一定的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waterse2695高效液相色譜儀［2998 PDA Detector、Empower工作站，沃特世科技（上海）有限公司］；T9CS雙光束紫外可見分光光度儀（北京普折通用儀器有限責(zé)任公司）；XSE205DU型電子天平［梅特勒-托利多（瑞士）］；RC8MD智能溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；KQ600KDB超聲波清洗器（昆山市超聲儀有限公司）；Agilent1260高效液相色譜儀（DAD檢測器，安捷倫科技公司）。

1.2 試藥 對乙酰氨基酚（中國食品藥品檢定研究院，批號：100018-201610，供HPLC法測定，按C8H9NO2計(jì)，含量為99.9%）；甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱：Welch Ultimate?XB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：0.05mol/L乙酸銨∶甲醇（80∶20）；流速：1.0mL/min；檢測波長：244nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計(jì)算不低于5000，對乙酰氨基酚峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取對乙酰氨基酚對照品0.02531g，置100mL量瓶中，加溶出介質(zhì)（以稀鹽酸24mL加水至1000mL）超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對乙酰氨基酚對照品儲備液。

2.3 供試品溶液的制備 照溶出度與釋放度測定法（通則0931第二法槳法）［12］，以稀鹽酸24mL加水至1000mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50r/min，測定溫度為37℃±0.5℃，依法操作，經(jīng)20min時(shí)，取溶出液10mL，濾過，作為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備 按照藥品說明書稱取輔料適量，配制不含對乙酰氨基酚的陰性樣品溶液，按2.1測定方法測定，結(jié)果陰性樣品在對乙酰氨基酚的峰位上未出現(xiàn)色譜峰，說明陰性樣品無干擾，見圖1。

圖1 HPLC高效液相圖譜

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取對2.1項(xiàng)下的乙酰氨基酚對照品儲備液適量，用溶出介質(zhì)分別稀釋成0.2278、0.1772、0.1266、0.07593、0.02531mg/mL 的對乙酰氨基酚對照品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測定。以進(jìn)樣量（mg）為橫坐標(biāo)，對乙酰氨基酚的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算對乙酰氨基峰的回歸方程及相關(guān)系數(shù)r，為Y=38794799X+5487，r=1.0000。結(jié)果表明對乙酰氨基酚在0.02531～0.2278mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 取2.5項(xiàng)下的0.1266mg/mL的對乙酰氨基酚對照品溶液，精密量取10μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得對乙酰氨基酚的峰面積RSD為0.033%， 表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（批號18042902）進(jìn)行六次溶出度試驗(yàn)，測得六次的平均溶出量分別為96%、96%、97%、98%、97%、96%，RSD為0.84%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品（批號18042902）一袋，按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備同法制備溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件，分別于制備后0、1、2、3、4、5、6、7、8h測定，記錄對乙酰氨基酚峰面積并計(jì)算其RSD為0.19%，結(jié)果顯示供試品溶液在溶出取樣后8h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.9 回收率試驗(yàn) 按供試品（批號18042902）說明書處方稱取空白輔料，精密加入相當(dāng)于標(biāo)示量（125mg）80%，100%，120%的對乙酰氨基酚對照品，各制備3份，按2.3供試品溶液的制備制成供試品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件測定峰面積，結(jié)果對乙酰氨基酚的回收率為96.81%～99.80%，平均回收率為98.62%，RSD=1.0%，表明該方法回收率良好。見表1。

表1 對乙酰氨基酚回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 中間精密度試驗(yàn) 分別于不同日期，不同檢驗(yàn)人員，不同高效液相色譜儀（Waters及Agilent）對批號18042902的樣品進(jìn)行溶出度測定，平均溶出量的RSD分別為0.85%，0.82%，0.59%，表明方法中間精密度良好。

2.11 溶出條件的選擇

2.1 1.1 溶出介質(zhì)及時(shí)間的選擇 參照《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)［8］對乙酰氨基酚片、膠囊、顆粒均采用鹽酸溶液（取稀鹽酸24mL，加水稀釋至1000mL）為溶出介質(zhì)，再參照《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》［11］，選用以下四種溶出介質(zhì)進(jìn)行考察：純化水；pH4.5的醋酸鹽緩沖液；pH6.8的磷酸鹽緩沖液；鹽酸溶液（取稀鹽酸24mL，加水稀釋至1000mL）。取供試品（批號18042902）按通則0931第二法槳法［12］，溶出介質(zhì)1000mL，轉(zhuǎn)速50r/min，測定溫度37℃±0.5℃，依法操作，分別經(jīng)5、10、15、20、30、45、60min時(shí)，取溶出液10mL，濾過，作為供試品溶液。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以取樣時(shí)間點(diǎn)的平均溶出量（%）為縱坐標(biāo)繪制溶出曲線。見圖2。

