五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠肺泡灌洗液中Th1/Th2、Th17/Treg失衡及趨化因子的影響

傅榕冰，魏義杰，虎春艷，伍林澤，童曉云，張雅瓊，黃 豐*

(1.云南中醫(yī)藥大學(xué)，昆明 650500； 2.騰沖市中醫(yī)醫(yī)院，云南 騰沖 679100； 3.云南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，昆明 650021)

支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱(chēng)“哮喘”)是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的慢性氣道炎癥，炎性細(xì)胞是其發(fā)病機(jī)制之一。其中，嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在哮喘的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用[1-2]。 以往認(rèn)為，輔助性 T淋巴細(xì)胞1(T helper1， Th1)和輔助性 T淋巴細(xì)胞2(T helper2， Th2)失衡導(dǎo)致 Th2細(xì)胞優(yōu)勢(shì)是介導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞在哮喘發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮作用的主要免疫學(xué)機(jī)制，但隨著現(xiàn)代研究深入，發(fā)現(xiàn)在嗜酸性粒細(xì)胞參與哮喘發(fā)病的同時(shí)，中性粒細(xì)胞在哮喘發(fā)病過(guò)程中也扮演了重要的角色[3-5]。輔助性T淋巴細(xì)胞17(T helper17，Th17)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)失衡則是介導(dǎo)中性粒細(xì)胞募集至肺中，參與氣道炎癥的重要機(jī)制[6]。目前糖皮質(zhì)激素被認(rèn)為是治療哮喘最有效的抗炎藥物之一，但長(zhǎng)期服用糖皮質(zhì)激素給人體帶來(lái)較大副作用，一定程度地影響了其在臨床上的應(yīng)用。近年來(lái)，民族藥在防治哮喘方面取得了一定進(jìn)展。傣藥五寶膠囊(雅叫哈頓)，也叫五寶散，為傣醫(yī)的經(jīng)典藥方，具有清火解毒、除風(fēng)止痛、咳嗽咳痰的功效，臨床上多用于咽喉腫痛、咳嗽咯血等呼吸道疾病，研究表明其具有抗炎等作用[7-10]，我們前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)五寶膠囊有拮抗哮喘的作用，為了更好的闡釋其作用機(jī)制，本研究采用 OVA復(fù)制哮喘小鼠模型，觀察五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠BALF中Th1/ Th2、Th17/Treg失衡的特異性細(xì)胞因子及趨化因子的調(diào)節(jié)作用，探討五寶膠囊發(fā)揮防治哮喘的可能機(jī)制，為五寶膠囊在哮喘的應(yīng)用中提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)6～8周齡雌性BALB/c小鼠，體重為18～22 g，共40只，購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司 [SCXK(遼)2015-0001]。小鼠飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障環(huán)境中[SYXK(滇)K2017-005]，溫度：22℃～24℃，濕度：45%～55%。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)審查，符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利相關(guān)規(guī)定，倫理審批編號(hào)：R-06201910。本實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用指南》進(jìn)行，所有實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的“3R原則”，并給予動(dòng)物人道關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

五寶膠囊，云南西雙版納藥業(yè)有限公司，批號(hào)：170703；地塞米松(批號(hào)：D1756)與卵清蛋白(批號(hào)：SLBH7924 V)，美國(guó)Sigma公司；納米級(jí)Al(OH)3粉末，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號(hào)：38701；快速快速瑞氏-吉姆薩染液，南京建成科技有限公司，批號(hào)：D010；Eotaxin(批號(hào)：2213080441)、MCP-1(批號(hào)：A28780431)、IFN-γ(批號(hào)：A28081244)、IL-4(批號(hào)：A20480141)、IL-17A(批號(hào)：A21780741)、IL-10(批號(hào)：A21080946)ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司；IL-8(批號(hào)：M181106-104a)ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)于深圳欣博盛生物科技有限公司。

超聲霧化儀，德國(guó)百瑞公司，型號(hào)：INQUA NEB plus；分析天平，上海奧豪斯儀器有限公司，型號(hào)：AR224CN；多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)美谷分子，型號(hào)：spectraMax plus384；離心機(jī)，德國(guó)海蒂斯公司，型號(hào)：1706；超低溫冰箱，美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司，型號(hào)：8920。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組

40 只健康的雌性BALB/c小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為5組，分別為：正常組(Control)、模型組(Model)、地塞米松組(Dex)、五寶膠囊低劑量組(WBJN-L)、五寶膠囊高劑量組(WBJN-H)，每組8只。

