甜查理草莓紅葉病防治藥劑篩選的研究

寧志怨 伊興凱 黃錫桂

摘要 [目的]篩選出對草莓紅葉病防治具有較為明顯效果的藥劑。[方法]在離體條件下，測定9種不同類型的殺菌劑對草莓紅葉病原菌絲體的抑制作用，并篩選出抑制作用效果明顯的藥劑在草莓育苗期和生長期進行田間試驗。[結果]在室內篩選出2種抑菌效果較好的藥劑，分別為苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇。上述藥劑對病菌的抑制作用較強，其抑制率分別為95.8%和82.5%。在育苗期和生長期的田間藥效測定均表明，施藥后葉片上的病斑不擴展并保持原有的狀態(tài)，同時草莓開始長出新葉并逐漸恢復正常的生長狀態(tài)。其中在育苗期苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇防效分別達90.16%和82.0%，而在生長期間苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇死棵率的防效分別為61.89%和60.18%。[結論]苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇對草莓紅葉病的防治效果較好，可以在生產中推廣應用。

關鍵詞 草莓;紅葉病;殺菌劑;防效

中圖分類號 S436.68.+4 ?文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2020）05-0146-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.05.040

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract [Objective]To screen efficient fungicides with obvious effects on the control of strawberry red leaf spot disease.[Method]The inhibitory effects of nine different types of fungicides on the pathogen from strawberry red leaf spot were determined in vitro， and the inhibitory effect of the fungicides was screened out. Field trials were conducted during the seedling and growth stage. [Result]Two kinds of fungicides with better inhibitory effects were screened out. Tests also showed that difenoconazole and tebuconazole had stronger inhibitory effects on this pathogen， and the inhibition rates were 95.8% and 82.5% in vitro， respectively. The field test in the seedling and growth stages showed that the lesions on the leaves did not expand and remained in the original state basically after application， and the strawberry plants began to grow new leaves and gradually returned to normal growth state. Among them， the difenoconazole and tebuconazole control effects in the seedling period reached 90.16% and 82.0%， respectively， while rate of control effect to prevent plants from death in the growth period were 61.89% and 60.18%， respectively. [Conclusion]Difenoconazole and tebuconazole had better control effects on strawberry red leaf spot disease and can be popularized and applied in practical production.

