女貞子提取物治療肝病的研究

呂雅云　龔先瓊

摘要：女貞子的主要提取物具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等多種生物活性，對(duì)不同原因?qū)е碌母螕p傷可多靶點(diǎn)、多通路地發(fā)揮保護(hù)作用。本文就女貞子提取物紅景天苷、齊墩果酸、芹菜素、特女貞苷在治療肝病中的研究進(jìn)行綜述，以期為女貞子及其有效成分在臨床治療肝病的應(yīng)用提供理論參考。

關(guān)鍵詞：女貞子;齊墩果酸;芹菜素;紅景天苷;肝損傷

中圖分類號(hào)：R285.5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.03.010

文章編號(hào)：1006-1959（2020）03-0031-04

Study on Ligustrum Lucidum Extract in Treating Liver Disease

LYU Ya-yun1，GONG Xian-qiong2

（1.Fujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 351012，F(xiàn)ujian，China;

2.Xiamen Traditional Chinese Medicine Hospital，F(xiàn)ujian University of Traditional Chinese Medicine，Xiamen 361009，F(xiàn)ujian，China）

Abstract：The main extract of Ligustrum lucidum has a variety of biological activities such as anti-inflammatory， anti-oxidation， and regulation of immunity. It can protect the liver damage caused by different reasons with multiple targets and multiple pathways. This article reviews the researches of Ligustrum lucidum extract， salidroside， oleanolic acid， apigenin， and ligustrin in the treatment of liver diseases， in order to provide a theory for the application of ligustrum and its active ingredients in clinical treatment of liver diseases reference.

Key words：Ligustrum lucidum;Oleanolic acid;Apigenin;Salidroside;Liver injury

肝損傷（liver injury）是由病毒、酒精、藥物、肥胖等多種因素誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生大量的炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子和氧自由基引起炎癥反應(yīng)，激活肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs），導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡、壞死，肝纖維化形成等一系列病理變化。中藥在治療急慢性肝損傷方面具用獨(dú)特的優(yōu)勢和悠久的歷史，臨床應(yīng)用較廣。女貞子為木犀科植物女貞的干燥成熟果實(shí)，入肝腎經(jīng)，具用滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)的作用，常用于治療各種原因所致的肝損傷。現(xiàn)代研究證實(shí)女貞子具有抗炎、保肝、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化和調(diào)節(jié)血脂等多種藥理作用[1]，其提取物主要包括三萜類如齊墩果酸[2]，環(huán)烯醚萜類如特女貞苷[3]，黃酮類如芹菜素[4]，苯乙醇類如紅景天苷[5]等。研究表明女貞子提取物能夠明顯改善各種原因引起的急慢性肝損傷。本文就對(duì)女貞子提取物保肝機(jī)制研究進(jìn)行綜述，以期為女貞子及其有效成分治療肝損傷提供一定理論參考。

1紅景天苷

酒精、藥物、毒性物質(zhì)等多種化學(xué)物質(zhì)可對(duì)肝臟造成損害，研究發(fā)現(xiàn)[6]，紅景天苷可明顯改善四氯化碳（carbon tetrachloride，CC14）誘導(dǎo)的小鼠肝損傷，下調(diào)絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）信號(hào)通路中氧化應(yīng)激相關(guān)基因如生長阻滯和DNA損傷基因（growth arrest and DNA damage gene，Gadd）45a，Mapk7，重組人相關(guān)RAS病毒癌基因同源物2（recombinant human related RAS viral oncogene homolog 2，Rras2）的蛋白表達(dá)水平，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，減輕線粒體損傷。

在包括肝移植和肝切除術(shù)在內(nèi)的大型肝臟手術(shù)中，缺血再灌注（ischemical reperfusion injury，IRI）是手術(shù)過程及術(shù)后常見的并發(fā)癥，改善IRI狀態(tài)是提高肝移植及肝切除手術(shù)成功率的重要環(huán)節(jié)，而紅景天苷可通過抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥及抗細(xì)胞凋亡等方式改善肝INR狀態(tài)。Feng J等[7]在分段型肝熱IRI模型中發(fā)現(xiàn)，紅景天苷通過抑制MAPK信號(hào)通路的激活，改善肝臟炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和自噬，減輕肝IRI損傷。亦有研究提出紅景天苷對(duì)分段型肝熱IRI小鼠的保護(hù)作用可能是通過激活糖原合成酶激酶-3（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）/核轉(zhuǎn)運(yùn)因子2（nuclear transport factor 2，Nrf-2）信號(hào)通路抑制線粒體膜通道孔（mitochondrial permeablity transition pore，MPTP），減輕肝細(xì)胞壞死和凋亡，從而發(fā)揮保肝作用[8]。