1.3.2 動(dòng)物造模與給藥

除正常組外，其余各組于實(shí)驗(yàn)第1、8、15 天腹腔注射0.2 mL含Al(OH)3的OVA致敏液(OVA：1 mg/mL；Al(OH)3∶5 mg/mL)，正常組則以0.2 mL生理鹽水代替。于實(shí)驗(yàn)第21天起，正常組與模型組均給予生理鹽水灌胃，劑量為10 mL/kg；地塞米松組給予地塞米松溶液灌胃給藥，劑量為1 mg/kg；五寶膠囊高、低劑量組分別給予相應(yīng)濃度的五寶膠囊溶液灌胃給藥，劑量分別為1 g/kg和0.5 g/kg。灌胃1 h后，將小鼠置于霧化器內(nèi)霧化激發(fā)，正常組以生理鹽水霧化，其余各組以2% OVA激發(fā)液霧化，每天1次，每次30 min，持續(xù)7 d。

1.3.3 小鼠行為學(xué)的觀察

將小鼠霧化后出現(xiàn)點(diǎn)頭、舔足、嗆咳、抓耳撓腮、俯臥少動(dòng)、腹部節(jié)律性收縮等呼吸困難癥狀作為初步判斷模型成功的標(biāo)準(zhǔn)。霧化激發(fā)后3 d，小鼠在前15 min首次出現(xiàn)腹肌節(jié)律性收縮的時(shí)間稱(chēng)為引喘潛伏期，統(tǒng)計(jì)時(shí)間為“s”，記錄每組每只小鼠3 d引喘潛伏期的平均值。

1.3.4 ELISA法檢測(cè)哮喘小鼠BALF中IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10、Eotaxin、IL-8、MCP-1的含量

實(shí)驗(yàn)小鼠最后一次霧化激發(fā)24 h后，以0.01 mL/g腹腔注射1%的戊巴比妥鈉麻醉小鼠，用75%酒精消毒小鼠胸腹腔，暴露胸腔，行氣管插管術(shù)，用血管夾夾閉右肺， 以每次0.3 mL的磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)灌洗左肺2次，每次均反復(fù)抽吸3遍，最后合并2次所得的灌洗液。將所得的 BALF于1000 r/min，4℃離心15 min，取上清液嚴(yán)格按照ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞因子的檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，聯(lián)合吸光度求出各個(gè)細(xì)胞因子的含量。下層細(xì)胞沉淀(200 μL PBS)重懸成細(xì)胞懸液用于各類(lèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)。

1.3.5 快速瑞氏-吉姆薩染色法檢測(cè)哮喘小鼠BALF中的白細(xì)胞數(shù)目

用細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)10 μL BALF下層細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算出細(xì)胞懸液中的細(xì)胞總數(shù)，再取20 μL細(xì)胞懸液于玻片上制成細(xì)胞涂片，按照快速瑞氏-吉姆薩染色說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量的計(jì)數(shù)，所得的比例乘以細(xì)胞總數(shù)即為各類(lèi)細(xì)胞的數(shù)目。

1.3.6 HE和PAS染色檢測(cè)哮喘小鼠肺組織病理學(xué)

取小鼠右肺中葉組織，用PBS沖洗，并用濾紙吸干，置于4%多聚甲醛固定液中固定24 h后，用石蠟包埋，進(jìn)行HE染色觀察小鼠肺組織氣管增厚和炎性浸潤(rùn)情況；PAS染色觀察小鼠氣管周?chē)ひ悍置谇闆r。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠霧化后行為學(xué)觀察

各組小鼠霧化激發(fā)前，狀態(tài)均良好。霧化激發(fā)后，模型組小鼠出現(xiàn)點(diǎn)頭、舔足、抓腮、呼吸急促、毛發(fā)雜亂無(wú)光澤、活動(dòng)量減少等現(xiàn)象；正常組小鼠則無(wú)上述表現(xiàn)；地塞米松及五寶膠囊藥物組上述現(xiàn)象均減輕。小鼠引喘潛伏期結(jié)果顯示，給予OVA霧化激發(fā)后，模型組引喘潛伏期明顯比正常組短(P<0.01)，地塞米松及五寶膠囊低、高劑量組均較模型組長(zhǎng)(P<0.01)(見(jiàn)圖1)。

注：Control：正常組；Model：模型組；Dex：地塞米松組；WBJN-L：五寶膠囊低劑量組；WBJN-H：五寶膠囊高劑量組。與正常組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。圖1 五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠引喘潛伏期的影響Note. Control, Control group. Model, Model group. Dex, Dexamethasone group. WBJN-L, Wubao capsule low-dose group. WBJN-H, Wubao capsule high-dose group. Compared with Control group, #P<0.05，##P<0.01. Compared with Model group, *P<0.05，**P<0.01.Figure 1 Effect of Wubao capsule on asthma incubation period in asthmatic mice