Key words Strawberry;Red leaf spot disease;Fungicides;Control effect

草莓（Fragaria ananassa Duch.）薔薇科（Rosaceae）草莓屬（Fragaria L.）多年生草本植物。草莓具有較高的營養(yǎng)價值和經濟價值而在我國廣泛種植。我國主栽的草莓品種甜查理，由于其產量高、抗逆性強和果實耐運輸?shù)忍匦栽谖覈媳本鶑V泛種植[1-5]。但隨著生產發(fā)展，由棒狀擬盤多毛孢菌（Pestalotiopsis clavispora）引起的草莓葉斑病，俗稱紅葉病，近年來在甜查理及其來源的草莓品種上經常發(fā)生，尤其是2017—2018年甜查理草莓紅葉病大量發(fā)生，嚴重時造成整行或整棚甜查理草莓苗死亡，給草莓種植戶造成了較大的損失。目前該病害已在我國主要甜查理草莓種植區(qū)均有發(fā)生，已成為制約我國草莓產業(yè)發(fā)展的重要障礙之一。該病害可危害草莓整個生育期，尤其是移栽后定植生長階段發(fā)生尤為嚴重。甜查理草莓因其早熟性好、產量高和果實耐運輸?shù)忍匦?，種植面積逐漸增加，但其易感染紅葉病，葉片表面形成紅色或褐紅色的病斑，嚴重時造成整株枯死。通過對甜查理草莓病樣病原菌的分離和鑒定等，發(fā)現(xiàn)草莓紅葉病是由棒狀擬盤多毛孢菌所引起[6]。目前對草莓紅葉病的發(fā)生、流行特點以及致病機理等缺乏深入的了解，導致多數(shù)藥劑防控僅憑生產者的經驗，沒有經過嚴格的試驗證實，最終導致大多數(shù)防治效果并不理想。為了能夠有效地防控該病的危害，筆者采用不同類型的殺菌劑對病原菌的菌絲進行篩選，通過篩選出對病原菌具有抑制作用的藥劑在草莓育苗期和定植發(fā)病后通過藥液葉面噴霧方式進行防治，以明確其防治效果，旨在為草莓紅葉病田間科學防控奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試草莓品種均為甜查理草莓。供試病菌：草莓紅葉病菌（Pestalotiopsis clavispora），由安徽省農業(yè)科學院園藝研究所草莓課題組分離、鑒定和保存。供試的培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基，按照文獻[7]的方法進行配制。供試藥劑：10%苯醚甲環(huán)唑WP（先正達作物保護有限公司）、43%戊唑醇WP（拜耳股份公司）、25%嘧菌酯WP（上海滬聯(lián)生物藥業(yè)）、25% 吡唑醚菌酯WP（巴斯夫植物保護）、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑（江蘇省新沂市科大農藥廠）、70%甲基硫菌靈WP（上海升聯(lián)化工有限公司）、75%百菌清WP（山東省青島潤生農化有限公司）、10%多抗霉素（山東省綠士農藥有限公司）、47%春雷霉素（吉林省延邊春雷生物藥業(yè)）、50%多菌靈WP（江蘇藍豐生物化工股份有限公司）。高效植物油助劑（乙基化和甲基化植物油，澳大利亞維多利亞化學品公司生產）。

1.2 不同藥劑對病原菌菌絲的抑制作用

采用菌絲生長速率法研究不同藥劑對病原菌菌絲的抑制作用。參考李樹江等[7]的方法，將供試藥劑稀釋2 000倍，制成含有不同殺菌劑的PDA培養(yǎng)基備用。在藥劑配制時均使用滅菌的蒸餾水。試驗前先將供試菌株在PDA培養(yǎng)基平板上于27 ℃培養(yǎng)7 d，然后用已滅菌的打孔器（d=5 mm）在其菌落邊緣打取菌餅，接種至各含藥平板中央，置于24 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，10～14 d后用十字交叉法測量菌落直徑，并采用以下公式計算抑制率[8-9]。每個處理重復4次，以加入等量滅菌水為對照。

抑菌率=[（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-5）]×100%

抑菌率以SPSS軟件，采用one-way ANOVA test 方法通過Ducan's檢驗分析各藥劑處理之間的差異顯著性。

1.3 田間藥效測定

1.3.1 試驗地概況。

分別在育苗期和生長期研究藥劑對草莓紅葉病的防治效果。上述2個時期的病害防控均在安徽省阜陽市草莓種植基地進行。該地區(qū)位于淮北平原上，處于暖溫帶的南緣，自然條件如光、熱、水等條件均較好，非常適宜于種植草莓。在育苗期，由于紅葉病的蔓延和傳播，部分草莓母株的葉片已經產生了紅葉病的病斑（圖1），因此在育苗期的病害防控試驗中采用葉片的病情指數(shù)研究藥劑對紅葉病的防控效果。在生長期防控試驗中，由于當?shù)厥前不帐√鸩槔淼闹饕N植地區(qū)，在3—4月的設施大棚中，由于病害的侵染，棚內的草莓紅葉病發(fā)生較為嚴重，大部分葉片均已或多或少地出現(xiàn)病斑，部分植株出現(xiàn)死棵現(xiàn)象，因此很難利用葉片的病情指數(shù)來進行統(tǒng)計分析。根據(jù)上述實際情況，該試驗采用植株的死棵率為對象研究藥劑對紅葉病的防控效果。

