探討結(jié)核感染T 細(xì)胞檢驗(yàn)聯(lián)合結(jié)核菌素試驗(yàn)在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值

張小軍，葉建婷，彭燕芳，洪苓苓

1.廈門市第五醫(yī)院呼吸內(nèi)科，福建廈門 361101；2.廈門市第五醫(yī)院體檢站，福建廈門 361101

肺結(jié)核是臨床常見的結(jié)核疾病之一， 在我國及全球范圍內(nèi)均有較高發(fā)病率，且具有一定傳染性，對(duì)于人類公共衛(wèi)生安全及患者健康均具有較大危害， 且發(fā)病后需積極接受藥物治療手段控制病情進(jìn)展， 以降低患者肺功能受肺結(jié)核桿菌侵蝕性影響而發(fā)生肺不張、肺氣腫等嚴(yán)重并發(fā)癥， 故早期治療的實(shí)施對(duì)于肺結(jié)核患者疾病治療及預(yù)后均具有積極影響。 目前隨著檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展， 對(duì)于肺結(jié)核的早期診斷已具備較為完整的發(fā)展體系，如組織活檢、血液檢驗(yàn)、影像學(xué)診斷等，以痰結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)為金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷， 但在此類檢驗(yàn)中部分穩(wěn)定期非活動(dòng)期肺結(jié)核患者可能存在連續(xù)陰性情況，增加疾病潛在風(fēng)險(xiǎn)性，故需結(jié)合現(xiàn)階段結(jié)核病診斷技術(shù)發(fā)展，選取更具診斷優(yōu)勢的檢驗(yàn)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)肺結(jié)核患者病情準(zhǔn)確的早期診斷[1-2]。 因此，為探討結(jié)核感染T 細(xì)胞檢驗(yàn)聯(lián)合結(jié)核菌素試驗(yàn)在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值，特方便選取該院2019 年5 月—2020 年5 月接診207 例患者開展研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治疑似肺結(jié)核患者共207 例設(shè)為研究對(duì)象，實(shí)施回顧性診斷研究。

207 例患者中男105 例，女102 例；年齡24～76 歲，平均年齡（50.02±4.25）歲。 患者經(jīng)肺組織活檢、影像學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)后確診活動(dòng)性肺結(jié)核45 例，非活動(dòng)性肺結(jié)核30 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)： 患者均在詳解研究細(xì)則后確認(rèn)參與該次研究，確認(rèn)醫(yī)院可收集其診斷結(jié)果用于該次研究；家屬同意患者參與研究；研究由該院倫理會(huì)批準(zhǔn)。 排除標(biāo)準(zhǔn)：研究期間自愿退出研究者；合并呼吸系統(tǒng)及口腔急性感染疾病者。

1.2 方法

患者入院后需同期接受結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)及肺泡灌洗液結(jié)核菌核酸檢測。

1.2.1 肺泡灌洗液結(jié)核菌核酸檢測 灌洗肺部前需先進(jìn)行局部麻醉， 其后將纖維支氣管鏡頂端置入亞段支氣管開口處，經(jīng)活檢孔注入滅菌生理鹽水進(jìn)行灌洗，灌洗液總量為100～300 mL，單次灌洗用量為25～50 mL，灌洗完畢后負(fù)壓吸引回收灌洗液，回收液濾去黏液后，將樣本放入滅菌玻璃容器后冷藏送檢。 檢驗(yàn)當(dāng)日需取出結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)基，并填寫患者相關(guān)信息及樣本編號(hào)，其后取出檢驗(yàn)樣本加入6～10 mL 氫氧化鈉溶液（4%濃度）稀釋，經(jīng)震蕩處理0.5～1 min 后，于室溫環(huán)境中靜置15 min 后， 吸取經(jīng)預(yù)處理痰稀釋液0.1 mL 后接種于培養(yǎng)基后在37℃環(huán)境中孵育。 接種3～7 d 后需對(duì)痰結(jié)核分枝桿菌培育情況進(jìn)行觀察記錄， 若培養(yǎng)基上有菌落則需經(jīng)染色處理后確認(rèn)是否為結(jié)核分枝桿菌， 若連續(xù)觀察至第8 周時(shí)，培養(yǎng)基中仍無菌落生長則為陰性[3-4]。