2.2 各組小鼠肺組織氣管增厚和炎性浸潤(rùn)的比較

小鼠肺組織HE染色圖顯示，正常組小鼠氣道上皮較完整，氣道與肺泡之間炎性細(xì)胞較少；模型組小鼠氣道壁增厚嚴(yán)重，氣道與肺泡周?chē)艿窖仔约?xì)胞浸潤(rùn)；經(jīng)地塞米松及五寶膠囊低、高劑量干預(yù)后，小鼠肺組織氣道壁增厚情況不同程度減輕，氣道與肺泡周?chē)仔约?xì)胞均不同程度地減少(見(jiàn)圖2)。

2.3 各組小鼠肺組織黏液增生情況的比較

小鼠肺組織PAS染色圖片顯示，正常組小鼠氣管周?chē)鸁o(wú)黏液分泌，與正常組相比，模型組小鼠氣管周?chē)ひ宏?yáng)性表達(dá)明顯(圖中紫紅色區(qū)域)，經(jīng)地塞米松及五寶膠囊高、低劑量干預(yù)后，哮喘小鼠的黏液分泌情況明顯減輕(見(jiàn)圖3)。

2.4 各組小鼠BALF中各類(lèi)白細(xì)胞數(shù)目的比較

各組小鼠BALF中各類(lèi)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，模型組與正常組相比，BALF中白細(xì)胞總數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)均顯著增多，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；給予地塞米松及五寶膠囊干預(yù)后，地塞米松組及五寶膠囊高劑量組與模型組相比，小鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)均不同程度降低，其中地塞米松組均明顯降低(P<0.01，P<0.05)；五寶膠囊低劑量組與模型組相比，淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)均不同程度降低(P<0.01，P<0.05)(見(jiàn)圖4)。

注：A：正常組；B：模型組；C：地塞米松組；D：五寶膠囊低劑量組；E：五寶膠囊高劑量組。圖2 五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠肺組織氣管增厚和炎性浸潤(rùn)的影響(HE染色)Note. A, Control group. B, Model group. C, Dexamethasone group. D, Wubao capsule low-dose group. E, Wubao capsule high-dose group.Figure 2 Effect of Wubao capsule on tracheal thickness and inflammatory infiltration in lung tissue of asthmatic mice(HE staining)

注：A：正常組；B：模型組；C：地塞米松組；D：五寶膠囊低劑量組；E：五寶膠囊高劑量組。圖3 五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠肺組織黏液分泌的影響(PAS染色)Note. A,Control group. B, Model group. C, Dexamethasone group. D, Wubao capsule low-dose group. E, Wubao capsule high-dose group.Figure 3 Effect of Wubao capsule on mucus secretion in lung tissue of asthmatic mice(PAS staining)

2.5 各組小鼠BALF中IFN-γ與IL-4的比較

各組小鼠BALF中IFN-γ與IL-4的結(jié)果顯示，模型組與正常組相比，小鼠BALF中IFN-γ顯著降低(P<0.01)，IL-4顯著升高(P<0.01)；經(jīng)地塞米松及五寶膠囊干預(yù)后，IFN-γ均明顯升高(P<0.01)，IL-4均明顯降低(P<0.01)(見(jiàn)圖5)。

2.6 各組小鼠BALF中IL-17A與IL-10的比較

各組小鼠BALF中IL-17A與IL-10的結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組小鼠BALF中IL-17A顯著升高(P<0.01)，IL-10明顯降低(P<0.05)；經(jīng)地塞米松及五寶膠囊干預(yù)后，IL-17A均不同程度降低(P<0.01，P<0.05)，IL-10均升高(P<0.05)(見(jiàn)圖6)。

2.7 各組小鼠BALF中趨化因子的比較

各組小鼠BALF中趨化因子的結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組小鼠BALF中Eotaxin，IL-8，MCP-1均顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；經(jīng)地塞米松及五寶膠囊高、低劑量干預(yù)后，與模型組相比，小鼠BALF中各個(gè)趨化因子均不同程度降低(P<0.01，P<0.05)(見(jiàn)圖7)。

