• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蠟狀芽孢桿菌協(xié)同李氏禾根系分泌物去除水體Cr6+的效應(yīng)及機(jī)制

    2020-04-11 05:03:30林華林志毅滿(mǎn)向甜KongCHHUON劉杰俞果
    關(guān)鍵詞:李氏化感烷烴

    林華,林志毅,滿(mǎn)向甜,Kong-CHHUON,劉杰,俞果*

    1. 桂林理工大學(xué)/廣西環(huán)境污染控制理論與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西 桂林 541004;2. 桂林理工大學(xué)巖溶地區(qū)水污染控制與用水安全保障協(xié)同創(chuàng)新中心,廣西 桂林 541004;3. 柬埔寨理工學(xué)院,柬埔寨 金邊 120000

    根系分泌物是植物生長(zhǎng)過(guò)程中分泌并釋放到根際環(huán)境中的有機(jī)化合物的總稱(chēng),目前已知的根系分泌物種類(lèi)有200種左右,包括氨基酸、有機(jī)酸、酶、可溶性糖等(Boeuf-Tremblay et al.,1994;Baetz et al.,2014)。這些根系分泌物是植物與土壤環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)和能量交換的載體,對(duì)根際土壤的理化性質(zhì)有重要的影響(Haichar et al.,2014;Bertin et al.,2003)。近年來(lái),隨著高效液相色譜、氣相色譜等分析技術(shù)的研發(fā)和應(yīng)用,世界各國(guó)科研人員在環(huán)境污染防治、土壤學(xué)等領(lǐng)域?qū)Ω捣置谖镩_(kāi)展了廣泛的研究。研究表明,根系分泌物可以改善土壤質(zhì)量、提高植物抗性,在土壤修復(fù)尤其是在土壤重金屬污染的植物修復(fù)領(lǐng)域發(fā)揮著巨大的作用。王艷紅等(2008)發(fā)現(xiàn)鋅(Zn)超富集植物東南景天(Sedum alfrediiHance)的根系分泌物能活化土壤中難溶態(tài)的 ZnO、ZnCO3等。盧豪良等(2007)發(fā)現(xiàn)秋茄(Kandelia candelL.)的根系分泌物能有效提高沉積物中重金屬(Cu、Pb、Cd、Zn)的生物有效性。

    鉻(Cr)是一種危害性大的環(huán)境污染物,其對(duì)生物體具有明顯的致癌和致畸作用,因此鉻污染被世界各國(guó)列為重點(diǎn)防治對(duì)象(Miretzky et al.,2010;Wise et al.,2014)。李氏禾(Leersia hexandraSwartz)是中國(guó)首次發(fā)現(xiàn)和唯一報(bào)道的濕生鉻超富集植物,對(duì)Cr6+具有很強(qiáng)的吸收和富集能力,在鉻污染水體的植物修復(fù)方面表現(xiàn)出巨大的潛力(Zhang et al.,2007)。近幾年來(lái),關(guān)于李氏禾超富集鉻的研究取得了不少進(jìn)展,但是還有一些問(wèn)題仍需深入研究:如李氏禾如何通過(guò)根系分泌作用適應(yīng)鉻脅迫,其根系分泌物與根際微生物的協(xié)同作用等(Liu et al.,2009;Liu et al.,2011;Zhang et al.,2009)。伍嬋翠等(2016)發(fā)現(xiàn)李氏禾根系分泌物對(duì)土壤中難溶性鉻具有較強(qiáng)的活化作用。我們的前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,李氏禾根際存在較高豐度的蠟狀芽孢桿菌,而蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)是一種耐高濃度鉻脅迫的微生物,這意味著在李氏禾耐受和富集Cr6+的過(guò)程中蠟狀芽孢桿菌可能起到了重要的作用。

    本研究在水培條件下,研究添加外源蠟狀芽孢桿菌與李氏禾的根系分泌物共同凈化水體Cr6+的影響,并利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)研究Cr6+脅迫和添加外源蠟狀芽孢桿菌對(duì)李氏禾根系分泌物組成成分的影響,以明確根系分泌物在李氏禾還原Cr6+過(guò)程中的作用,進(jìn)一步豐富李氏禾超富集鉻的生理機(jī)制,為提高李氏禾修復(fù)Cr6+污染水體效率提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試?yán)钍虾滩勺杂趶V西桂林市雁山鎮(zhèn)周邊未受重金屬污染的田埂間,蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物菌種保藏中心(菌種編號(hào)CCTCCAB2011085),菌株接種于液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)12 h后,4000 r·min-1離心10 min,棄上清液,離心后的菌體添加適量無(wú)菌水調(diào)節(jié)菌體濃度為108cfu·mL-1的菌懸浮液備用。

