分子診斷技術(shù)結(jié)合傳統(tǒng)分離方法在致瀉性大腸桿菌檢測中的運(yùn)用分析

譚寅鳳

（吉林市人民醫(yī)院，吉林 吉林 130021）

致瀉性大腸桿菌（DEC）是引起腹瀉的主要致病菌，根據(jù)其侵襲性及毒性，臨床將其分為5類，分別為：致病性大腸桿菌（EPEC）、產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）、侵襲性大腸桿菌（EIEC）、出血性大腸桿菌（EHEC）和聚集性大腸桿菌（EAEC）。隨著診療技術(shù)的不斷提高，將分子診斷技術(shù)與傳統(tǒng)的分離方法相結(jié)合，能提高致瀉性大腸桿菌引起食物中毒的病原菌檢出率[1]，有利于臨床對癥采取治療措施，提高疾病治愈率，促使患者早日康復(fù)。下面對500份糞便樣本實施致瀉性大腸桿菌檢測，采用熒光PCR法聯(lián)合傳統(tǒng)分離方法，分析致瀉性大腸桿菌陽性率及各相關(guān)病原菌檢出率，具體研究內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2018年6月-10月選取我省幾個具有代表性監(jiān)測醫(yī)院送檢的的500份糞便樣本，均為腹瀉患者。

1.2 試劑與儀器 培養(yǎng)基：GN增菌液；試劑盒：熒光診斷試劑盒購自上海之江生物科技有限公司；儀器：熒光PCR儀，型號為Rotor-gene 6000（Corbett）。

檢測方法：采集的糞便采用GN增菌液，共收集1 mL增菌液，以13000 r/min進(jìn)行離心處理，時間為2 min，去盡上清，混合入100 μL DNA提取液，置入沸水10 min，以13000 r/min進(jìn)行離心處理，時間為5 min，取上清，以此作為RT-PCR反應(yīng)的模板DNA。熒光PCR的反應(yīng)體系及擴(kuò)增程度嚴(yán)格按照說明書流程實施操作，其程度為，置入37oC環(huán)境中2 min，置入94oC環(huán)境中2 min，置入93oC環(huán)境中15 s轉(zhuǎn)換成60oC環(huán)境中60 s，共循環(huán)40次。

2 結(jié)果

2.1 500 份糞便樣本病原菌檢出情況 500份糞便樣本，致瀉性大腸桿菌檢出95份，檢出率為19.00%，各種病原菌檢出率EPEC最高，為8.20%，其次為EAEC，7.00%，EIEC為2.40%，ETEC為1.40%，無EIEC500份糞便樣本，致瀉性大腸桿菌檢出95份，檢出率為19.00%，各種病原菌檢出率EPEC最高，為8.20%，其次為EAEC，7.00%，EIEC為2.40%，ETEC為1.40%，無EIEC。

表1 病原菌檢出分布時間

2.2 病原菌檢出分布時間 致瀉性大腸桿菌6月份檢出率最高，為39.10%，其次為7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份檢出率最高，可見6月是疾病的高發(fā)期，詳見表1。

3 討論

致瀉性大腸桿菌與普通致病大腸桿菌形態(tài)及生化特征無明顯卻別，因此容易出現(xiàn)混淆的情況，只能從血清學(xué)角度進(jìn)區(qū)分。食品標(biāo)準(zhǔn)GB 4789公布，致瀉性大腸桿菌銀從血清凝聚方面入手，將國際上常見種類加以分類，確定血清型后實施毒力試驗，但該種檢測方式耗時長且浪費人力物力，病原菌陽性檢出率也不高，不利于病原檢測工作的開展。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，其運(yùn)用到各種疾病的檢測中，熒光PCR法在臨床使用范圍廣泛，將其與傳統(tǒng)分離方法相結(jié)合，能快速獲得診斷結(jié)果，且靈敏性極高，能提高操作人員工作效率，使其勞動強(qiáng)度降低，簡單省時，具有極高的臨床使用價值[2]。通過本次研究結(jié)果可知500份糞便樣本，致瀉性大腸桿菌檢出95份，檢出率為19.00%，各種病原菌檢出率EPEC最高，為8.20%，其次為EAEC，7.00%；致瀉性大腸桿菌6月份檢出率最高，為39.10%，其次為7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份檢出率最高，可見6月是疾病的高發(fā)期，滿足腹瀉病的流行病學(xué)特點。

綜上所述，采用熒光PCR法聯(lián)合傳統(tǒng)分離方法檢測致瀉性大腸桿菌準(zhǔn)確率高，其次，EAEC及EPEC是致瀉性大腸桿菌的主要病原菌。