兩種鯉血液生理生化及部分免疫指標的比較分析

潘正坤 ，孫迪 ，左至恒 ，何天慶 ，陳嗣建 ，李啟標 ，卓孝磊 ，梁鈞然 ，鄒記興 ，周愛國 ，

（1.華南農(nóng)業(yè)大學海洋學院，廣東 廣州 510642；2.連山壯族瑤族自治縣農(nóng)業(yè)科學研究所（示范農(nóng)場）；廣東 連山 513200；3.清遠市農(nóng)業(yè)科技推廣服務中心，廣東 清遠 511510；4.碧波農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，廣東 肇慶 526000）

禾花鯉屬鯉科溫水性小型魚類，原產(chǎn)于廣西桂林，是中國特有的鯉科魚類，因以稻田禾花為食而得名。禾花鯉活動能力較弱，故而能在稻田小水體中養(yǎng)殖。近年來，由于其鮮香味美、生態(tài)健康的特點，深受消費者歡迎，成為鯉科魚類中新興熱門養(yǎng)殖品種。稻田養(yǎng)殖禾花鯉，充分提高了資源利用效率，水稻為禾花鯉提供了食物，禾花鯉排泄物也為水稻生長提供了營養(yǎng)元素，加速了物質(zhì)循環(huán)，提高了農(nóng)田綜合利用率。禾花鯉養(yǎng)殖周期短，市場價格高，經(jīng)濟效益可觀，全國多地已在推廣稻田養(yǎng)殖禾花鯉。麥溪鯉原產(chǎn)地肇慶高要區(qū)，養(yǎng)殖水源為優(yōu)質(zhì)的西江水，麥溪鯉生性活躍，游泳迅速，喜歡逆水而上，養(yǎng)出的魚肉質(zhì)肥嫩，甘香可口。麥溪鯉因其高品質(zhì)深受市場青睞，是肇慶的暢銷特產(chǎn)。2012年，麥溪鯉榮獲國家地理標志產(chǎn)品保護。

魚類的血液生理生化及免疫指標可以反映魚體自身抗病力，相關物質(zhì)的含量和活性可以在很大程度上衡量判斷養(yǎng)殖魚類的免疫能力，是魚類免疫能力的物質(zhì)基礎。研究不同養(yǎng)殖條件下的鯉魚血液生理生化及免疫指標，可以綜合評價不同養(yǎng)殖模式下鯉品種的免疫能力，以期為高效養(yǎng)殖模式的探索提供一定的理論依據(jù)。該試驗，選取清遠連山稻田養(yǎng)殖禾花鯉品種和肇慶的池塘養(yǎng)殖麥溪鯉品種，測定其血液生理生化及免疫指標，分析兩個鯉品種的免疫特性，為禾花鯉和麥溪鯉的健康養(yǎng)殖提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

禾花鯉采集于清遠連山壯族瑤族自治縣示范農(nóng)場稻田養(yǎng)魚示范基地（30～50 g），麥溪鯉采集于肇慶碧波農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司的池塘養(yǎng)殖品種（80～100 g）。飼養(yǎng)于水產(chǎn)養(yǎng)殖系實驗室水族箱，暫養(yǎng)一周。每組設3個平行，每個平行放養(yǎng)10尾魚，水族箱規(guī)格：1 m×1 m×0.8 m。采樣前禁食24 h，再進行樣品采集。

1.2 樣本和數(shù)據(jù)采集

從每個水族箱隨機捕撈5尾魚，稱重。用注射器從尾部抽取靜脈血，注入1.5 mL離心管，一部分用EDTA-二鉀抗凝，收集到離心管中用于生理指標的測定。另一部分以肝素鈉抗凝的魚血，靜置4 h后，4 000 r/min離心8 min，收集上清液用于免疫和生化指標的測定。

1.3 血清生理生化指標測定

參照徐革鋒等的方法[1]，使用全自動血細胞分析儀（型號為 Cell-Dum3700，購自美國 Abbott Laboratories公司），測定16項生理指標；參照張永泉等的方法[2]，使用全自動生化分析儀（型號為BS-200，購自深圳邁瑞公司），測定23種血液生化指標。用南京建成試劑盒測兩種鯉魚血清的超氧化物歧化酶、微量丙二醛、溶菌酶、酸性磷酸酶、谷胱甘肽過氧化物酶這五個免疫酶指標。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析方法