結(jié)果表明小兒氨酚黃那敏顆粒在以上四種溶出介質(zhì)中溶出曲線很相似，說明溶出介質(zhì)的pH值對其無顯著影響，所以選擇與藥典［8］相同的溶出介質(zhì)，即鹽酸溶液（取稀鹽酸24mL，加水稀釋至1000mL）；供試品在20min時(shí)到達(dá)平穩(wěn)期，20min和30min連續(xù)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出量達(dá)到90%以上，且差值在5%以內(nèi)，選擇溶出時(shí)間為20min。

圖2 溶出曲線

2.1 1.2 轉(zhuǎn)速的選擇 采用槳法，分別選擇50r/min及75r/min兩種轉(zhuǎn)速，分別經(jīng)5、10、15、20、30、45、60min時(shí)，取溶出液10mL，濾過，作為供試品溶液。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以取樣時(shí)間點(diǎn)的平均溶出量（%）為縱坐標(biāo)繪制溶出曲線。見圖3。結(jié)果表明增加轉(zhuǎn)速能使供試品在5min時(shí)的溶出量提高，但是樣品在20min時(shí)無論選擇50r/min或75r/min溶出量均能達(dá)到標(biāo)示量的90%以上，根據(jù)普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則［11］，50r/min可以滿足方法的要求，選擇轉(zhuǎn)速為50r/min。

圖3 溶出曲線

2.12 樣品測定 按正文測定方法分別對2018年所抽檢的10個(gè)廠家的13批樣品進(jìn)行溶出度的測定，測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明各廠家的平均溶出量均大于標(biāo)示量的85%。

表2 13批供試品測定結(jié)果

3 討論

3.1 波長選擇 精密稱取對乙酰氨基酚適量，加溶劑（以稀鹽酸24mL加水至1000mL）制成濃度為6.25μg/mL的溶液，以溶劑（以稀鹽酸24mL加水至1000mL）為空白，在200nm～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果在244 nm波長處有最大吸收；同時(shí)取2.6項(xiàng)下的對照品溶液用二極管陣列檢測器在200～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果在244nm波長處有最大吸收；結(jié)果與文獻(xiàn)［9］相同。選擇檢測波長為244nm。

3.2 流動相的選擇 參考文獻(xiàn)［9-10］的流動相選擇及征求意見稿［3］中檢查項(xiàng)下的流動相選擇，采用甲醇-水（80∶20）為流動相時(shí)，溶出介質(zhì)峰過大，采用0.05mol/L乙酸銨：甲醇（80∶20）為流動相，溶出介質(zhì)峰基本無影響，與其他的雜質(zhì)組分分離完全，理論板數(shù)大于5000，拖尾因子在0.95-1.05之間，峰形良好。

3.3 耐用性試驗(yàn) 改變柱溫、改變流速、改變流動相比例，使用不同品牌色譜柱分別對樣品（批號18042902）的平均溶出量進(jìn)行測定，并對主成分色譜峰情況進(jìn)行觀察，結(jié)果如下：柱溫在±5℃范圍內(nèi)（30～40℃）峰形均良好，平均溶出量的RSD%=0.23%；流速在±0.1mL/min范圍內(nèi)（0.9～1.1mL/min），峰形均良好，平均溶出量的RSD%=0.42%；改變流動相比例，使甲醇比例為14%，20%，26%，峰形均良好，平均溶出量的RSD%=0.98%；不同品牌C18柱（①Welch Ultimate?XB-C18；②Thermo BDS HYPERSIL C18；③DiKMA Platisil 5μm ODS；④ SHIMADZU-GL Inertsil ODS-3）峰形均良好，平均溶出量的RSD%=0.51%。結(jié)果表明該方法耐用性良好。

3.4 方法討論 由于標(biāo)準(zhǔn)［1］規(guī)定本品含對乙酰氨基酚（C8H9NO2）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105.0%，所以各廠家的溶出度普遍接近含量，但是通過樣品測定結(jié)果可以看出，同廠家的溶出度批間差異不大，但是各個(gè)廠家之間的溶出度差異比較明顯，這是由于不同的處方量及其生產(chǎn)工藝造成的，因此本方法具有一定的區(qū)分能力。可以為完善小兒氨酚黃那敏顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。