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    1 例丙種球蛋白含量減低疑難血型的鑒定

    2020-04-09 07:05:42向代軍張立文
    關(guān)鍵詞:丙種球蛋白懸液血型

    任 爽,向代軍,張立文

    解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心 醫(yī)學(xué)檢驗中心,北京 100853

    臨床廣泛采用的血型鑒定是對ABO 血型即紅細胞血型系統(tǒng)的鑒定[1]。血型鑒定是關(guān)系輸血用血安全的重要一環(huán),這個環(huán)節(jié)如果出錯會造成血型的錯誤輸注,引起急性輸血溶血反應(yīng),甚至威脅病患者的生命安全,釀成重大醫(yī)療事故[2]。ABO血型是目前最具臨床意義的血型系統(tǒng),常規(guī)采用血清學(xué)方法通過檢測血型抗原和抗體來定型[3]。在正常情況下,經(jīng)抗原刺激人體能產(chǎn)生規(guī)律的天然抗體[4];但在一些病理情況下,實際血型鑒定存在困難[5]。本文報告1 例先天性低丙種球蛋白導(dǎo)致ABO 血型正反定型不符病例,為困難血型鑒定提供參考。

    1 病例資料患者男,12 歲,2018 年4 月因頻繁呼吸道感染伴間斷多發(fā)關(guān)節(jié)腫痛10 年入本院小兒內(nèi)科病房。約10 年前,患兒無明顯誘因易出現(xiàn)反復(fù)呼吸道感染,頻繁發(fā)作,同時有發(fā)熱、咳嗽的癥狀。病程中伴患化膿性中耳炎、反復(fù)消化道感染、反復(fù)關(guān)節(jié)腫痛,至多家醫(yī)院就診并多次治療,給予對癥治療后有好轉(zhuǎn),但易反復(fù)?;颊咴谕庠汉捅驹哼M行免疫球蛋白檢測,結(jié)果顯示免疫球蛋白A、G、M 均出現(xiàn)含量減低(表1)。

    在本院住院期間,患者進行常規(guī)血型檢查,主要檢測的儀器與檢測試劑包括A、B、O 標準紅細胞(批號20145308),抗A、抗B(20130815)標準抗血清均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供;IH-1000 全自動血型配血分析儀(北京瑞昆達有限公司);ABO 血型正反定和RhD 血型檢測卡、BIO RAD 血型卡專用離心機均由北京瑞昆達有限公司提供。血型鑒定方法,采用正定型和反定型法同時進行ABO 血型及Rh 血型鑒定;正、反定型均用試管法和微柱凝膠法鑒定,用吸收放散試驗排除亞型。

    表1 免疫球蛋白含量減低患者免疫球蛋白含量

    正定型結(jié)果:取3%患者紅細胞懸液100μl至試管中,加入到抗A、抗B 標準血清各2 滴約50μl,1 000 g 離心15 s,輕柔混勻,顯微鏡觀察無紅細胞凝集,顯示結(jié)果為陰性;用3%患者紅細胞懸液加入到戴安娜微柱凝膠卡里(每孔各50μl),離心后觀察,結(jié)果為“O 型Rh 陽性。質(zhì)控孔陰性”,見表2、圖1。

    反定型結(jié)果:取標記好的試管,加入患者血漿2 滴約50μl,然后分別加入A、B、O 型標準紅細胞混懸液各1 滴,1 000 g 離心,輕柔混勻,顯微鏡觀察無紅細胞凝集,顯示其結(jié)果為陰性。進一步做如下操作,增加血漿量至6 滴,分別加入A、B、O 型標準紅細胞混懸液各1 滴,放置4℃冰箱孵育15 min 后,1 000 g 離心15 s,輕柔混勻,顯微鏡觀察無紅細胞凝集,結(jié)果仍為陰性。見表2、圖1。

    表2 不同溫度正反定型檢測的血型

    自身對照試驗:將患者紅細胞用0.9%氯化鈉注射液洗滌3 遍,制備成3%的紅細胞懸液備用,取試管加入患者自身血漿2 滴與紅細胞懸液1 滴,混勻后離心,結(jié)果為陰性。見表2。