    1.2 植物的預(yù)培養(yǎng)

    選取生長(zhǎng)一致的李氏禾幼苗,用去離子水洗凈,分別栽入含有1.5 L體積分?jǐn)?shù)為50%的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液的塑料盆中,塑料盆容積為 2 L,在人工氣候室中預(yù)培養(yǎng)7 d,每3 d更換一次營(yíng)養(yǎng)液。人工氣候室培養(yǎng)條件設(shè)置:光照16 h,溫度25 ℃,光照強(qiáng)度7000 Lx,相對(duì)濕度75%。

    1.3 根系分泌物與蠟狀芽孢桿菌相互作用對(duì) Cr6+還原實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    為保證實(shí)驗(yàn)過(guò)程中根系分泌物成分不變,取預(yù)培養(yǎng)中李氏禾的原水培液100 mL,置于250 mL錐形瓶中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),向每一組的錐形瓶中添加適量Cr6+(K2Cr2O7)溶液使初始質(zhì)量濃度為 10 mg·L-1。以不添加蠟狀芽孢桿菌和李氏禾根系分泌物作為空白組,另外四組實(shí)驗(yàn)處理分別添加:活菌、根系分泌物、根系分泌物+活菌、根系分泌物+滅活菌。實(shí)驗(yàn)使用的活菌為 1.1中制備的 108cfu·mL-1蠟狀芽胞桿菌懸浮液;滅活菌采用擴(kuò)大培養(yǎng)后的蠟狀芽胞桿菌經(jīng)高壓蒸汽120 ℃,滅活20 min;將錐形瓶放入恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng),培養(yǎng)條件為 30 ℃、160 rmp,每隔2 h對(duì)錐形瓶中溶液進(jìn)行取樣,測(cè)定溶液中Cr6+含量,測(cè)試方法為二苯碳酰二肼分光光度法(賴(lài)永忠,2019)。對(duì)于含有蠟狀芽胞桿菌的3個(gè)處理組(活菌、根系分泌物+活菌、根系分泌物+滅活菌),同時(shí)測(cè)細(xì)菌溶液在波長(zhǎng)600 nm處的吸光度,利用細(xì)菌的吸光值來(lái)反應(yīng)細(xì)菌菌體細(xì)胞密度,從而了解細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,繪制細(xì)菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

    1.4 根系分泌物的收集實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和分析測(cè)定方法

    取預(yù)培養(yǎng)好之后生長(zhǎng)一致的李氏禾幼苗,用去離子水反復(fù)清洗,分別移植20—30株李氏禾到備好的塑料盆中,塑料盆中的李氏禾設(shè)置3組處理:(1)用質(zhì)量濃度10 mg·L-1Cr6+(K2Cr2O7)溶液脅迫李氏禾;(2)在 10 mg·L-1Cr6+(K2Cr2O7)鉻脅迫下向培養(yǎng)液加入一定量 108cfu·mL-1的蠟狀芽孢桿菌懸浮液;(3)只用去離子水培養(yǎng)李氏禾作為對(duì)照組(即培養(yǎng)的李氏禾不加鉻)。使用通氣泵每天給李氏禾的培養(yǎng)液中通氣3 h(早中晚各1 h),培養(yǎng)10 d后收集李氏禾根系分泌物,操作如下:將培養(yǎng)10 d的李氏禾取出并用去離子水反復(fù)沖洗,在新制備的超純水中加入 3滴體積分?jǐn)?shù) 0.05%的百里酚溶液,浸泡李氏禾根部 5 min。然后將李氏禾放入 0.5 mmol·L-1的CaCl2溶液中,放置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,之后收集含有根系分泌物的溶液,過(guò)0.45 μm濾膜,用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(40 ℃,90 r·min-1)濃縮至20 mL冷凍干燥,用去離子水定容至2 mL,轉(zhuǎn)移至GC進(jìn)樣小瓶,在4 ℃冰箱冷藏,供GC-MS分析。

    GC測(cè)試條件:美國(guó) PerkinElmer氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Claus 680 GC;600T MS);Elite-5ms(30 m×0.25 mm,0.25 μm)色譜柱;色譜柱升溫程序:初始溫度50 ℃,保持3 min,以6 ℃·min-1升溫至250 ℃并保持15 min;進(jìn)樣口溫度;載氣:純度為99.999%的氦氣,載氣流速1 mL·min-1;進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣,進(jìn)樣量l μL。