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）被認(rèn)為是代謝綜合征的“肝表現(xiàn)”，其與代謝綜合征密切相關(guān)，如不干預(yù)，單純性非酒精性脂肪性肝病會(huì)進(jìn)一步進(jìn)展為非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH），伴隨著脂質(zhì)過氧化和氧自由基的產(chǎn)生，可進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)和激活肝星狀細(xì)胞，導(dǎo)致肝纖維化形成，甚至進(jìn)展為肝硬化、肝癌[9-11]。Yang ZR等[12]發(fā)現(xiàn)紅景天苷可抑制高脂高膽固醇飲食誘導(dǎo)的NASH大鼠肝臟細(xì)胞色素P450家族成員2E1（cytochrome P450 2E1，CYP2E1）和Nox2 蛋白表達(dá)，降低MDA水平和提高SOD等抗氧化酶的活性，提出其通過抑制CYP2E1/Nox途徑，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，改善肝脂肪變性及炎癥浸潤，減少脂質(zhì)積累，減輕NASH大鼠肝損傷。Zheng T等[13]指出紅景天苷對(duì)NAFLD的保護(hù)作用機(jī)制與其通過抑制硫氧還蛋白互作蛋白（thioredoxin-interactingprotein，TXNIP）/NLRP3信號(hào)通路的激活，改善肝臟脂質(zhì)代謝，減輕炎癥損傷相關(guān)。

肝纖維化是各種慢性肝病后期的病理變化。多項(xiàng)研究表明轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）與肝纖維化進(jìn)展密切相關(guān)。HSCs是細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）的主要來源，TGF-β1是HSCs活化的重要因子，在肝纖維化進(jìn)展中起重要作用。紅景天苷能顯著改善CC14和膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的肝纖維化，抑制ECM的生成，降低Beclin-1和LC3水平及下調(diào)核因子-κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表達(dá)水平，并提高P62和IκBα的表達(dá)水平，紅景天苷通過下調(diào)NF-κB和TGF-β1/Smad3信號(hào)通路減少細(xì)胞自噬，抑制小鼠HSCs活化，發(fā)揮其抗肝纖維化作用[14]。

肝癌是最嚴(yán)重的慢性肝病，也是導(dǎo)致肝病患者死亡的主要原因之一。呂紅梅等研究發(fā)現(xiàn)[15]，紅景天苷顯著降低 HepG2細(xì)胞與基膜的粘附力及抑制肝癌細(xì)胞的基質(zhì)金屬蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1， MMP1）mRNA的表達(dá)，抑制肝癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。最新研究發(fā)現(xiàn)[16]，紅景天苷顯著減少傷口閉合區(qū)域以抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移，抑制肝癌細(xì)胞對(duì)基質(zhì)膜的侵襲，明顯下調(diào)了Notch1、環(huán)氧化酶 2（Cyclooxygenase，COX2）、MMP-2、MMP-9基因表達(dá)，抑制Notch信號(hào)傳導(dǎo)靶基因Hey1、Hes1和Hes5的表達(dá)，并呈劑量依賴性地上調(diào)了上皮性鈣粘附蛋白（E-cadherin）的表達(dá)，提示紅景天苷通過調(diào)節(jié)Notch1信號(hào)通路來抑制肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移?？傊?，紅景天苷可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡與自噬，抑制肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，具有潛在的抗癌活性。

2齊墩果酸

Wan XL等[17]在D-氨基半乳糖（D-galactosamine，D-GalN）/脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）介導(dǎo)的急性肝損傷中發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸干預(yù)后可明顯降低小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶、肝組織中丙二醛（malondialdehyde， MDA）水平，升高谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平，可抑制半胱氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate specific proteinase，caspase）、COX2及腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和Gadd45的mRNA的表達(dá)，降低磷酸化c-Jun氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase，p-JNK）和NF-kBp65的蛋白表達(dá)水平，齊墩果酸可能通過抑制TNF-α激活的NF-κB/JNK信號(hào)通路減輕肝損傷。

