趨化因子受體CXCR3在乳腺癌分子亞型HER2過表達(dá)型中的表達(dá)及意義

安曉燕，田秀娟

（山西省大同市第五人民醫(yī)院，山西 大同 037000）

乳腺癌是危害婦女生命的惡性腫瘤之一，近年來，隨著社會(huì)環(huán)境的變化，乳腺癌發(fā)病率有不斷增加和年輕化的趨勢(shì)。影響乳腺癌患者生存期的重要因素，包括浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。為預(yù)測(cè)患者預(yù)后，促進(jìn)臨床治療指導(dǎo)，研究乳腺癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移相關(guān)指標(biāo)具有重要的意義。趨化因子是一類可誘導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子。在多種腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程中，趨化因子發(fā)揮了重要的作用，主要因?yàn)橼吇蜃咏Y(jié)合相應(yīng)細(xì)胞表面的特異性受體。內(nèi)皮細(xì)胞等的胞膜，以及免疫細(xì)胞上，通常有趨化因子受體表達(dá)，其屬于G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）。根據(jù)不同配體的結(jié)合方式，可以將趨化因子受體分為以下類型：CX3C類趨化因子受體（CX3CR）、CXC類趨化因子受體（CXCR）、C類趨化因子受體（CR），以及CC類趨化因子受體（CCR）[1]。CXCR3是CXC趨化因子亞家族的受體，CXCR3發(fā)揮作用，主要是結(jié)合CXCLl l、CXCLl0、CXCL9。研究顯示，多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中，與CXCR3過度表達(dá)密切相關(guān)，比如肝癌、結(jié)腸癌、肺癌等。但有關(guān)于研究乳腺癌中的CXCR3比較少。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，基于人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）分子表達(dá)狀況的分子分型，為靶向治療、內(nèi)分泌治療乳腺癌提供借鑒。HER2過表達(dá)型乳腺癌，侵襲性高、容易復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后差。我們通過檢測(cè)CXCR3在乳腺癌分子亞型HER2過表達(dá)型中的表達(dá)，分析其與HER2及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 60例乳腺癌標(biāo)本取自大同市第五人民醫(yī)院病理科外檢檔案2010-2015年手術(shù)患者。60例中女性58例，男性2例。年齡35-80歲，平均58歲。選取基于HER2、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）分子表達(dá)狀況的分子亞型病例，管腔A型11例，管腔B型15例，HER2過表達(dá)型34例。伴有同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例，不伴同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36例。選取乳腺增生癥組織30例。所選病例切片及分子分型均由兩名資深病理醫(yī)師復(fù)檢，對(duì)于HER2 2+者，送有資質(zhì)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步經(jīng)FISH檢驗(yàn)證實(shí)后入組。

1.2 試劑和免疫組化染色 使用磷酸鹽緩沖液PBS（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）。DAB顯色試劑盒（DAB-0031）（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）。二步法Elivision TM plus（KIT-9903）免疫組化檢測(cè)試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）。鼠抗人CXCR3抗體（美國(guó)R&D公司）。工作濃度為 1:100。根據(jù)試劑盒的說明進(jìn)行相應(yīng)的操作。

對(duì)于蛋白表達(dá)的檢測(cè)，采用免疫組化Elivion二步法的方式。標(biāo)本切片厚4 μm。使用10%中性福爾馬林，固定標(biāo)本。使用石蠟包埋?？乖迯?fù)處理應(yīng)用檸檬酸鹽。DAB顯色。一抗4oC過夜。以PBS替代一抗，作為陰性對(duì)照。已知CXCR3陽性的組織切片，作為陽性對(duì)照。主要在乳腺癌細(xì)胞胞質(zhì)和胞膜，顯示CXCR3的表達(dá)。呈現(xiàn)為棕褐色或者棕黃色的顆粒狀。依據(jù)陽性細(xì)胞的百分率，胞膜、胞漿著色的強(qiáng)弱，顯示為：陰性＜10%，10%-25%+，25%-50% ++，51%-75% +++，＞76% ++++。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 20.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)和計(jì)量資料比較分別行χ2和t檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 CXCR3在乳腺癌分子亞型中表達(dá) 見表1。CXCR3陽性表達(dá)率，管腔A型36.4%（4/11）和HER2過表達(dá)94.1%（32/34）有顯著性差異（P＜0.05），管腔B型81.3%（12/15）和管腔A型36.4%（4/11）有顯著差異（P＜0.05），管腔A型和管腔B型間無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 CXCR3表達(dá)與分子亞型的關(guān)系

2.2 CXCR3表達(dá)與伴同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 見表2。乳腺癌伴有同側(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例，CXCR3陽性表達(dá)者18例（75.0%）。不伴有同側(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36例，CXCR3陽性表達(dá)者12例（33.3%），兩組間差異有顯著性（P＜0.01）。

表2 CXCR3表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.3 30 例乳腺增生癥組織切片CXCR3表達(dá)均為陰性。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)表明，多種腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程中，趨化因子揮重要作用。趨化因子促進(jìn)腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，主要通過蛋白水解酶分泌，誘導(dǎo)血管生成。也可以將免疫活性細(xì)胞激活，或者相關(guān)血管形成抑制發(fā)揮作用。作為細(xì)胞因子，CXC趨化因子亞家族與腫瘤轉(zhuǎn)移有重要的聯(lián)系。在器官特異性轉(zhuǎn)移，以及腫瘤的發(fā)展中，CXCR3發(fā)揮相應(yīng)的作用。研究發(fā)現(xiàn)，CXCR3 mRNA在腎細(xì)胞癌組織中的蛋白表達(dá)，比癌旁組織更高[2]。在腎細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中，CXCR3發(fā)揮一定的作用。研究中，CXCR3蛋白在胃癌組織中，比癌旁組織高。研究中，CXCR3的表達(dá)在乳腺癌組織，比癌旁組織更高。包括蛋白水平、mRNA水平。有研究顯示，結(jié)腸癌組織中，CXCR3呈陽性表達(dá)，并且正常結(jié)腸上皮組織、癌旁組織中，CXCR3不表達(dá)。我們的研究結(jié)果顯示，CXCR3陽性表達(dá)率與乳腺癌分子亞型HER2過表達(dá)型呈正相關(guān)性，而已有的大量研究表明，HER2過表達(dá)型乳腺癌預(yù)后差，容易復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。提示在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中，CXCR3及其配體具有重要作用。

有學(xué)者研究報(bào)道，肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、骨肉瘤的肺轉(zhuǎn)移與CXCR3表達(dá)有關(guān)。CXCR3在惡性黑色素瘤中的表達(dá)，與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)浸潤(rùn)、腫瘤大小都有關(guān)聯(lián)。高表達(dá)CXCR3，與腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲都有一定的相關(guān)性[3]。研究顯示，CXCR3陽性的結(jié)腸癌患者預(yù)后很差。且其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。研究顯示，乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，CXCR3表達(dá)明顯比陽性組更低。CXCR3在乳腺癌組織中表達(dá)的越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移累及數(shù)目越多。本次研究顯示，相比不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，CXCR3陽性表達(dá)在伴有同側(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組更高。反映了CXCR3的表達(dá)可能與促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究結(jié)果提示，趨化因子受體CXCR3蛋白檢測(cè)可以作為判斷乳腺癌預(yù)后的因子，為患者的診療提供一定的指導(dǎo)。