    MS分析條件:EI離子源,電離電壓70 eV;質(zhì)譜掃描方式:全掃描,掃描范圍為50—800 amu;離子源溫度200 ℃;接口溫度25 ℃;檢測(cè)電壓1 kv;溶劑延遲時(shí)間3 min。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    本研究采用Excel 2010、Origin 8.5和SPSS 18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 李氏禾根系分泌物與蠟狀芽孢桿菌聯(lián)合作用下凈化水中Cr6+的效果

    圖1 不同外源條件對(duì)水中Cr6+還原率的影響Fig. 1 Effect of different exogenous conditions on the reduction rate of Cr6+ in the water

    圖2 根系分泌物對(duì)蠟狀芽胞桿菌生長(zhǎng)量的影響Fig. 2 Effect of root exudates on the growth of Bacillus cereus

    由圖1可知,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),溶液中Cr6+的還原率也逐漸升高,最終趨于穩(wěn)定。對(duì)比空白組,李氏禾根系分泌物與蠟狀芽孢桿菌活菌聯(lián)合作用對(duì)Cr6+的還原效果最為明顯(P<0.05),在第10小時(shí)還原率達(dá)到75%,在24 h時(shí)還原率高達(dá)99%。李氏禾根系分泌物與蠟狀芽孢桿菌滅活菌聯(lián)合作用下,前8 h溶液中Cr6+的還原率穩(wěn)定在20%作用,在第 8小時(shí)時(shí) Cr6+還原率增加到 60%,并在第22小時(shí)趨于穩(wěn)定,達(dá)到88%。蠟狀芽孢桿菌活菌單獨(dú)作用對(duì)溶液中 Cr6+的還原作用明顯低于前兩組(P<0.05),還原率在第 22小時(shí)時(shí)達(dá)到 58%并趨于穩(wěn)定。李氏禾根系分泌物處理組中Cr6+的還原率穩(wěn)定在23%左右,顯著高于空白組(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,加入適量濃度的蠟狀芽孢桿菌菌液,與李氏禾根系分泌物共同作用,使溶液中Cr6+的還原率明顯增加。此外,高溫蒸汽滅活可能不能完全殺死菌液中的蠟狀芽孢桿菌,導(dǎo)致李氏禾根系分泌物與蠟狀芽孢桿菌滅活菌聯(lián)合處理組經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后對(duì)Cr6+還原率也基本達(dá)到了李氏禾根系分泌物與蠟狀芽孢桿菌活菌聯(lián)合處理組的水平。李氏禾根系分泌物能為蠟狀芽孢桿菌提供必要的營(yíng)養(yǎng)條件,增強(qiáng)其代謝能力,促進(jìn)了蠟狀芽孢桿菌對(duì)水體中的Cr6+的還原,可以通過(guò)對(duì)根系分泌物對(duì)的成分分析進(jìn)一步驗(yàn)證。前人研究表明,蠟狀芽孢桿菌不但能夠依靠自身的胞外分泌物還原Cr6+,其細(xì)胞壁也可以還原Cr6+,并固定在自身表面(Chen et al.,2012)。同時(shí),植物根系分泌物中的烯烴、酸、醇、酚、醛也能夠還原Cr6+(林琦等,2003)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,充分發(fā)揮李氏禾根系分泌物與蠟狀芽孢桿菌還原Cr6+的協(xié)同效應(yīng),是提高 Cr6+污染水體植物修復(fù)效率的關(guān)鍵。

    由圖2可知,前4 h蠟狀芽孢桿菌的光密度值都呈線(xiàn)性增長(zhǎng),添加李氏禾根系分泌物溶液中的蠟狀芽孢桿菌生長(zhǎng)情況良好,光密度值穩(wěn)定在1.5左右,顯著高于單獨(dú)蠟狀芽孢桿菌處理組(P<0.05),說(shuō)明添加李氏禾根系分泌物對(duì)于蠟狀芽孢桿菌的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用。添加李氏禾根系分泌物溶液的蠟狀芽孢桿菌滅活菌處理組光密度值同樣不斷增長(zhǎng),且在第 16小時(shí)超過(guò)其他處理組,最終穩(wěn)定在2.0左右。這進(jìn)一步說(shuō)明蠟狀芽孢桿菌在高溫高壓蒸汽的過(guò)程中并未完全失活。研究表明,根系分泌物中的氨基酸、烷烴等物質(zhì)能為微生物提供重要的碳源、能源物質(zhì),使植物根際的微生物數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)非根際,同時(shí)微生物又能促進(jìn)根系的分泌作用(羅繼鵬等,2018;吳林坤等,2014)。