痰結(jié)核桿菌培養(yǎng)陽性判定指標(biāo)： 若菌落占培養(yǎng)基斜面面積1/4、1/2、3/4 或全部面積時(shí)，則均為陽性，分別記錄1+、2+、3+及4+。

1.2.2 T-SPOT.TB 試驗(yàn) 患者完成痰結(jié)核分枝桿菌樣本采集后，取其外周中心靜脈血5～8 mL 為檢驗(yàn)樣本，經(jīng)CPT管儲(chǔ)存后待檢。 檢驗(yàn)當(dāng)日需將血液樣本以1 600 r/min轉(zhuǎn)速，離心處理25～30 min 后，取上清液。 其后將CPT管內(nèi)核細(xì)胞層移至無菌尖底離心管后， 滴入10 mL 培養(yǎng)液后進(jìn)行二次離心處理，以600 r/min 轉(zhuǎn)速，離心處理7 min 后，取上清液，其后滴入1 mL 培養(yǎng)液至沉淀后進(jìn)行3 次離心處理，基本參數(shù)同第2 次、第3 次離心處理完成后去除上清液， 滴入0.7 mL 重旋細(xì)胞培養(yǎng)液后混勻，予以稀釋計(jì)數(shù)處理。處理后所得最終樣本需以N、P、T 順序依次滴入含有培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，經(jīng)恒溫培養(yǎng)后進(jìn)行檢測分析[5-7]。

陽性判定標(biāo)準(zhǔn)： 以校準(zhǔn)品濃度及發(fā)光值建立定標(biāo)曲線后，以檢測樣本發(fā)光值回算樣本濃度值。 若T-N≥0.348，則為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

以肺泡灌洗液結(jié)核菌核酸檢測及涂片找抗酸桿菌和分枝桿菌培養(yǎng)陽性結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)， 分析T-SPOT.TB肺結(jié)核早期診斷效果。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)及百分比表示，組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢出效果

經(jīng)痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)后檢出肺結(jié)核患者共70例，其中活動(dòng)性肺結(jié)核44 例， 非活動(dòng)性肺結(jié)核26 例。 TSPOT.TB 試驗(yàn)中檢出肺結(jié)核患者共72 例， 其中活動(dòng)性肺結(jié)核45 例， 非活動(dòng)性肺結(jié)核27 例。 對(duì)比后可知TSPOT.TB 肺結(jié)核檢出率與痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)檢出率對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 見表1。

表1 檢出效果對(duì)比[n（%）]

2.2 診斷效果

T-SPOT.TB 檢驗(yàn)敏感度與痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果具有一致性(P＞0.05)；T-SPOT.TB 肺結(jié)核診斷中假陰性率明顯較低（P＜0.05）。 見表2。

表2 診斷效果分析（%）

3 討論

結(jié)核桿菌感染作為我國公共衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展現(xiàn)階段的一項(xiàng)重要防控工作內(nèi)容， 多數(shù)患者在發(fā)病后面臨著終生伴發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，需長期服藥治療進(jìn)行控制，而結(jié)核桿菌藥物治療以多藥聯(lián)合方案為主， 且治療所用藥物具有較高藥物不良反應(yīng)，臨床治療時(shí)間的延長，也可導(dǎo)致部分患者在病原菌耐藥后盡快調(diào)整治療方案， 延緩病情進(jìn)展， 故早期治療的開展對(duì)于結(jié)核桿菌感染患者的病情控制及治愈均具有積極影響。

