5種中草藥及復配液的抑菌性研究

王興娜 黃瑞琪 鹿小詩 矯強

摘要?挑選了黃連、柴胡、甘草、板藍根、黃芪這5種中草藥，采用水提法制備單劑中草藥的提取液，并按照排列組合法，將5種提取液按照相同比例進行混合，得到不同配方的復配液，共計31種?？莶菅挎邨U菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌作為供試菌，采用牛津杯法對3種供試菌進行體外抑菌，經對比分析后發(fā)現(xiàn)，ML 6（柴胡、甘草、板藍根）對枯草芽孢桿菌的抑菌效果最好，其抑菌圈直徑最大為24.6 mm，ML 3（黃連、柴胡、黃芪）對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌能力均較強，抑菌圈直徑分別為22.5和20.8 mm。

關鍵詞?致病菌，中草藥，復配液，抑菌性

中圖分類號?R285文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）06-0156-03

Abstract?Five kinds of Chinese herbal medicine were selected to do experiments，such as Chinese goldthread，radix bupleuri，liquorice，isatis，astragalus membranaceus.The extracts of Chinese herbal medicine were prepared by water formulation，and five kinds of extracts were mixed according to the same proportion to obtain a total of 31 different compounds.Bacillus subtilis，Escherichia coli and Staphylococcus aureus were choosed for the test bacteria，the Oxford Cup method was used to inhibit bacteria in vitro of three kinds of test bacteria，after analyzing the average of three groups data in the parallel experiments，we found that ML 6 （radix bupleuri，liquorice，isatis） had the best bacteriostatic effect on Bacillus subtilis，and the diameter of the fungus ring was 24.6 mm at the maximum，ML 3 （Chinese goldthread，radix bupleuri，astragalus membranaceus） had strong antibacterial activity against E.coli and Staphylococcus aureus，and the diameter of the fungus ring was 22.5 and 20.8 mm，respectively.

Key words?Pathogen，?Chinese herbal，?Compound solution，Antimicrobial

抗生素的濫用致使許多細菌和病毒突變，出現(xiàn)了耐藥性的細菌和病毒，所以從天然藥物中篩選毒副作用小的高效抑菌中草藥及其有效成分的復配物刻不容緩[1]。中草藥的組成主要包含植物類藥（根、莖、葉、果）、動物類藥（臟腑、皮、骨或器官等）以及礦物類藥[2]。因為植物藥成分在中醫(yī)藥材中所占比例較大，所以中藥也稱中草藥。目前，全國各地使用的中藥大約在5 000種左右，再將各種藥材按照不同比例、在不同條件下相配而形成的復方藥劑更是多不勝數(shù)。中草藥在我國有上千年研究歷史，并在今天形成了一門獨立的學科——本草學。

據(jù)報道，很多草藥都有抗菌和抗病毒的作用，但作用機理不同于西藥，其中原理也較為復雜。中草藥可以調節(jié)機體的免疫功能[2]，可以抗氧化、清除自由基[3-4]，有的中草藥具有直接的抗菌、抗病毒作用[5-6]，已有試驗證實上百種中草藥都具有抗菌或抗病毒的作用，且大多數(shù)是清熱類藥物，但相比于抗菌素等西藥其直接抗菌作用不如西藥好，同時有很多試驗還表明，復方中藥的抗菌作用比單味藥物的抗菌作用強。筆者選用黃連、柴胡、甘草、板藍根、黃芪5種草藥，研究其在體外的抑菌能力。

1?材料與方法

1.1?材料

黃連、柴胡、甘草、板藍根、黃芪，均購于濟南同仁堂，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌，均為齊魯理工學院微生物學實驗室保藏菌種。培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基。