    2.2 李氏禾根系分泌物 GC-MS掃描圖譜及結(jié)果分析

    本文列出了在無(wú)鉻、10 mg·L-1Cr6+脅迫、10 mg·L-1Cr6+脅迫條件下接種蠟狀芽孢桿菌李氏禾根系分泌物的GC-MS掃描圖譜。圖3—5結(jié)果顯示,李氏禾根系分泌物樣品檢測(cè)出的圖譜特征峰比較顯著,分布較密集,基線(xiàn)漂移不大,故檢測(cè)結(jié)果比較可信。3種處理下掃描圖譜差異明顯,接種蠟狀芽孢桿菌后李氏禾根系分泌物的特征峰明顯少于前兩種未接種情況下的根系分泌物特征峰。

    圖3 無(wú)鉻條件下李氏禾根系分泌物GC-MS掃描圖譜Fig. 3 GC-MS scanning map of root exudates of Leersia hexandra Swartz without Cr stress

    圖4 10 mg·L-1 Cr6+脅迫下李氏禾根系分泌物GC-MS掃描圖譜Fig. 4 GC-MS scanning map of root exudates of Leersia hexandra Swartz with 10 mg·L-1 Cr6+ stress

    圖5 接種蠟狀芽孢桿菌后李氏禾根系分泌物GC-MS掃描圖譜Fig. 5 GC-MS scanning map of root exudates of Leersia hexandra Swartz inoculated with Bacillus cereus

    通過(guò)人工分析質(zhì)譜圖并與 NIST107質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)核對(duì)分析,確定出3種處理?xiàng)l件下李氏禾根系分泌物的有機(jī)物質(zhì)及相對(duì)含量用以進(jìn)一步分析,見(jiàn)表1—3。

    由表1和表2結(jié)果分析,無(wú)Cr6+處理和有Cr6+處理10 d后的根系分泌物分別檢測(cè)出41種、47種有機(jī)化合物,都包含烷烴、酯、烯烴、芳香烴、醇、醚、酰胺。其中相對(duì)含量超過(guò)5%的物質(zhì)有3種,分別是烷烴、芳香烴、酰胺。由表3分析,接種蠟狀芽孢桿菌處理10 d后的根系分泌物檢測(cè)出19種有機(jī)化合物,含烷烴、醇、酯、酚,相對(duì)含量超過(guò)5%的物質(zhì)有烷烴、酯、酚。未接種蠟狀芽孢桿菌的李氏禾根系分泌物主要成分是烷烴,芳香烴,酰胺類(lèi)物質(zhì),且Cr6+脅迫下根系分泌物的種類(lèi)顯著增加并分泌出大量的化感物質(zhì)。未接種蠟狀芽孢桿菌的李氏禾根系分泌物種類(lèi)未見(jiàn)減少,也沒(méi)有特別限制某一類(lèi)化合物的分泌,表明李氏禾對(duì)Cr6+具有很強(qiáng)的耐受能力。而接種了蠟狀芽孢桿菌的李氏禾,根系分泌物有機(jī)化合物數(shù)量的減少,說(shuō)明蠟狀芽孢桿菌將根系分泌物作為生長(zhǎng)代謝底物而分解掉,為自身的繁殖生長(zhǎng)提供碳源等物質(zhì)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)油菜幼苗根系分泌物成分主要包含烴、醇、酯等且烴類(lèi)化合物相對(duì)含量最高(張紅等,2014)。吳蕾等(2009)研究大豆、小麥、玉米、高粱的根系分泌物,發(fā)現(xiàn)其成分包括烷烴、酸、醇、酯、苯、酰胺、酮、醛、酚以及其他物質(zhì),與本研究得出的主要根系分泌物種類(lèi)特征相似。

    植物的根系分泌物成分主要受物種的基因控制,但是植物的生長(zhǎng)環(huán)境也是因素之一,所以根系分泌物的種類(lèi)和數(shù)量受植物自身生長(zhǎng)狀況和環(huán)境條件影響(羅曉蔓等,2019)。比如小麥在鎘脅迫下的一些次生代謝產(chǎn)物的根系分泌物具有明顯變化,小麥通過(guò)改變根系分泌物作用而緩解鎘危害(張玲等,2002),楊瑞吉等(2006)研究發(fā)現(xiàn)油菜在磷脅迫下根系分泌物包括烷烴、烯烴、苯、酸、醛、酯、酮、醚等有機(jī)化合物,且在磷脅迫下,油菜根系分泌物種類(lèi)增加,這都是植物通過(guò)調(diào)節(jié)根系分泌物的組成來(lái)改變根系狀態(tài)以適應(yīng)新的外界環(huán)境。此外,一些根系分泌物能對(duì)重金屬產(chǎn)生吸附、絡(luò)合作用,減輕重金屬生物毒性。由表1、2可見(jiàn),李氏禾根系分泌物中酰胺類(lèi)物質(zhì)前后含量的變化可能是受到鉻脅迫后的一種根際解毒機(jī)制,為了證實(shí)這一點(diǎn),我們還需要進(jìn)一步研究李氏禾在鉻脅迫下根細(xì)胞膜的受損程度,透性變化情況以及植物根際pH環(huán)境、Eh特征變化等。