以“平均值±標準誤”表示試驗結果。應用SPSS 24.0軟件進行生物學統(tǒng)計分析，通過獨立樣本的t檢驗區(qū)分各生理生化指標差異的統(tǒng)計學意義。當P＞0.05表示沒有統(tǒng)計學意義性差異；0.01＜P＜0.05表示存在統(tǒng)計學意義性差異；P＜0.01表示存在極具統(tǒng)計學意義性差異。

表1 禾花鯉、麥溪鯉血液生理指標比較

2 結果與分析

2.1 兩種鯉魚生理生化指標的對比分析

由檢測結果可知，禾花鯉血液中的淋巴細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、平均紅細胞血紅蛋白含量、平均紅細胞血紅蛋白濃度分別為（26.3±3.36）%、（0.17±0.07）%、（1.14±0.24）1012/L、（89.3 ±8.17）g/L、（82.67 ±10.72）/pg 和（498±44.16）/%，顯著低于麥溪鯉（P＜0.05）。禾花鯉血液中的中性粒細胞百分比、白細胞計數(shù)分別為（71.57±4.22）%、（69.7±22.98）1012/L，高于麥溪鯉，但不顯著（P＞0.05）。禾花鯉血液中的單核細胞百分比、紅細胞壓積、血小板計數(shù)分別為（1.4±0.7）%、（17.63±3.77）%、（49.33±12.33）1012/L，低于麥溪鯉，但不顯著（P＞0.05）。兩種魚血液中的其他生理指標相差較小，差異不明顯。

由檢測結果可知，禾花鯉的血清總蛋白、血清白蛋白、球蛋白分別為（30.2±0.81）g/L、（10.77±0.44）g/L、（19.43±1.12）g/L，顯著高于麥溪鯉（P＜0.05）。禾花鯉的血清丙氨酸氨基轉移酶、血清天門冬氨酸氨基轉移酶、肌酐分別為（385.3±49.93）IU/L、（725.33±21.14）IU/L、（29.33±5.17）μmol/L，極顯著高于麥溪鯉（P＜0.01）。禾花鯉和麥溪鯉血液中的血鉀、血鈉、血氯、血總鈣、血糖相比差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表2 禾花鯉、麥溪鯉血液生化指標比較

2.2 免疫指標的對比分析

2.2.1 兩種鯉魚血清的超氧化物歧化酶（SOD酶）活性比較 由圖1可知，禾花鯉血清中SOD酶活性為（175±2.89）U/mL，略低于麥溪鯉（182.7±1.67）U/ml，但差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）說明兩種鯉魚之間SOD酶活性沒有顯著差異。

2.2.2 兩種鯉魚血清的丙二醛（MDA酶）含量比較由圖2可知，禾花鯉血清中微量丙二醛的含量為（5.09±0.22）nmol/mL，顯著高于麥溪鯉血清中微量丙二醛的含量（2.66±0.30）nmol/mL（P＜0.05）。說明兩種鯉魚血清中的丙二醛降解酶活性存在差異，且麥溪鯉的丙二醛酶活性強于禾花鯉。

2.2.3 兩種鯉魚血清的溶菌酶（LZM）活性比較 由圖3可知，禾花鯉血清中溶菌酶的活性為（221.7±11.3）U/mL，極顯著低于麥溪鯉血清中溶菌酶的活性（524.3±23.1）U/mL（P＜0.01）。說明麥溪鯉的血清溶菌酶活性極顯著強于禾花鯉。

2.2.4 兩種鯉魚血清的酸性磷酸酶（ACP）活性比較由圖4可知，禾花鯉血清中酸性磷酸酶活性為（3.58±0.173）U/mL，麥溪鯉血清中酸性磷酸酶活性為（3.56±0.127）U/mL，差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）說明兩種鯉魚之間超氧化物歧化酶活性沒有統(tǒng)計學意義差異。