Wang W等[18]在分段性肝熱IRI模型中發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸通過抑制高遷移率族蛋白B1（high mobility group box 1， HMGB1）的表達(dá)，及抑制TNF-α介導(dǎo)的JNK磷酸化，上調(diào)B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）的表達(dá)及下調(diào)Bcl-2-相關(guān) X蛋白（BCL2-associated X protein，Bax）和Beclin1活化后誘導(dǎo)的caspase9的表達(dá)，改善炎癥，抑制細(xì)胞凋亡及自噬反應(yīng)，減輕肝損傷。亦有學(xué)者發(fā)現(xiàn)齊墩果酸可顯著上調(diào)分段性肝熱IRI小鼠Sestrin 2 蛋白 （Sesn2）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase ，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）、HO-1等抗氧化酶的表達(dá)[19]，表明齊墩果酸可通過調(diào)節(jié)HO-1/Sesn2信號(hào)通路改善氧化應(yīng)激，降低肝IRI的發(fā)生。

固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1C（sterol regulatory element-binding protein 1C，SREBP-1C）是肝臟脂質(zhì)合成重要的轉(zhuǎn)錄因子，它通過胰島素介導(dǎo)調(diào)節(jié)多種肝臟脂質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)，如乙酰輔酶A羧化酶（scetyl-CoA carboxylase，ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）、硬脂酰輔酶A去飽和酶（stearoyl-CoA desaturase-1，SCD-1）[20，21]。有研究表明[22]，齊墩果酸可顯著抑制SREBP-1c mRNA和核蛋白及其下游靶基因如ACC-1、FAS、SCD-1的表達(dá)，提示下調(diào)SREBP-1c的表達(dá)，減少其下游脂質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)是齊墩果酸減輕高果糖飲食誘導(dǎo)的NAFLD大鼠肝脂肪病變的重要作用機(jī)制。

3芹菜素

在D-GalN/LPS誘導(dǎo)的小鼠肝損傷模型中，芹菜素治療可明顯改善肝損傷，小鼠肝組織NF-κB蛋白表達(dá)水平及TNF-α的水平明顯下降;Nrf-2、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）蛋白表達(dá)水平明顯升高，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）等抗氧化酶的活性增強(qiáng)，芹菜素的保肝機(jī)制可能與其調(diào)控PPARγ/NF-κB信號(hào)通路抑制炎癥反應(yīng)，上調(diào)Nrf-2信號(hào)通路增強(qiáng)抗氧化應(yīng)激有關(guān)[23]。

Tsaroucha AK等研究發(fā)現(xiàn)[24]，芹菜素能抑制肝IRI大鼠肝組織Kupffer細(xì)胞的活化，促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，抑制Bax、細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）、M30的表達(dá)，從而減輕肝臟炎癥反應(yīng)，抑制氧化應(yīng)激和改善細(xì)胞凋亡的病理變化，延緩肝IRI的進(jìn)程。有研究發(fā)現(xiàn)[25]，芹菜素可減輕肝細(xì)胞脂肪變性，增強(qiáng)胰島素抵抗，抑制NLRP3炎性小體的激活及黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）活動(dòng)，減少尿酸和活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生，改善肝臟脂質(zhì)積累和炎癥，表明芹菜素可能通過下調(diào)XO/NLRP3的表達(dá)改善高脂飲食（high fat diet，HFD）誘導(dǎo)的NASH。

有研究認(rèn)為[26]，C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白2（C1q tumor necrosis factor-related protein 2，C1QTNF2）在肝硬化進(jìn)展中發(fā)揮著保護(hù)作用，可以維持HSCs靜止?fàn)顟B(tài)，而芹菜素可能通過調(diào)控C1QTNF2的表達(dá)發(fā)揮抗纖維化的作用。另有研究顯示[27]，在CC14誘導(dǎo)的肝纖維化模型中，芹菜素的抗肝纖維化作用可能與其提高M(jìn)MP1表達(dá)，抑制金屬蛋白酶組織抑制因子1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）表達(dá)，促進(jìn)ECM降解有關(guān)。PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、增殖、凋亡和自噬方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。有研究發(fā)現(xiàn)[28]，芹菜素可降低HepG2細(xì)胞中磷酸化的PI3K、Akt和mTOR的水平，增加了LC3-Ⅱ蛋白水平及HepG2細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Atg5和beclin-1的表達(dá)，從而誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡和自噬，說明芹菜素通過抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬，從而抑制HepG2細(xì)胞的生長。