注：Control：正常組；Model：模型組；Dex：地塞米松組；WBJN-L：五寶膠囊低劑量組；WBJN-H：五寶膠囊高劑量組。與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。圖4 五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠BALF中白細(xì)胞數(shù)目的影響Note. Control, Control group. Model, Model group. Dex, Dexamethasone group. WBJN-L, Wubao capsule low-dose group. WBJN-H, Wubao capsule high-dose group. Compared with Control group, #P<0.05，##P<0.01. Compared with Model group, *P<0.05，**P<0.01.Figure 4 Effect of Wubao capsule on the number of white blood cells in BALF of asthmatic mice

注：Control：正常組；Model：模型組；Dex：地塞米松組；WBJN-L：五寶膠囊低劑量組；WBJN-H：五寶膠囊高劑量組。與正常組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。圖5 五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠Th1/Th2失衡的影響Note. Control, Control group. Model, Model group. Dex, Dexamethasone group. WBJN-L, Wubao capsule low-dose group. WBJN-H, Wubao capsule high-dose group. Compared with Control group, #P<0.05，##P<0.01. Compared with Model group, *P<0.05，**P<0.01.Figure 5 Effect of Wubao capsule on Th1/Th2 imbalance in asthmatic mice

注：Control：正常組；Model：模型組；Dex：地塞米松組；WBJN-L：五寶膠囊低劑量組；WBJN-H：五寶膠囊高劑量組，與正常組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。圖6 五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠Th17/Treg失衡的影響Note. Control, Control group. Model, Model group. Dex, Dexamethasone group. WBJN-L, Wubao capsule low-dose group. WBJN-H, Wubao capsule high-dose group. Compared with Control group, #P<0.05，##P<0.01. Compared with Model group, *P<0.05，**P<0.01.Figure 6 Effect of Wubao Capsule on Th17/Treg imbalance in asthmatic mice

注：Control：正常組；Model：模型組；Dex：地塞米松組；WBJN-L：五寶膠囊低劑量組；WBJN-H：五寶膠囊高劑量組。與正常組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。圖7 五寶膠囊對(duì)哮喘小鼠BALF中對(duì)趨化因子Eotaxin、IL-8、MCP-1的影響Note. Control, Control group. Model, Model group. Dex, Dexamethasone group. WBJN-L, Wubao capsule low-dose group. WBJN-H, Wubao capsule high-dose group. Compared with Control group, #P<0.05，##P<0.01. Compared with Model group, *P<0.05，**P<0.01.Figure 7 Effect of Wubao capsule on Chemokin es Eotaxin、IL-8、MCP-1in BALF of asthmatic mice

3 討論

哮喘是由Th1、Th2、Th17、Treg等細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。Th1細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，主要通過(guò)激活巨噬細(xì)胞來(lái)清除細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌及病原微生物來(lái)發(fā)揮作用[11]，其分泌的細(xì)胞因子主要有干擾素-γ(Interferon-γ，IFN-γ)、白介素-2(Interleukin-2，IL-2)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)等，其中IFN-γ是其產(chǎn)生的特異性細(xì)胞因子，在一定條件下，能夠促進(jìn)Th1細(xì)胞分化，其對(duì)Th2具有免疫負(fù)向調(diào)節(jié)的功能，是Th2細(xì)胞的負(fù)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，可抑制Th2的分化及IgE的生成，從而減輕氣道炎癥[12]。Th2細(xì)胞是體液免疫應(yīng)答中的一種重要的免疫細(xì)胞，在嗜酸性粒細(xì)胞為主的炎癥中發(fā)揮重要的作用，對(duì)細(xì)胞外病原體微生物的清除具有一定的影響，并參與變態(tài)反應(yīng)。白介素-4(Interleukin-4，IL-4)是其分泌的特異性細(xì)胞因子，其與嗜酸性粒細(xì)胞的激活密切相關(guān)[13]。在正常的機(jī)體中，IFN-γ與IL-4相互拮抗，主要維持著Th1和Th2細(xì)胞功能的平衡[14]。當(dāng)機(jī)體受到變應(yīng)原入侵時(shí)，Th2細(xì)胞增多，Th1/Th2比例失衡，Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答，分泌大量IL-4等細(xì)胞因子，抑制IFN-γ的分泌，從而誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌IgE，IgE與肥大細(xì)胞結(jié)合，引起肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺、白三烯等炎癥介質(zhì)，進(jìn)而使杯狀細(xì)胞增生，杯狀細(xì)胞分泌黏蛋白，導(dǎo)致氣道粘液高分泌，氣管增厚，氣道收縮等，進(jìn)而導(dǎo)致氣道狹窄引發(fā)哮喘[15-16]。另一方面IL-4的增多可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞分泌嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)，Eotaxin能夠與嗜酸性粒細(xì)胞的趨化因子受體 3(CC-chemokine receptor 3，CCR3)特異性結(jié)合，使其向肺中募集、活化，促進(jìn)其脫顆粒，釋放炎性介質(zhì)，從而導(dǎo)致氣道炎癥和氣道高反應(yīng)的發(fā)生[17]。此外，在哮喘發(fā)病過(guò)程中，來(lái)源于C-C 類(lèi)趨化因子家族的單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractic protein-1，MCP-1)一方面能夠誘導(dǎo)單核細(xì)胞的呼吸爆發(fā)和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，介導(dǎo)單核細(xì)胞的遷移和粘附功能[18]；另一方面，MCP-1的增多能夠抑制INF-γ生成來(lái)拮抗Th1型反應(yīng)，通過(guò)促進(jìn)抗原活化T細(xì)胞、IL-4的生成來(lái)誘導(dǎo)Th2型反應(yīng)，在哮喘過(guò)程中扮演了重要的角色[19]。本研究結(jié)果顯示，哮喘小鼠IL-4升高、IFN-γ明顯降低，提示Th1/Th2細(xì)胞失衡，趨化因子Eotaxin、MCP-1升高，通過(guò)給予地塞米松和五寶膠囊高、低劑量干預(yù)后，IL-4、Eotaxin、MCP-1比模型組低，而IFN-γ較高，提示五寶膠囊能夠改善哮喘小鼠Th1/Th2細(xì)胞平衡。