    表1 根系分泌物的鑒定(空白組)Table 1 Identification of root exudates (blank control group)

    2.3 Cr6+脅迫下根系分泌物化感物質(zhì)分泌差異

    從表2、表3鑒定出來(lái)有機(jī)物的相對(duì)含量分析,李氏禾根系分泌物主要包括烷烴、芳香烴、酰胺等物質(zhì),其中不少有機(jī)化合物被報(bào)道是化感物質(zhì)(Sun et al.,2019;李楊瑞,1993)。在Cr6+脅迫下,李氏禾根系分泌物中都檢測(cè)到了有且僅有一種酚類(lèi)物質(zhì):2, 4-二叔丁基苯酚。有學(xué)者認(rèn)為苯甲酸及其衍生物、水溶性有機(jī)酸、酚類(lèi),及烷烴類(lèi)等化合物都屬于化感物質(zhì),對(duì)植物具有化感作用,且相對(duì)含量高的物質(zhì)一般可能起主要的化感作用(Buer et al.,2010),而本文檢測(cè)出的2, 4-二叔丁基苯酚是一種已經(jīng)被證實(shí)具有化感效應(yīng)的有機(jī)化合物(張新慧等,2008)。黃翔杰等(2017)研究野菊根系分泌物中發(fā)現(xiàn)2, 4-二叔丁基苯酚對(duì)生菜、萵苣、油菜有明確的化感效應(yīng),周寶利等(2010)發(fā)現(xiàn)對(duì)嫁接茄幼苗施加低濃度的2, 4-二叔丁基苯酚有明顯的促生長(zhǎng)作用,但是對(duì)茄子幼苗施加高濃度的2, 4-二叔丁基苯酚處理反而對(duì)生長(zhǎng)特性具有抑制作用(王玉潔等,2007)。

    表2 根系分泌物的鑒定(有Cr6+)Table 2 Identification of root exudates (under Cr stress)

    表3 根系分泌物的鑒定(有微生物)Table 3 Identification of root exudates (microorganism)

    本文研究發(fā)現(xiàn)接種蠟狀芽孢桿菌與未接種相比,檢測(cè)出的2, 4-二叔丁基苯酚含量更高,相對(duì)含量從0.16%升高到6.07%。Li et al.(2019)在研究蠟狀芽孢桿菌 BCM2定殖番茄根系防疫根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)試驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)番茄根系分泌物中的2, 4-二叔丁基苯酚顯著增加,與本研究結(jié)果一致。李氏禾根系分泌物2, 4-二叔丁基苯酚相對(duì)含量的變化是超富集植物李氏禾對(duì)重金屬逆環(huán)境刺激的一種潛在響應(yīng)機(jī)制。

    3 結(jié)論

    (1)李氏禾根系分泌物和蠟狀芽孢桿菌相互作用對(duì)水體中Cr6+的還原率高達(dá)99%,遠(yuǎn)大于李氏禾根系分泌物或者蠟狀芽孢桿菌單獨(dú)處理組,表明接種蠟狀芽孢桿菌是提高李氏禾修復(fù)鉻污染水體效率的一種有效方法。

    (2)李氏禾根系分泌物種類(lèi)繁多,成分復(fù)雜,包含烷烴、酯、烯烴、芳香烴、醇、酰胺,其中以烷烴、芳香烴、酰胺為主。向李氏禾接種蠟狀芽孢桿菌后,大部分李氏禾根系分泌物中的化感物質(zhì)被分解掉,降低了化感物質(zhì)對(duì)植物的毒害作用。

    (3)李氏禾在受到Cr6+脅迫后,酰胺類(lèi)物質(zhì)的含量變化可能是植物為適應(yīng)重金屬鉻環(huán)境變化的一種解毒機(jī)制;李氏禾根系分泌物中的化感物質(zhì)2,4-二叔丁基苯酚是李氏禾對(duì)鉻脅迫的一種潛在的生理響應(yīng)機(jī)制。