4特女貞苷

胡冬梅等研究發(fā)現(xiàn)[29]，特女貞苷可降低CCl4誘導(dǎo)肝損傷模型小鼠血清炎癥因子如TNF-α、白細(xì)胞介素-6（interleukin 6，IL-6）等的水平，減輕肝臟的炎癥的反應(yīng);并可抑制小鼠肝組織MDA的產(chǎn)生，增加抗氧化酶活性，上調(diào)肝組織Nrf-2、血紅素加氧酶 1（heme oxygenase-1，HO-1）、谷氨酸-半胱氨酸連接酶催化亞基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit，GCLC）和NADPH醌氧化還原酶1[NAD（P）H Dehydrogenase Quinone 1，NQO1]蛋白表達(dá)水平，特女貞苷可通過激活Nrf-2/HO-1信號(hào)通路，抑制CC14誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，改善肝損傷。

5總結(jié)

女貞子提取物有抗氧化應(yīng)激、抑制脂質(zhì)過氧化、抗炎、抑制HSCs的活化、促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡與自噬等多種生物活性作用，可通過多靶點(diǎn)、多信號(hào)通路改善各種急慢性肝損傷。女貞子提取物的各種單體在肝損傷中有重要的藥理學(xué)價(jià)值，是潛在的有效治療藥物。目前，女貞子提取物治療肝損傷尚局限在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，需進(jìn)一步研究女貞子提取物的安全性、有效性，為女貞子提取物治療肝損傷的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]張娜娜，張振巍，石磊.女貞子抗腫瘤活性成分提取工藝考察[J].中國藥師，2015，18（2）：215-219.

[2]譚文廣，劉偉，魯菲菲，等.女貞子中三萜化合物的提取與含量測定[J].食品科學(xué)，2006，27（11）：260-262.

[3]楊陽，易駿，馬利，等.多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)化女貞子中環(huán)烯醚萜苷的提取工藝[J].中國藥房，2016，27（28）：3970-3973.

[4]徐小花，楊念云，錢士輝，等.女貞子黃酮類化合物的研究[J].中藥材，2007，30（5）：538-540.

[5]張立海，宋友華，孫春華，等.反相高效液相色譜法測定女貞子中紅景天苷的含量[J].中國藥學(xué)雜志，2001，36（11）：42-43.

[6]Lin SY，Dan X，Du XX，et al.Protective Effects of Salidroside against Carbon Tetrachloride （CCl4）-Induced Liver Injury by Initiating Mitochondria to Resist Oxidative Stress in Mice[J]. Int J Mol Sci，2019，20（13）：3187.

[7]Feng J，Zhang Q，Mo W，et al.Salidroside pretreatment attenuates apoptosis and autophagy during hepatic ischemia–reperfusion injury by inhibiting the mitogen-activated protein kinase pathway in mice[J].Drug Des Devel Ther，2017（11）：1989-2006.

[8]Cai L，Li Y，Zhang Q，et al.Salidroside protects rat liver against ischemiareperfusion injury by regulating the GSK-3β/Nrf-2-dependent antioxidant response and mitochondrial permeability transition[J].Eur J Pharmacol，2017（806）：32-42.

[9]Lonardo A，Ballestri S，Marchesini G，et al.Nonalcoholic fatty liver disease：A precursor of the metabolic syndrome[J].Dig Liver Dis，2015，47（3）：181-190.

[10]Asrih M，Jornayvaz FR.Metabolic syndrome and nonalcoholic fatty liver disease：Is insulin resistance the link[J].Mol Cell Endocrinol，2015（418）：55-65.

[11]Castro GS，Cardoso JF，Vannucchi H，et al.Fructose and NAFLD：metabolic implications and models of induction in rats[J].Acta Cir Bras，2011（26 Suppl 2）：45-50.