1.2?試驗方法

1.2.1?中草藥水提取液的制備。

將黃連、柴胡、甘草、板藍根、黃芪這5種中草藥除去碎石塊、砂礫等可見雜質，并放入烘箱中30 min進行烘干[7]。分別稱取已烘干的單味中草藥25 g，按料液比為1∶10的比例用蒸餾水充分浸泡2 h，混合后，用傳統(tǒng)煎煮法，強火加熱至煮沸后再以文火慢煎1 h，再用紗布和濾紙進行過濾，收集濾液，置于冰箱中4 ℃保存，收集濾渣，按料液比為1∶5的比例加入蒸餾水125 mL浸泡2 h，再按照上述方法煎煮約1 h，收集濾液，合并2次濾液蒸發(fā)至25 mL，使每毫升藥液中含有1 g原藥，制成所需的5種單味煎劑[8-9]。將5種單味煎劑按照數(shù)學上排列組合的方法，將單味煎劑按相同比例進行兩兩混合、三三混合、四四混合和5種混合，得到26種混合樣液（表1）和5種單味樣液，置于冰箱中4 ℃保存。

1.2.2?中草藥復方制劑的抑菌試驗。

采用牛津杯法：吸取供試菌懸液0.1 mL，涂布于LB培養(yǎng)基表面，在培養(yǎng)基表面上等距離放置無菌的牛津杯，吸取200 μL待測復方制劑打入牛津杯中。37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～24 h后，測定抑菌直徑R。以氨芐青霉素（50 μg/mL）、無菌水為對照。抑菌圈直徑R<10 mm 抑菌能力較弱，10～14 mm 抑菌能力一般，15～20 mm 抑菌能力較好，>20 mm 抑菌能力突出[10]。

2?結果與分析

2.1?單劑中草藥對供試菌的抑菌作用研究

從5種中草藥單劑提取液以及對照組的抑菌效果（圖1）可以看出，不同種中草藥提取液在對不同菌樣的抑制能力上表現(xiàn)出了很大的差異。相對于中草藥提取液而言，氨芐青霉素對3種菌樣的綜合抑菌效果較為強烈，5種單劑中草藥提取液都對枯草芽孢桿菌的抑制作用較為強烈，對大腸桿菌的抑制作用較弱。

2.2?復配液對供試菌的抑菌作用研究?5種中草藥提取液兩兩復配得到的復配液的抑菌效果見圖2。從圖2可以看出，經復配后的大部分提取液其抑菌能力均有不同程度的提升，MQ 1（黃連、柴胡）對大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制能力較強，但在10種復配液中對金黃色葡萄球菌的抑制能力排名最后，MQ 2（黃連、甘草）對3種菌的抑制能力較為平均且效果為中上，其抑菌圈直徑在17.0～17.5 mm，在10種復配液中對金黃色葡萄球菌的抑制能力最強，MQ 3（黃連、板藍根）對3種菌的抑制能力較高，在10種復配液中對大腸桿菌的抑制能力最強，MQ 4（黃連、黃芪）為黃芪和黃連復配液，2種藥劑在單獨使用時抑菌效果較為明顯，但混合后抑菌能力卻有了大幅度的下降，MQ 5（柴胡、甘草）為柴胡和甘草復配液，二者混合后在對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制能力上有了較大幅度提升，但對枯草芽孢桿菌有了大幅度的下降，MQ 6（柴胡、板藍根）復配液在10種復配液中對枯草芽孢桿菌的抑制能力最強，MQ 7（柴胡、黃芪）、MQ 8（甘草、板藍根）、MQ 9（甘草、黃芪）對3種菌的抑制效果較為一般，MQ 10（板藍根、黃芪）對枯草芽孢桿菌的抑制能力僅次于MQ 6，排名第二。綜上所述，中草藥提取液經復配后在對3種供試菌抑菌圈直徑的上限和下限上均有提升，且有部分復配液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制能力超過了抗生素氨芐青霉素。對大腸桿菌抑制能力從強到弱依次為MQ 3>MQ 1>MQ 9>MQ 6>MQ 2、MQ 4>MQ 5>MQ 7>MQ 8 >MQ 10，對枯草芽孢桿菌抑制能力從強到弱依次為MQ 6>MQ 10>MQ 1>MQ 3、MQ 8>MQ 5>MQ 9>MQ 2>MQ 7>MQ 4，對金黃色葡萄球菌抑制能力從強到弱依次為MQ 2>MQ 3>MQ 8>MQ 10>MQ 4、MQ 7>MQ 9>MQ 5>MQ 6>MQ 1。