2.2.5 兩種鯉魚谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性比較 由圖5可知，禾花鯉血清中谷胱甘肽過氧化物酶的活性為（106.7±5.2）U/mL，顯著低于麥溪鯉血清中谷胱甘肽過氧化物酶活性（140.4±3.1）U/mL（P＜0.05）。說明麥溪鯉的血清谷胱甘肽過氧化物酶活性明顯強于禾花鯉。

3 討論

3.1 兩個鯉品種血液生理生化指標的差異分析

研究表明，魚類血液的多項指標與其活動能力及食性密切相關，正常情況下，活動能力強的魚類高于活動能力弱的魚類[3]。該研究中，禾花鯉與麥溪鯉血液生理特點與其活動特性也表現(xiàn)出了上述規(guī)律。由表1中兩個鯉魚品種血液生理指標可知，禾花鯉血液中的淋巴細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、平均紅細胞血紅蛋白含量、平均紅細胞血紅蛋白濃度，顯著低于麥溪鯉（P＜0.05）。紅細胞能夠運輸氧氣及二氧化碳和調(diào)節(jié)機體免疫功能。一般情況下，魚類血液中的血紅蛋白數(shù)量與魚類耐低氧能力和水環(huán)境中的含氧量有關[4]。由表1可知，禾花鯉血液中的紅細胞數(shù)和平均紅細胞血紅蛋白含量都顯著低于麥溪鯉，說明禾花鯉的耐低氧能力弱于麥溪鯉。魚類白細胞承擔魚類機體特異性免疫和非特異性免疫的主要機能，白細胞的數(shù)量變化情況可以作為機體免疫指標[5-6]。由表1可知，禾花鯉血液中的嗜酸性粒細胞、淋巴細胞百分比顯著低于麥溪鯉。根據(jù)試驗結果分析，禾花鯉的耐低氧能力和凝血能力弱于麥溪鯉，與根據(jù)紅細胞數(shù)分析得出的禾花鯉的耐低氧能力弱于麥溪鯉的結論一致。魚類機體的營養(yǎng)和代謝情況可以在血液中的相關指反映出來。由表2中兩個鯉魚品種血液生化指標可知，禾花鯉的血清總蛋白、血清白蛋白、球蛋白顯著高于麥溪鯉，說明禾花鯉的吸收與代謝水平高于麥溪鯉。

丙氨酸氨基轉移酶與天門冬氨酸氨基轉移酶是重要的轉移酶，酶活性與肝細胞健康程度成反比。由表2可知，禾花鯉的兩種轉移酶活性均極顯著高于麥溪鯉，表明麥溪鯉肝臟比麥溪鯉更加健康。血清肌酐的濃度與腎小球濾過能力成反比，由表2可知，禾花鯉的肌酐濃度極顯著高于麥溪鯉，表明麥溪鯉腎小球的濾過能力比禾花鯉更強。

根據(jù)對兩個鯉品種血液生理指標的分析，得出結論禾花鯉的耐低氧能力和凝血能力弱于麥溪鯉。正常情況下，活動能力強的魚類耐低氧能力高于活動能力弱的魚類，研究結果與實際情況相符合。所以，在禾花鯉養(yǎng)殖中要注意保證水中的溶氧量，必要時采取人工增氧措施。在活魚運輸過程中要特別注意增氧，避免禾花鯉因缺氧死亡而造成損失。禾花鯉的血清總蛋白、血清白蛋白、球蛋白、丙氨酸氨基轉移酶、血清天門冬氨酸氨基轉移酶、肌酐顯著高于麥溪鯉，表明禾花鯉的蛋白質(zhì)吸收與代謝水平高于麥溪鯉，但麥溪鯉的肝臟和腎臟的解毒、濾過能力強于麥溪鯉。肝膽綜合征已成為困擾水產(chǎn)業(yè)的一個流行病癥，在禾花鯉的池塘養(yǎng)殖中，一方面要合理投喂、保持水質(zhì)，另一方面可在飼料中加入維生素或中藥制品，進行禾花鯉的保肝護肝。