    吸收放散試驗:取兩管患者濃縮紅細胞1 ml,用0.9%氯化鈉注射液洗滌3 次,最后1 次洗滌后,盡量棄去試管中0.9%氯化鈉注射液。然后分別加入1 ml 抗A、抗B 血清至洗滌后的紅細胞中,將洗滌紅細胞與抗A 血清、抗B 血清充分混勻,放置4℃冰箱孵育2 h,孵育時每隔15 min 輕搖試管,孵育結(jié)束后,在1 000 g 離心5 min,取離心上清轉(zhuǎn)移到另一支試管中,沉淀紅細胞即為吸收處理后的紅細胞。用4℃預(yù)冷0.9%氯化鈉注射液洗滌上述吸收后的紅細胞至少8 遍;取洗滌后的壓縮紅細胞加等量的0.9%氯化鈉注射液,置56℃水浴10 min,水浴期間不斷振搖,從水浴箱中取出試管后,1 000 g 離心,將上層紅色放散液轉(zhuǎn)移到另一試管中;取上清放散液分成三份于標有A、B、O的試管中,分別加入相應(yīng)的A、B、O 標準紅細胞各1 滴,1 000 g 離心,輕柔混勻,顯微鏡觀察無紅細胞凝集,結(jié)果均為陰性,可排除ABO 血型亞型的存在。

    上述過檢測過程顯示,低丙種球蛋白患者血清學(xué)試驗顯示正定型為“O 型”,反定型為“AB型”,患者既沒有A、B 抗原,也沒有A、B 抗體。通過吸收放散試驗排除了亞型,最終確認血型為“O 型”。該患者在臨床治療時輸注O 型紅細胞,未見任何不良輸血反應(yīng),證實了本次疑難血型鑒定的正確性?;颊呓o予輸注丙種球蛋白對癥支持治療及抗感染治療,查體正常后出院。

    2 討論 本試驗血清學(xué)結(jié)果顯示,患者正定型為O 型,反定型為AB 型,既沒有A、B 抗原,也沒有抗A、抗B。增加血漿量和4℃孵育仍無抗體產(chǎn)生。吸收放散試驗也排除了抗原減弱的可能性。先天性無丙種球蛋白血癥是抗體缺陷為主的免疫缺陷病中的一種,無丙種球蛋白或者低丙種球蛋白的人血清中可能檢測不出應(yīng)有的ABO 血型系統(tǒng)抗體[6]。該患者無血液系統(tǒng)疾病,據(jù)患者免疫實驗結(jié)果及臨床診斷,最終報告臨床患者血型為O 型。

    本次報道的血型鑒定,屬于疑難血型的鑒定。對于疑難血型的鑒定,根據(jù)實驗室質(zhì)量保證體系的要求,應(yīng)先核對分析前的因素,包括查看試劑使用有效期及是否有試劑污染,更換實驗工作人員進行血型的復(fù)檢;另外要查看儀器使用狀況,包括離心機的離心力、離心時間的設(shè)置是否正確[7]。血型鑒定一旦出現(xiàn)正反定型不符時,必須重新核對患者化驗單與標本信息[8]??梢钥紤]重新采集患者血樣重新檢測樣本,結(jié)合臨床并進一步用血清學(xué)方法綜合判斷并分析原因,確保血型鑒定的正確性。

    疑難血型鑒定產(chǎn)生的可能原因,包括年齡因素如新生兒和老年人的紅細胞抗原減弱,某些疾病如白血病、惡性腫瘤致紅細胞抗原減弱,異型血的輸入及造血干細胞移植等造成的紅細胞抗原的反應(yīng)減弱[9-10]。另外,血清中抗體減弱也會導(dǎo)致血型鑒定的困難,如存在ABO 亞型,低或無丙種球蛋白,或出現(xiàn)ABO 血型抗體的減少或缺失[11]。本文報道患者出現(xiàn)丙種球蛋白含量減低,同時出現(xiàn)IgA 和IgM 含量減低,增加了血型鑒定的難度。通過吸收放散試驗證實了本次報道的患者不存在血型亞型,快速確定了低丙種球蛋白血癥患者的血型。在標準凝集反應(yīng)檢測中,ABO 亞群系統(tǒng)在紅細胞上的低抗原表達是導(dǎo)致正反向分型差異的原因[12]。中和凝集法可用于ABH 物質(zhì)檢測的驗證。然而,中和技術(shù)是復(fù)雜且耗時的,也需要一定的專業(yè)知識。近來有報道,表面等離子體共振成像技術(shù)被開發(fā)用于檢測紅細胞和唾液中的低表達的ABH 抗原[13]。

    本次疑難血型的鑒定過程,供同行在以后的工作中參考借鑒。此外,對于一些比較難定型的ABO 血型,采用分子生物學(xué)方法進行基因分型輔助鑒定,可以得到較滿意的血型鑒定結(jié)果。

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