肺結(jié)核作為臨床常見結(jié)核桿菌感染疾病， 發(fā)病后對(duì)于人體肺功能具有明顯損害性，且損害不可逆，患者病情雖可經(jīng)藥物治療實(shí)現(xiàn)控制， 但仍面臨較高并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，造成健康損害。 隨著對(duì)肺結(jié)核研究的深入，疾病危害性也開始逐漸被大眾認(rèn)知， 并衍生出一系列診斷措施，以實(shí)現(xiàn)對(duì)該類疾病的早期有效診斷。 肺泡灌洗液結(jié)核菌核酸檢測作為目前肺結(jié)核疾病臨床診斷金標(biāo)準(zhǔn)，可通過對(duì)患者樣本處理、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)后，根據(jù)菌落生長情況及抗酸染色結(jié)果對(duì)患者是否感染結(jié)核分枝桿菌感染進(jìn)行有效評(píng)估， 其是以結(jié)核菌病原學(xué)為基礎(chǔ)發(fā)展所得診斷技術(shù)，但此類檢驗(yàn)操作大致需要7～8周，檢驗(yàn)周期過長，且在痰液樣本采集及處理中存在較多質(zhì)量影響因素，導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果或由于樣本污染、樣本質(zhì)量未達(dá)標(biāo)、 操作失誤等因素影響檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性及可參考性， 且部分非活動(dòng)性肺結(jié)核患者可在痰結(jié)核繁殖桿菌檢驗(yàn)中出現(xiàn)連續(xù)陰性結(jié)果， 在該次研究中痰結(jié)核菌培養(yǎng)假陰性率高達(dá)62.50%， 故存在較多應(yīng)用局限[8-9]。

研究結(jié)果表明， 經(jīng)痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)后檢出肺結(jié)核患者共70 例，其中活動(dòng)性肺結(jié)核44 例，非活動(dòng)性肺結(jié)核26 例。T-SPOT.TB 試驗(yàn)中檢出肺結(jié)核患者共72例，其中活動(dòng)性肺結(jié)核45 例，非活動(dòng)性肺結(jié)核27 例。對(duì)比后可知T-SPOT.TB 肺結(jié)核檢出率與痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)檢出率相似（P＞0.05）；SPOT.TB 檢驗(yàn)敏感度與痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果具有一致性（P＞0.05）；T-SPOT.TB 肺結(jié)核診斷中假陰性率明顯較低（P＜0.05）。 分析原因： 結(jié)核感染T 淋巴細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)是目前所研發(fā)的一類新型細(xì)胞特異性酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)法， 在國外肺結(jié)核疾病診斷中已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用， 在實(shí)際檢驗(yàn)中通過對(duì)人體結(jié)核桿菌特異性抗原的有效刺激， 評(píng)估T淋巴細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)答情況， 其后借助培養(yǎng)操作后檢測T淋巴細(xì)胞濃度后， 根據(jù)檢測結(jié)果判定受檢者有無感染結(jié)核分枝桿菌，檢驗(yàn)效果顯著，且檢驗(yàn)周期較短，不受卡介苗等外界因素影響，可參考性高，敏感度（96.15%）及假陰性率（37.50%）均有顯著優(yōu)勢。 故在實(shí)際應(yīng)用中可在此類檢驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上， 聯(lián)合影像學(xué)診斷技術(shù)進(jìn)一步提升檢驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核疾病的指示參考性[10-11]。 且該次研究結(jié)果與吳雪琴等[12]在《老年肺結(jié)核應(yīng)用T 細(xì)胞斑點(diǎn)檢驗(yàn)診斷臨床價(jià)值》 研究中所得T 細(xì)胞斑點(diǎn)檢驗(yàn)靈敏度94.81%、特異度100.00%研究結(jié)果存在一致性。

綜上所述， 結(jié)核感染T 細(xì)胞檢驗(yàn)結(jié)合結(jié)核菌素試驗(yàn)經(jīng)過氣管鏡檢查肺泡灌洗液找抗酸桿菌或核酸檢測陽性確診符合率達(dá)95%以上， 是一種可靠的利于患者或者健康體檢篩查可能接受的常規(guī)檢測方法， 同時(shí)具有操作方便、安全、經(jīng)濟(jì)，流程簡單，不良反應(yīng)少，易于全民推廣等特點(diǎn)，有利于結(jié)核病防治和全民普查推廣，可以大大減低肺結(jié)核傳播和利于肺結(jié)核患者早期發(fā)現(xiàn)，早期診斷，早期治療，對(duì)我國肺結(jié)核傳播阻斷傳播途徑有巨大潛在價(jià)值。