    猜你喜歡
    李氏化感烷烴
    關(guān)中李氏骨傷學(xué)術(shù)流派簡(jiǎn)介
    關(guān)中李氏骨傷學(xué)術(shù)流派簡(jiǎn)介
    氣相色譜六通閥在正構(gòu)烷烴及碳數(shù)分布測(cè)定中的應(yīng)用
    云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:30
    豬李氏桿菌病的流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)、診斷與防治
    高苯原料油烷烴異構(gòu)化的MAX-ISOM技術(shù)
    遼《韓德源嫡妻李氏墓志》校補(bǔ)
    植物化感作用研究進(jìn)展
    植物化感作用研究進(jìn)展
    播娘蒿、豬殃殃對(duì)小麥的化感作用
    烷烴油滴在超臨界二氧化碳中溶解的分子動(dòng)力學(xué)模擬
    69精品国产乱码久久久| 久久精品久久久久久久性| 欧美在线黄色| 欧美日韩综合久久久久久| 中国美女看黄片| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 又黄又粗又硬又大视频| 超碰97精品在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产成人影院久久av| 欧美黄色淫秽网站| 美女福利国产在线| 亚洲精品中文字幕在线视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美精品一区二区大全| 国产亚洲欧美精品永久| 成年人午夜在线观看视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产男女超爽视频在线观看| 久久这里只有精品19| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲精品一二三| 永久免费av网站大全| 99久久精品国产亚洲精品| 天堂8中文在线网| 亚洲成人手机| 咕卡用的链子| 真人做人爱边吃奶动态| 99久久综合免费| 高清欧美精品videossex| 一本久久精品| 色婷婷久久久亚洲欧美| 老司机在亚洲福利影院| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美日韩av久久| 另类精品久久| av线在线观看网站| 国产又色又爽无遮挡免| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲人成电影免费在线| 男男h啪啪无遮挡| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产一区二区激情短视频 | 久久综合国产亚洲精品| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 午夜福利乱码中文字幕| 国产精品 国内视频| 2018国产大陆天天弄谢| 成年人午夜在线观看视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日本av手机在线免费观看| 9热在线视频观看99| 精品一区二区三卡| 国产福利在线免费观看视频| 免费不卡黄色视频| 老司机深夜福利视频在线观看 | 99国产综合亚洲精品| 黄色片一级片一级黄色片| 国产成人av激情在线播放| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美成人午夜精品| 1024香蕉在线观看| 后天国语完整版免费观看| 青春草亚洲视频在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产不卡av网站在线观看| 一级片免费观看大全| 亚洲综合色网址| 超碰成人久久| 少妇精品久久久久久久| 亚洲av日韩在线播放| 各种免费的搞黄视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 宅男免费午夜| 国产熟女午夜一区二区三区| 99久久综合免费| av线在线观看网站| 久久99一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久久久久久大尺度免费视频| 在线精品无人区一区二区三| 国产极品粉嫩免费观看在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本a在线网址| 国产精品人妻久久久影院| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 99国产综合亚洲精品| 成年女人毛片免费观看观看9 | 99精国产麻豆久久婷婷| www.精华液| 一边摸一边做爽爽视频免费| 深夜精品福利| 欧美日韩福利视频一区二区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产黄色免费在线视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品国产国语对白av| 成人影院久久| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲国产欧美网| svipshipincom国产片| 国产成人av激情在线播放| 欧美日韩av久久| 亚洲av在线观看美女高潮| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 大话2 男鬼变身卡| 久久久国产一区二区| 9191精品国产免费久久| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 女人久久www免费人成看片| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 久久久精品区二区三区| 久久久精品免费免费高清| 永久免费av网站大全| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 波多野结衣av一区二区av| 久久久国产精品麻豆| 日本一区二区免费在线视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲精品国产一区二区精华液| 老司机在亚洲福利影院| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 日本一区二区免费在线视频| 不卡av一区二区三区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 91精品三级在线观看| 观看av在线不卡| 男男h啪啪无遮挡| 嫩草影视91久久| 夫妻性生交免费视频一级片| 日韩av免费高清视频| 欧美日韩精品网址| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲av片天天在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美成狂野欧美在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 亚洲av片天天在线观看| 天天影视国产精品| 两性夫妻黄色片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品亚洲成a人片在线观看| 男女免费视频国产| 色视频在线一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久热在线av| 精品人妻1区二区| 人体艺术视频欧美日本| 国产视频首页在线观看| 好男人电影高清在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲av美国av| 一本色道久久久久久精品综合| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜91福利影院| 男人添女人高潮全过程视频| 午夜av观看不卡| 精品卡一卡二卡四卡免费| 免费少妇av软件| 亚洲av国产av综合av卡| 精品国产国语对白av| 国产xxxxx性猛交| a级毛片在线看网站| 精品一区二区三区av网在线观看 | 黄色怎么调成土黄色| av线在线观看网站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产成人免费无遮挡视频| 波多野结衣av一区二区av| 18在线观看网站| 高清不卡的av网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 男人操女人黄网站| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品.