1.3.2 試驗設計。

根據(jù)“1.2”藥劑篩選結果，選用抑菌效果較好的藥劑進行田間小區(qū)防治試驗。試驗設計以抑制效果較好藥劑的800～1 000倍液的處理，同時設置清水和植物油助劑2個對照。育苗期紅葉病的試驗于2019年4月12日在安徽省阜陽地區(qū)草莓紅葉病發(fā)生時施第1次藥，以后每隔7 d施藥1次，連續(xù)3次;生長定植期試驗于2019年3月底草莓紅葉病加重時噴施第1次藥，以后每隔7 d施藥一次，連續(xù)3次。上述不同階段的試驗每小區(qū)面積20 m.2，重復3次，采用隨機區(qū)組排列。在施藥期間，盡量均勻施藥于葉片的正反面，以葉面霧滴開始下滴為準，試驗期間不使用或盡量少用其他藥劑。

1.3.3 調查統(tǒng)計方法。

在上述試驗中，在藥劑防控試驗開始前分別每個小區(qū)5點取樣，每點隨機選取和標記5株，每株調查4～5片葉。育苗期葉片病害的分級標準參考龍友華等[10]的甘蔗葉片褐斑病的標準分成0～5級。

0級，全株葉片均無病害，植株健康生長;

1級，感病植株葉片上出現(xiàn)的病斑面積占整株葉面積<25%;

2級，感病植株葉片上產生病斑面積占整株葉面積的25%～50%;

3級，感病植株葉片上產生病斑面積占整株葉面積的50%～75%;

4級，感病植株葉片產生病斑面積占整株葉面積的75%以上;

5級，全株葉片病斑擴大連成片，致使植株死亡。

在育苗期和生長期第3次施藥后7～10 d調查并同時記錄每個小區(qū)取樣點葉片的發(fā)病情況或植株的死棵率并進行記錄和統(tǒng)計。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)均采用Excel 2007進行處理。

病情指數(shù)=∑（各級病株數(shù)×該病級值）/（調查總株數(shù)×最高級值）×100

紅葉病減退率=（藥前紅葉病株數(shù)—藥后紅葉病株數(shù)）/藥前紅葉病株數(shù)×100%

防效=（對照病情指數(shù)或死苗率—處理后病情指數(shù)或死苗率）/對照病情指數(shù)或死苗率×100%

2 結果與分析

2.1 不同殺菌劑對草莓紅葉病原菌的抑制作用

按照“1.2”所述方法，測定各種藥劑對紅葉病菌菌絲體生長的抑制作用，結果見表1。從表1可以看出，10%苯醚甲環(huán)唑WP（2 000倍液）和43%戊唑醇WP（2 000倍液）對病原菌的生長抑制作用最強，其抑制率均超過80%，其中10%苯醚甲環(huán)唑WP（2 000倍液）達95.8%，上述2種藥劑具有顯著差異（P<0.05）;70%甲基硫菌靈WP抑菌率最差為26.0%。

2.2 ?田間防效

根據(jù)上述試驗篩選出對紅葉病原菌抑制效果較好的10%苯醚甲環(huán)唑WP（先正達作物保護有限公司）、43%戊唑醇WP（拜耳股份公司）800～1 000倍液對甜查理草莓育苗期和生長階段的草莓紅葉病進行藥劑防控。

2.2.1 育苗期藥劑對草莓紅葉病的防控效果。

在育苗期，在第一次藥劑防控后，試驗組和對照并無顯著差異，但在第2次施藥后不久，試驗組甜查理草莓上紅葉病的病斑不繼續(xù)擴大并保持原有狀態(tài)，同時草莓開始抽出嫩綠色的新葉，隨著時間的延長，草莓逐漸發(fā)出匍匐莖并逐漸恢復正常的生長狀態(tài);后期通過去除老葉，草莓葉片基本很少紅葉病的病斑，其中苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇防效分別達90.16%和82.00%;而與此相反，采用清水和植物油助劑的處理，大部分植株紅葉病的病級均有不同程度的加重，部分植株甚至出現(xiàn)了死棵現(xiàn)象，說明采用清水和助劑處理對病害沒有防控作用（表2和圖1）。這說明，在育苗期采用上述對病原菌具有抑制作用的藥劑對草莓紅葉病的擴展具有明顯的效果。