Th17是一種特異性地高水平分泌白介素-17 A(Interleukin-17A，IL-17A)并且能夠清除細(xì)胞外細(xì)菌及微生物的免疫細(xì)胞[20]，IL-17A是一種促炎因子，能夠誘導(dǎo)氣管成纖維細(xì)胞分泌白介素-8(Interleukin-8，IL-8)，在炎癥過(guò)程中發(fā)揮重要作用[21]。Treg是一種CD4+的TH細(xì)胞亞群，在維護(hù)機(jī)體的免疫平衡中發(fā)揮重要作用[22]，白介素-10(Interleukin-10，IL-10)是其分泌的特異性細(xì)胞因子，是一種多功能負(fù)性調(diào)節(jié)因子，具有很強(qiáng)的免疫調(diào)控作用，在Treg發(fā)揮免疫調(diào)控功能中，IL-10作為一種重要介質(zhì)參與其中。在一定程度上IL-17A與IL-10均能反應(yīng)Th17與Treg的功能狀態(tài)，被認(rèn)為代表Th17/Treg平衡的指標(biāo)[23]。在正常機(jī)體中，Th17與Treg能夠相互制約保持平衡狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體受到外界變應(yīng)原刺激時(shí)，Th17/Treg平衡被打破，IL-17A分泌增多，抑制了IL-10的生成，同時(shí)IL-8的大量分泌，IL-8為公認(rèn)的中性粒細(xì)胞趨化因子，不僅促使中性粒細(xì)胞到達(dá)氣道中，而且激活中性粒細(xì)胞脫顆粒，釋放炎性介質(zhì)，增加其與氣道內(nèi)皮細(xì)胞的粘附性，進(jìn)一步加重氣道炎癥[24]。在本研究中，哮喘小鼠的IL-17A和IL-8比正常小鼠的高，而IL-10則變低，說(shuō)明哮喘小鼠Th17/Treg細(xì)胞失衡，給予地塞米松及五寶膠囊高、低劑量進(jìn)行干預(yù)后，IL-17A、IL-8下降，IL-10回升，提示五寶膠囊能夠調(diào)節(jié)Th17/Treg的平衡。

綜上所述，五寶膠囊可以抑制趨化因子Eotaxin、MCP-1、IL-8的生成，調(diào)節(jié)Th1/Th2及Th17/Treg的平衡。在小鼠肺組織病理圖片和杯狀細(xì)胞增生圖片中可知，五寶膠囊改善小鼠炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和杯狀細(xì)胞的增生，通過(guò)小鼠各類(lèi)白細(xì)胞的計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，五寶膠囊降低嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量，提示我們五寶膠囊能夠改善氣道炎癥，可能通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2和Th17/Treg的平衡發(fā)揮防治哮喘的作用。哮喘是由多細(xì)胞參與的氣道炎癥，五寶膠囊在調(diào)節(jié)Th1/Th2及Th17/Treg平衡的同時(shí)是否對(duì)其他細(xì)胞具有作用，有待我們進(jìn)行深入研究。