久久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 高清不卡的av网站| 国产精品久久久久成人av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产一区二区激情短视频 | 老司机在亚洲福利影院| 欧美乱码精品一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 久久精品国产a三级三级三级| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美中文综合在线视频| 亚洲专区中文字幕在线| 电影成人av| 后天国语完整版免费观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品久久久久成人av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| a级毛片黄视频| av不卡在线播放| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| av线在线观看网站| 一区福利在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 交换朋友夫妻互换小说| 99精品久久久久人妻精品| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| av天堂久久9| 久久久久久久国产电影| 又大又爽又粗| 免费日韩欧美在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成人影院久久| 精品视频人人做人人爽| 国产成人91sexporn| 国产黄色视频一区二区在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久99热这里只频精品6学生| 国产在线观看jvid| 黄色片一级片一级黄色片| 老司机在亚洲福利影院| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 一级片'在线观看视频| 欧美日韩黄片免| 黑丝袜美女国产一区| 9色porny在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 操出白浆在线播放| 亚洲精品第二区| 大香蕉久久网| 国产高清国产精品国产三级| 成年动漫av网址| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品一二三区在线看| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲色图综合在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 久久久国产一区二区| 丝瓜视频免费看黄片| 视频在线观看一区二区三区| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲精品美女久久av网站| av网站在线播放免费| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 婷婷成人精品国产| 亚洲黑人精品在线| 午夜91福利影院| 亚洲久久久国产精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 中文字幕亚洲精品专区| 91精品伊人久久大香线蕉| 在线观看人妻少妇| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久久久国产精品人妻一区二区| 性色av乱码一区二区三区2| 国产99久久九九免费精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 极品人妻少妇av视频| 久久精品久久久久久久性| 大型av网站在线播放| 亚洲国产最新在线播放| 人妻一区二区av| 黄色片一级片一级黄色片| 中文字幕精品免费在线观看视频| 十八禁高潮呻吟视频| 中文字幕人妻丝袜制服| √禁漫天堂资源中文www| 欧美日韩精品网址| 日韩欧美一区视频在线观看| 1024视频免费在线观看| 男女国产视频网站| 欧美日韩黄片免| 黄色一级大片看看| 欧美成狂野欧美在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 成年av动漫网址| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一本久久精品| 一边摸一边做爽爽视频免费| 啦啦啦 在线观看视频| 免费观看av网站的网址| 激情五月婷婷亚洲| 高清不卡的av网站| 涩涩av久久男人的天堂| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产免费现黄频在线看| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久国产精品麻豆| 久久99热这里只频精品6学生| 蜜桃在线观看..| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲色图综合在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 国产99久久九九免费精品| 国产伦理片在线播放av一区| 夫妻午夜视频| 天天影视国产精品| 一级片'在线观看视频| tube8黄色片| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| bbb黄色大片| 国产精品久久久久久精品古装| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产福利在线免费观看视频| 老司机亚洲免费影院| 国产精品av久久久久免费| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲,欧美,日韩| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品视频人人做人人爽| 多毛熟女@视频| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 9热在线视频观看99| 激情视频va一区二区三区| 亚洲伊人色综图| 国产成人精品久久久久久| 天堂8中文在线网| 亚洲精品日本国产第一区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 成人手机av| 人妻人人澡人人爽人人| 搡老岳熟女国产| 中国美女看黄片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久精品久久久久久久性| 成人亚洲欧美一区二区av| 黄色片一级片一级黄色片| 我要看黄色一级片免费的| www.自偷自拍.com| 亚洲av国产av综合av卡| 91精品国产国语对白视频| 好男人电影高清在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 青春草亚洲视频在线观看| 在线观看人妻少妇| 大码成人一级视频| 亚洲国产看品久久| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| avwww免费| 一级片'在线观看视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产精品三级大全| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲中文字幕日韩| 免费看十八禁软件| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 极品少妇高潮喷水抽搐| 欧美黄色淫秽网站| 日本欧美视频一区| 国产男女内射视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 激情五月婷婷亚洲| 欧美人与善性xxx| 脱女人内裤的视频| 老司机影院毛片| 国产在视频线精品| 亚洲av日韩在线播放| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲一区二区三区欧美精品| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久性视频一级片| 飞空精品影院首页| 国产成人91sexporn| 久久久国产欧美日韩av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久久 成人 亚洲| 国产精品.