2014~2018年某三甲醫(yī)院產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌耐藥性及患者臨床特征分析

王君君 張瑩

摘要：目的? 分析某三級甲等醫(yī)院分離的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌耐藥性及患者的臨床特征。方法? 收集2014～2018年某三甲醫(yī)院臨床分離的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌，進行菌種鑒定、抗菌藥物敏感性試驗并對藥物的耐藥率進行分析;收集患者的臨床資料，并對感染患者臨床特征進行分析。結(jié)果? 2014～2018年臨床分離的423株產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌均來自下呼吸道標(biāo)本，來源以呼吸內(nèi)科為主，年齡>60歲、合并有支氣管擴張等肺部基礎(chǔ)疾病的患者易引起產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的感染;2015～2018年產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌對亞胺培南、美羅培南的耐藥率逐年下降。結(jié)論? 產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌對碳青霉烯類抗生素及氨基糖苷類抗生素耐藥率較低，低于非產(chǎn)生物膜的銅綠假單胞菌，臨床微生物學(xué)實驗室應(yīng)選用可靠的藥敏方法和合適的培養(yǎng)時間，為臨床醫(yī)生提供準(zhǔn)確的藥敏結(jié)果。

關(guān)鍵詞：產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌;耐藥性;臨床特征

中圖分類號：R378.99+1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.02.037

文章編號：1006-1959（2020）02-0129-03

Abstract：Objective To analyze the drug resistance of Pseudomonas aeruginosa produced in a tertiary hospital and its clinical characteristics. Methods? The clinically isolated Pseudomonas aeruginosa produced in a top three hospital from 2014 to 2018 was collected for strain identification， antibacterial sensitivity test， and analysis of drug resistance rate. Collect clinical data of patients and analyze the clinical characteristics of infected patients.Results? The 423 strains of Pseudomonas aeruginosa that were clinically isolated from 2014 to 2018 were derived from lower respiratory tract specimens. The source was mainly from respiratory medicine. Patients>60 years of age who had lung diseases such as bronchiectasis were prone to cause Infection of biofilm Pseudomonas aeruginosa; the drug-resistance rate of biofilm Pseudomonas aeruginosa to imipenem， and meropenem decreased from 2015 to 2018. Conclusion? The biofilm-resistant Pseudomonas aeruginosa has a low resistance rate to carbapenem antibiotics and aminoglycoside antibiotics， which is lower than that of non-biofilm-producing Pseudomonas aeruginosa. Clinical microbiology laboratories should choose reliable drugs Sensitization methods and appropriate incubation times provide clinicians with accurate drug sensitivity results.

Key words：Pseudomonas aeruginosa producing drug resistance;Drug resistance;Clinical characteristics

銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa）是ESKAPE病原菌之一[1]，由于多重耐藥甚至泛耐藥菌株的出現(xiàn)給臨床治療帶來了極大的挑戰(zhàn)，產(chǎn)生物膜的銅綠假單胞菌對抗菌藥物和宿主免疫反應(yīng)的敏感性低于不產(chǎn)生物膜的銅綠假單胞菌，有研究顯示產(chǎn)生物膜的銅綠假單胞菌表現(xiàn)出比不產(chǎn)生物膜的銅綠假單胞菌高出100～1000倍的最低抑菌濃度（MICs），給臨床治療帶來極大的挑戰(zhàn)。本研究對2014～2018年本院臨床分離的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的臨床特征及抗菌藥物的耐藥率進行分析，以期為指導(dǎo)臨床抗菌藥物的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料和方法

1.1菌株來源? 所有菌株均分離自2014～2018年我院送檢的下呼吸道標(biāo)本，剔除同一患者相同部位重復(fù)分離株，其中2014年痰（sputum，SP）標(biāo)本51例，支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）0例;2015年痰標(biāo)本78例，支氣管肺泡灌洗液0例;2016年痰標(biāo)本82例，支氣管肺泡灌洗液2例;2017年痰標(biāo)本98例，支氣管肺泡灌洗液9例;2018年痰標(biāo)本91例，支氣管肺泡灌洗液12例。

1.2主要儀器與試劑? VITEK2 compact全自動細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)、細(xì)菌鑒定卡、M-H瓊脂培養(yǎng)基均為法國生物梅里埃公司生產(chǎn)，藥敏紙片為英國Oxoid公司產(chǎn)品。