[12]Yang ZR，Wang HF，Zuo TC，et al.Salidroside alleviates oxidative stress in the liver with non- alcoholic steatohepatitis in rats[J].BMC Pharmacol Toxicol，2016，17（1）：16.

[13]Zheng T，Yang X，Li W，et al.Salidroside Attenuates High-Fat Diet-Induced Nonalcoholic Fatty Liver Disease via AMPK-Dependent TXNIP/NLRP3 Pathway[J].Oxid Med Cell Longev，2018（2018）：1-17.

[14]Feng J，Chen K，Xia Y，et al.Salidroside ameliorates autophagy and activation of hepatic stellate cells in mice via NF-kB and TGF-β1/Smad3 pathways[J].Drug Des Devel Ther，2018（12）：1837-1853.

[15]呂紅梅，張慶江.紅景天苷對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞MMP-1的表達(dá)及粘附能力的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2015，43（4）：65-66.

[16]Lu L，Liu S，Dong Q，et al.Salidroside suppresses the metastasis of hepatocellular carcinoma cells by inhibiting the activation of the Notch1 signaling pathway[J].Mol Med Rep，2019，19（6）：4964-4972.

[17]Wan XL，Lu YF，Xu SF，et al.Oeanolic acid protects against the hepatotoxicity of D-galactosame plus endotoxin in mice[J].Biomed Pharmacother，2017（93）：1040-1046.

[18]Wang W，Wu L，Li J，et al.Alleviation of Hepatic Ischemia Reperfusion Injury by Oleanolic Acid Pretreating via Reducing HMGB1 Release and Inhibiting Apoptosis and Autophagy[J].Mediators Inflamm，2019（2019）：1-10.

[19]Hao BB，Pan XX，F(xiàn)an Y，et al.Oleanolic acid attenuates liver ischemia reperfusion injury by HO-1/Sesn2 signaling pathway[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2016，15（5）：519-524.

[20]Valic Z，Tappy L， Lê KA，et al.Metabolic Effects of Fructose and the Worldwide Increase in Obesity[J].Journal of Applied Physiology，2001，90（1）：23-28，46.

[21]Postic C，Girard J.Contribution of de novo fatty acid synthesis to hepatic steatosis and insulin resistance：lessons from genetically engineered mice[J].J Clin Invest，2008，118（3）：829-838.

[22]Liu C，Li Y，Zuo G，et al.Oleanolic Acid Diminishes Liquid Fructose-Induced Fatty Liver in Rats： Role of Modulation of Hepatic Sterol Regulatory Element-Binding Protein-1c-Mediated Expression of Genes Responsible for De Novo Fatty Acid Synthesis[J].Evid Based Complement Alternat Med，2013（2013）：1-11.

[23]Zhou RJ，Ye H，Wang F，et al.Apigenin inhibits d -galactosamine/LPS-induced liver injury through upregulation of hepatic Nrf-2 and PPARγ expressions in mice[J].Biochem Biophys Res Commun，2017，493（1）：625-630.

[24]Tsaroucha AK，Tsiaousidou A，Ouzounidis N，et al.Intraperitoneal administration of apigenin in liver ischemiareperfusion injury protective effects[J].Saudi J Gastroenterol，2016，22（6）：415.

[25]Lv Y，Gao X，Luo Y，et al.Apigenin ameliorates HFD-induced NAFLD through regulation of the XO/NLRP3 pathways[J].J Nutr Biochem，2019（71）：110-121.

[26]Hicks DF，Goossens N，Blas-García A，et al.Transcriptome-based repurposing of apigenin as a potential anti-fibrotic agent targeting hepatic stellate cells[J].Sci Rep，2017，7（1）：42563.

[27]莊讓笑，潘旭旺，方紅英，等.芹菜素納米乳抗大鼠肝纖維化作用及對(duì)MMP-1，TIMP-1的影響[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2016，21（10）：1122-1125.

[28]Yang J，Pi C，Wang G.Inhibition of PI3K/Akt/mTOR pathway by apigenin induces apoptosis and autophagy in hepatocellular carcinoma cells[J].Biomedicine&Pharmacotherapy，2018（103）：699-707.

[29]胡冬梅.特女貞苷對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D].西北大學(xué)，2017.

收稿日期：2019-10-22;修回日期：2019-11-10

編輯/肖婷婷