久久久| 99九九在线精品视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 老司机亚洲免费影院| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲成人免费电影在线观看 | 男女午夜视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 男人添女人高潮全过程视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久天堂一区二区三区四区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 麻豆av在线久日| 校园人妻丝袜中文字幕| 老汉色av国产亚洲站长工具| 9色porny在线观看| 亚洲成色77777| 91九色精品人成在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 免费看十八禁软件| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久精品国产亚洲av涩爱| 多毛熟女@视频| 亚洲国产精品999| av国产精品久久久久影院| 高清视频免费观看一区二区| 精品第一国产精品| 黄色视频不卡| 咕卡用的链子| 亚洲国产欧美一区二区综合| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产熟女午夜一区二区三区| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲男人天堂网一区| av在线播放精品| 天天添夜夜摸| 欧美乱码精品一区二区三区| cao死你这个sao货| 天堂俺去俺来也www色官网| 在线观看免费午夜福利视频| 乱人伦中国视频| 国产成人免费观看mmmm| 精品亚洲成a人片在线观看| 性少妇av在线| 国产淫语在线视频| 9色porny在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 老司机影院成人| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 丝袜在线中文字幕| 亚洲av男天堂| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久 成人 亚洲| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲专区中文字幕在线| 国产男人的电影天堂91| 高清视频免费观看一区二区| 一级毛片我不卡| 电影成人av| 免费在线观看影片大全网站 | 国产精品久久久久久精品古装| 一区二区av电影网| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产成人av激情在线播放| 久久国产精品大桥未久av| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品 国内视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 日本午夜av视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 视频区图区小说| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 岛国毛片在线播放| 在线看a的网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 啦啦啦 在线观看视频| 日本av手机在线免费观看| kizo精华| 国产精品欧美亚洲77777| 天天影视国产精品| 少妇的丰满在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一级毛片 在线播放| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产一区二区三区av在线| 欧美精品亚洲一区二区| 国产熟女欧美一区二区| 精品国产国语对白av| 99精国产麻豆久久婷婷| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久 成人 亚洲| 亚洲中文av在线| 日日爽夜夜爽网站| 成人免费观看视频高清| 真人做人爱边吃奶动态| 色94色欧美一区二区| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲精品美女久久av网站| 黄色怎么调成土黄色| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产亚洲一区二区精品| 精品国产乱码久久久久久小说| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲av成人精品一二三区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 最新的欧美精品一区二区| 国产精品一二三区在线看| 欧美精品一区二区免费开放| 欧美成人午夜精品| 永久免费av网站大全| 久热爱精品视频在线9| 高清黄色对白视频在线免费看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 亚洲国产精品国产精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 午夜福利乱码中文字幕| 美女福利国产在线| 老鸭窝网址在线观看| 国产高清视频在线播放一区 | 国产精品久久久久久精品电影小说| 欧美精品一区二区免费开放| 搡老岳熟女国产| 看免费av毛片| 在线看a的网站| 少妇粗大呻吟视频| 午夜久久久在线观看| 国产精品.久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 日本wwww免费看| 日韩欧美一区视频在线观看| 99久久综合免费| 色精品久久人妻99蜜桃| 日本五十路高清| 国产片内射在线| 99国产综合亚洲精品| 一区二区三区激情视频| 最新在线观看一区二区三区 | 国产成人啪精品午夜网站| 啦啦啦 在线观看视频| 一本大道久久a久久精品| 大香蕉久久成人网| 国产又爽黄色视频| 青青草视频在线视频观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产高清视频在线播放一区 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 极品人妻少妇av视频| 国产伦理片在线播放av一区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品国产乱码久久久久久小说| 人妻 亚洲 视频| 久久精品国产综合久久久| 国产精品成人在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产成人精品无人区| 丝袜脚勾引网站| 国产成人精品在线电影| 国产精品偷伦视频观看了| 午夜两性在线视频| 后天国语完整版免费观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 波多野结衣一区麻豆| 久久人人97超碰香蕉20202| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲色图综合在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一区二区三区乱码不卡18| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲国产精品成人久久小说| 视频在线观看一区二区三区| 美女视频免费永久观看网站| 视频区图区小说| 国产日韩欧美亚洲二区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久天堂一区二区三区四区| 免费在线观看日本一区| 色94色欧美一区二区| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 黄片小视频在线播放| av国产精品久久久久影院| 叶爱在线成人免费视频播放| 下体分泌物呈黄色| 日本色播在线视频| 亚洲成人免费av在线播放| 午夜久久久在线观看| 99国产精品免费福利视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费观看人在逋| 又紧又爽又黄一区二区| 后天国语完整版免费观看| 国产日韩欧美亚洲二区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 黄色视频不卡| 午夜两性在线视频| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲人成77777在线视频| 美女视频免费永久观看网站|