5種中草藥提取液三三復配得到的復配液對3種菌的抑菌效果見圖3。從圖3可以直觀地看出，與兩兩混合復配液相比，三三混合復配液的抑菌能力在整體上有了極大的提高，特別是枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑均值大于>20 mm。其中ML 3（黃連、柴胡和黃芪）復配液在對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌能力在10種復配液中位居第一，活性最高，ML 4（黃連、甘草和板藍根）復配液對枯草芽孢桿菌的抑制能力最強，對金黃色萄球菌和大腸桿菌的抑制能力也較好，ML 7（柴胡、甘草和黃芪）復配液對大腸桿菌的抑菌能力最弱，且達到了目前為止所有復配液的最低值，ML 8（柴胡、板藍根、黃芪）對枯草芽孢桿菌的抑菌能力最弱，并且在對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制能力上也并不突出，ML 10（甘草、板藍根、黃芪）對金黃色葡萄球菌的抑菌能力最弱，但對枯草芽孢桿菌的抑菌能力較好。綜上所述，三三復配液在整體抑菌能力上的確優(yōu)于兩兩復配液，不論是抑菌圈直徑的平均值還是上下限都有了一定程度的提高。

5種中草藥提取液四四復配與5種混合復配液抑菌效果見圖4。從圖中可以看出，枯草芽孢桿菌依舊對復配液較為敏感，但與兩兩復配液和三三復配液相比沒有較大的提升。對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制能力也并不理想。其中AS 4（黃連、甘草、板藍根、黃芪）對枯草芽孢桿菌的抑制能力在所有藥液中最強，AS 2（黃連、柴胡、甘草、黃芪）和AS 3（黃連、柴胡、板藍根、黃芪）在這6組復配液中的綜合抑菌效果較好，但仍低于前面兩兩復配液和三三復配液效果，F(xiàn)S為5種草藥的混合藥液，但在對3種供試菌的抑制能力并沒有特別出色甚至低于單劑藥液的抑菌能力。

綜合以上所有結果表明，中草藥中的各種成分與其他中草藥復合后，可能既存在著相互增益的作用，又存在著拮抗作用，并不是所有效果好的單劑草藥經復合后其抑菌效果都能得到增強，在實際中還需要根據(jù)具體病原菌的特性，研制藥劑，并多次進行平行試驗，確定其抑菌能力。

3?結論

通過查閱資料和文獻初步篩選出抑菌能力較好的5種中草藥：黃連、柴胡、甘草、板藍根、黃芪，對上述中草藥進行煎煮，得到每1 mL中含有1 g原藥的單劑提取液，再按照比例配成兩兩復配液（1∶1）、三三復配液（1∶1∶1）、四四復配液（1∶1∶1∶1）和5種等比混合液，并測試其體外抑菌效果。試驗過程中加入了無菌水作為陰性對照且排除了其對試驗的干擾，還加入了抗生素氨芐青霉素作為陽性對照，經3組平行試驗后得到試驗數(shù)據(jù)，對其進行對比分析，結果表明，復配液ML 3（黃連、柴胡、黃芪）、復配液ML 4（黃連、甘草、黃芪）的綜合抑菌效果最好，其中ML 3對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用在所有復配液中最強，ML 4次之，復配液MQ 4（黃連、黃芪）、MQ 1（黃連、柴胡）、AS 4（黃連、甘草、板藍根、黃芪）分別對枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌能力在所有復配液中最弱。

從上述2個現(xiàn)象中發(fā)現(xiàn)，以上5種復配液中均有黃連出現(xiàn)，黃連與柴胡和黃芪一同混合時抑菌效果最強，但與黃芪和柴胡單獨混合時抑菌能力卻大幅度下降，原因可能是黃連中的某種成分可能與黃芪和柴胡中的藥物成分有拮抗作用，使得MQ 1對金黃色葡萄球菌的抑制能力減弱，但對枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的效果依舊強勁，而黃連和黃芪單獨使用時，其生物活性都很高，對3種菌的抑制能力都較強，推測2種不同的抑菌機制在混合后產生拮抗，致使有效成分的抑菌能力減弱。ML 4中加入了板藍根后，對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制效果也大大減弱，可能也是由于其某成分與其他3種提取液有拮抗作用?？偟膩碚f，在所有復配類型中，三三混合的效果最突出，優(yōu)于其他混合和單劑提取液，根據(jù)三三混合方法有利用提升抑菌效果。

參考文獻

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