2.2.2 生長期藥劑對草莓紅葉病的防控效果。

在甜查理草莓生長結果后期，由于處在大棚內，空氣擴散較慢，導致空氣中的紅葉病原菌的孢子含量較大，加之溫度較高導致草莓紅葉發(fā)病率也相對較高，部分植株由于發(fā)病較重已出現(xiàn)了死棵現(xiàn)象。按照表3所述在噴施對紅葉病具有抑制作用的藥劑后，第一次施藥后，對照組和試驗組的草莓紅葉病病癥之間并顯著差異。但在第2次施藥后不久，試驗組紅葉病的死棵率與對照相比明顯減少，同時部分感病相對較輕的草莓上逐漸長出嫩綠色的新葉，逐漸恢復生長。在施藥后40 d后，以清水和助劑作對照的死棵率分別達34.2%和31.5%，而試驗組植物油助劑+苯醚甲環(huán)唑和植物油助劑+戊唑醇處理的死苗率僅為13.2%和12.3%，死棵率防效分別達61.89%和60.18%（表3和圖2）。這說明，在草莓生長期采用上述對病原菌具有抑制作用的藥劑可降低草莓紅葉病死苗率。

3 結論

草莓紅葉病是一種新的草莓病害，染病后植株葉片首先表現(xiàn)紅色病斑，嚴重時造成整株枯死。目前該病害在歐美來源的草莓品種上發(fā)生相對較多，如甜查理和蒙特瑞等;日系來源的品種發(fā)生相對較少，發(fā)病程度也相對較輕。目前由于對草莓紅葉病的侵染、防治過程與致病機理尚不清楚，以及對于病害的發(fā)生、流行特點和規(guī)律缺乏深入的了解，導致對該病害的防治工作盲目和被動。在部分發(fā)病區(qū)，該病害發(fā)生尤為嚴重，很難控制。為了進一步研究不同殺菌劑對該病害的防控效果，該研究在室內研究不同類型殺菌劑對紅葉病病原菌菌絲生長的抑制作用，結果顯示不同藥劑對病菌菌絲生長抑制作用存在顯著差異，其中，苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇的抑制作用最強。但田間藥劑防控預備試驗中，在經過2次藥劑噴施后，苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇對甜查理紅葉病的防控效果實際上并不理想，但在加入高效植物油助劑后，尤其是在育苗期的防效分別達90.16%和82.00%，而在生長期的死棵率的防效分別達61.89%和60.18%。對上述情況的主要原因進行了研究和分析，這可能與該病原菌——擬盤多毛孢菌本身就是一種內生真菌，主要生活在植物細胞內或細胞間，可以在植物體內獨立進行分裂繁殖和傳遞且不易受外界環(huán)境條件的影響，因此當加入植物油助劑時可以在一定程度上增大藥劑直接作用于病原菌的濃度，從而抑制和控制病原菌的生長，促使植物逐漸恢復原有的生長狀態(tài)。此外，還發(fā)現(xiàn)在育苗初期使用上述藥劑對感病草莓植株進行藥劑防控后，后期應定期施用百泰、代森錳鋅和福美雙等保護性殺菌劑和少量治療藥劑，防止育苗后期因降水多造成的土壤濕度大，容易引起該病害的再次發(fā)生。

綜上所述，從室內藥劑抑制力測定和田間試驗結果可以看出，10%苯醚甲環(huán)唑和43%戊唑醇結合高效植物油助劑可以在育苗期和生長期應用于甜查理草莓紅葉病的防控且具有一定的防控效果，該研究為草莓紅葉病田間科學防控奠定了基礎。

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