Rh陰性無(wú)償獻(xiàn)血者表型分布調(diào)查及意義研究

孔曉紅

（新疆阿勒泰市地區(qū)阿勒泰地區(qū)中心血站，新疆 阿勒泰 836500）

在人類多態(tài)性血型系統(tǒng)中Rh血型系統(tǒng)較特殊，位居ABO血型系統(tǒng)之后。極易出現(xiàn)新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)等情況[1]。D抗原屬于Rh系統(tǒng)中十分重要的抗原。紅細(xì)胞表面存在D抗原，檢測(cè)為Rh陽(yáng)性，如不存在D抗原，檢測(cè)為Rh陰性。獻(xiàn)血者Rh表型和陰性頻率經(jīng)檢測(cè)，形成并完善Rh稀有血型內(nèi)容，針對(duì)同種抗體采取預(yù)防方法，有效的保證臨床供血質(zhì)量[2]。在相關(guān)研究中，針對(duì)稀有血型進(jìn)行篩選，并建立相關(guān)滿足阿勒泰地區(qū)的稀有血型庫(kù)，進(jìn)而將面臨的稀有血型不足、不良輸血反應(yīng)等相關(guān)問(wèn)題予以解決，將輸血效果予以提升。

1 數(shù)據(jù)與方法

1.1 基本數(shù)據(jù) 在2019年1月-2020年1月期間選取127例Rh陰性無(wú)償獻(xiàn)血人員，其中男性患者有89例，女性患者有28例，年齡選自18-60歲，年齡均值為（48.54±2.15）歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑為單克隆抗A抗B血型定型試劑、人ABO血型反定型為紅細(xì)胞，使用上海血液生物制藥有限公司生產(chǎn)的試劑；RhD血型、ABO檢測(cè)卡主要為長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；抗D（IgM/IgG）是加拿大Dominion公司生產(chǎn)和德國(guó)BIO公司生產(chǎn)；抗c、抗C、抗e、抗E等單克隆抗體和多特異抗人球蛋白試劑均屬于上海血液生物制藥有限責(zé)任公司提供；使用北京金豪制藥股份有限公司生產(chǎn)的血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查質(zhì)控品。

1.2.2 儀器 使用湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司生產(chǎn)的cence TDZ5-WS儀器進(jìn)行檢測(cè)；使用江蘇新康醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的37oC和56oC電熱恒溫水浴箱；使用日本奧林巴斯生產(chǎn)的CHK型雙目生物顯微鏡

1.2.3 檢驗(yàn)方法 檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者Rh血型：使用加拿大Dominion公司生產(chǎn)和德國(guó)BIO公司生產(chǎn)提供的抗-D，使用上海生物科技有限公司生產(chǎn)的抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清，抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e以及抗人球蛋白；使用cence湘儀TDZ5-WS離心機(jī)輔助檢查。

表1 Rh陰性表型分析

篩選和確認(rèn)RhD陰性：使用微量板鹽水法初篩所有標(biāo)本，需將濃度為3%的被檢紅細(xì)胞懸液與單克隆IgM抗-D試劑，離心使用平板離心機(jī)，觀察離心結(jié)果，針對(duì)不凝集人群，將其判定為RhD陰性。陰性標(biāo)本主要采取2種單克隆IgG抗-D試劑檢測(cè)間接抗人球蛋白試驗(yàn)。在37oC下孵育半小時(shí)，將濃度為3%的50 u和100 u抗-D被檢紅細(xì)胞混合，并使用生理鹽水對(duì)其進(jìn)行洗滌4-5次，加入100 u抗人球蛋白，觀察離心結(jié)果。對(duì)于凝集的患者確診為弱D，對(duì)于不凝集的患者確認(rèn)為IAT陰性[3]。

利用試管法對(duì)RhCcEe抗原檢測(cè)：利用4支干凈試管，并對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)標(biāo)記，分別為抗-C、抗-次、抗-E、抗-e，取1滴相應(yīng)的抗血清試劑分別放在每個(gè)試管中，1滴被檢人員的紅細(xì)胞懸液，濃度為2%-5%，將其充分混勻，并采取及時(shí)處理，離心時(shí)間在15 s左右，重新懸浮細(xì)胞扣，觀察凝集反應(yīng)，紅細(xì)胞凝集人員稱為陽(yáng)性，其紅細(xì)胞中存在相應(yīng)的抗原，針對(duì)紅細(xì)胞不凝集人員，需在37oC之下對(duì)其進(jìn)行孵育，孵育時(shí)間為15 min，并離心15 min，對(duì)其懸浮細(xì)胞扣凝集反應(yīng)進(jìn)行觀察，如紅細(xì)胞一直不凝集，定為陰性，證實(shí)無(wú)相應(yīng)抗原存在，相反存在抗原。

1.3 判定指標(biāo) 對(duì)其進(jìn)行正規(guī)試驗(yàn)，有效的鑒定Rh陰性無(wú)償獻(xiàn)血者的表型，并使用微板法診斷RhD，使用間接抗球蛋白試驗(yàn)確認(rèn)Rh（D）陰性確認(rèn)試驗(yàn)。檢測(cè)IAT，并明確RhD陰性情況，行常規(guī)血清學(xué)方法診斷，ABO血型、RhCcEe抗原情況。

2 結(jié)果

200 例Rh陰性無(wú)償獻(xiàn)血人員，其中60例ABO血型中包含16例A型（26.67%）、19例B型（31.67%）、17例O型（28.33%）、8例AB型（13.33%）；13例RhCcEe表型包含6例ccdee型（46.15%）、3例Ccdee型（23.08%）、2例ccdEe型（15.38%）、1例CCdee型（7.69%）、1例CcdEe型（7.69%）。見表1。

2 討論

Rh血型系統(tǒng)存在D、C、c、E、e抗原，其中免疫原性較強(qiáng)的抗原為D，RhD抗原需依照表位數(shù)量和質(zhì)量進(jìn)行不同區(qū)分，主要表現(xiàn)為正常、D弱、D部分、D、DEL。其中DEL、弱D等均可造成免疫應(yīng)答，進(jìn)而出現(xiàn)同種抗-D，對(duì)供者的Rh血型進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，將同種免疫予以避免[4]。

Rh血型研究逐漸加深，Rh表型屬于基因分型技術(shù)，與血清學(xué)分型比較，其優(yōu)點(diǎn)為操作簡(jiǎn)單，不需要采取特殊儀器和設(shè)備，在輸血前檢查工作中具有重要意義。Rh表型檢測(cè)的最終結(jié)果為制定合適的輸血方法，對(duì)獻(xiàn)血者定型檢測(cè)時(shí)，需使用不同來(lái)源的抗-D試劑，盡最大可能檢驗(yàn)出弱D抗原，防止Rh陰性受血者攝入此類血液。

綜上所述，在輸液工作中，對(duì)Rh陰性獻(xiàn)血者血清學(xué)表型進(jìn)行有效調(diào)查，防止出現(xiàn)相應(yīng)的溶血反應(yīng)，將血液供需矛盾予以解決，為臨床用血提供有效證據(jù)。