3.2 兩個鯉品種血清免疫指標的差異分析

在測定的兩個鯉品種 5個血液免疫指標中，麥溪鯉血液中的丙二醛酶（MDA）、溶菌酶（LZM）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）均顯著強于禾花鯉（P＜0.05）。魚類的免疫能力以非特異性免疫為主，以上五種酶類在一定程度上代表了兩個鯉品種的抗氧化性能，可以作為分析不同鯉魚品種免疫能力的依據(jù)。丙二醛是生物體內(nèi)發(fā)生過氧化反應的終產(chǎn)物，可引起蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的交聯(lián)聚合，具有細胞毒性[7]。其能經(jīng)血液被運送到肝臟中，在肝臟中分解代謝，過多會導致代謝異常，損傷肝臟，進而影響機體的正常代謝。試驗結果顯示麥溪鯉血液中丙二醛的濃度顯著低于禾花鯉，表明其肝臟中分解丙二醛相關酶的活性強于禾花鯉，代謝丙二醛能力更強。溶菌酶可與病毒蛋白直接結合，與核酸、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。實驗結果顯示麥溪鯉血液中溶菌酶的活性顯著高于禾花鯉，表明其水解病菌的能力強于禾花鯉，更能抵御水體中的細菌、病毒。谷胱甘肽過氧化物酶可以起到保護細胞、維持機體正常生理功能的作用[8]。其含量的變化可以間接反映環(huán)境中有毒污染物質(zhì)的存在，在污染物的存在下，谷胱甘肽過氧化物酶含量可能會發(fā)生增加或者抑制[9]。試驗結果顯示麥溪鯉血液中谷胱甘肽過氧化物酶的活性顯著高于禾花鯉，表明其抵御環(huán)境中有毒有害物質(zhì)和抗氧化能力強于禾花鯉。

綜合試驗結果，可以發(fā)現(xiàn)，所測定的五項免疫指標中，麥溪鯉有三項顯著高于禾花鯉，其余二項差異不顯著，可以確定麥溪鯉的綜合免疫能力強于禾花鯉。該試驗的禾花鯉品種采集自清遠連山，麥溪鯉品種采集自肇慶。禾花鯉的養(yǎng)殖模式為稻田養(yǎng)殖，相比麥溪鯉的池塘養(yǎng)殖，稻田水體小，水體環(huán)境日變化較大，故在養(yǎng)殖過程中應加強巡田、定期觀測水質(zhì)、適時調(diào)節(jié)水深。由于禾花鯉市場價格較高，已有地區(qū)探索進行池塘養(yǎng)殖，養(yǎng)殖標準經(jīng)常是參考普通鯉魚品種的池塘養(yǎng)殖方法，采用高密度、高投入、高產(chǎn)出的養(yǎng)殖模式，但根據(jù)該試驗的測定結果，禾花鯉的免疫能力較普通鯉魚品種較弱。所以，在禾花鯉的養(yǎng)殖過程中，適當減少養(yǎng)殖密度，加強水質(zhì)調(diào)控，投喂優(yōu)質(zhì)餌料，不可為追求高收益而盲目進行高密度養(yǎng)殖。

綜上分析，禾花鯉的免疫能力、耐低氧能力和肝臟、腎臟的解毒能力均在一定程度上弱于麥溪鯉?？梢哉J為禾花鯉的養(yǎng)殖難度大于麥溪鯉，對養(yǎng)殖條件要求較高，這可能是禾花鯉市場價遠遠高于麥溪鯉的原因之一。在養(yǎng)殖禾花鯉的過程中，應當考慮到禾花鯉的上述特性，做好水環(huán)境調(diào)控、增氧、保肝護肝等工作。該試驗得出的結論與實際情況較為符合，可以在一定程度上作為禾花鯉和麥溪鯉養(yǎng)殖參考。若要更深入禾花鯉與麥溪鯉的免疫與生理生化特性，可采集不同養(yǎng)殖模式中的禾花鯉或麥溪鯉做進一步檢測，以便為兩個鯉品種的健康養(yǎng)殖提供科學依據(jù)。