1.3質(zhì)控菌株? 銅綠假單胞菌ATCC27853來源于衛(wèi)生部臨床檢驗中心。

1.4方法

1.4.1標(biāo)本處理? 所有標(biāo)本處理按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第四版[2]進行，標(biāo)本劃線分離法接種血平板、中國藍(lán)平板及含萬古霉素的巧克力培養(yǎng)基，置于5%CO2，35℃培養(yǎng)18～24 h，觀察細(xì)菌生長情況，細(xì)菌生長緩慢時，延長培養(yǎng)時間。

1.4.2細(xì)菌鑒定與藥物敏感性試驗? 疑似菌株進行氧化酶試驗，氧化酶陽性的細(xì)菌使用VITEK2 compact全自動細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)及配套的GN鑒定卡進行鑒定。藥敏試驗均采用K-B紙片擴散法，0.5麥?zhǔn)暇和坎加贛H平板，35±2℃培養(yǎng)48 h，游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑?？咕幬锇ǎ哼呃髁?、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢他啶、頭孢吡肟、氨曲南、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星?？咕幬锩舾行砸罁?jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2018版的標(biāo)準(zhǔn)[3]進行判定。

1.4.3臨床資料收集? 通過醫(yī)院HIS系統(tǒng)收集患者的臨床資料，分析產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌感染患者臨床特征。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法? 藥物敏感性采用 WHONET 5.6軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用（n）或（%）表示。

2結(jié)果

2.1標(biāo)本類型? 2014～2018年臨床分離的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的標(biāo)本均以痰（SP）標(biāo)本為主，支氣管肺泡灌洗液（BALF）標(biāo)本比例呈逐年上升趨勢，見表1。

2.2科室分布? 2014～2018年共分離出產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌423株，共22個科室分離出產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌，其中前3位為呼吸內(nèi)科65.01%（275/423），結(jié)核病專科14.18%（60/423），中醫(yī)科6.86%（29/423），見表2。

2.3性別及年齡分布

2.3.1性別分布? 2014～2018年分離出的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌患者中，男性192例，占總患者人數(shù)的45.40%，女性231例，占總患者人數(shù)的54.60%，患者在性別分布上沒有明顯差異。

2.3.2年齡分布? 2014～2018年分離出的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的患者在年齡分布上以>60歲的老年人為主，占總患者人數(shù)的67.69%（287/424），其次是30～60歲，占31.60%（134/424），0～30歲最低，占0.71%（3/424）。

2.4疾病類型? 2014～2018年分離出的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的患者現(xiàn)病史以呼吸系統(tǒng)疾病為主，主要為支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病、阻塞性肺氣腫，常見呼吸系統(tǒng)疾病類型及各類型所占的構(gòu)成比例見表3。

2.5抗菌藥物的耐藥性變遷? 2014～2018年產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌對頭孢吡肟的耐藥率逐年下降，2015 ～2018年產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌對亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素的耐藥率逐年下降;2018年數(shù)據(jù)顯示，產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌對頭孢吡肟、亞胺培南、美羅培南的耐藥率均低于10.00%， 2014～2018年分離出的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的抗菌藥物耐藥率見表4。

3討論

產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌由于O-乙?；怕逄侨┧岷透事短侨┧峤M成的黏液型胞外多糖產(chǎn)生過量，常導(dǎo)致銅綠假單胞菌體外培養(yǎng)產(chǎn)生黏液型菌落而體內(nèi)以生物膜的形式生長，由于體內(nèi)生物膜的存在可干擾正常宿主的吞噬防御，常導(dǎo)致細(xì)菌難以被徹底清除，從而引起感染的復(fù)發(fā)或慢性細(xì)菌性感染，常與患者肺功能的快速下降和預(yù)后不良有關(guān)[4]。本研究通過對2014～2018年分離出的產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的臨床資料進行分析，發(fā)現(xiàn)423株產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌均來自下呼吸道標(biāo)本，標(biāo)本來源以呼吸內(nèi)科為主，并且發(fā)現(xiàn)年齡>60歲，合并有支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病、阻塞性肺氣腫等肺部基礎(chǔ)疾病的患者易引起產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的感染，分析原因可能與囊性纖維化患者易引起產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌感染相似，呼吸道中纖毛液體量減少而導(dǎo)致了對吸入微生物的清除延遲[4]，導(dǎo)致細(xì)菌之間、細(xì)菌與宿主之間發(fā)生黏附，細(xì)菌釋放大量的胞外多糖，進而形成生物膜。研究顯示[5]，銅綠假單胞菌通過群體感應(yīng)來調(diào)節(jié)毒力和生物膜形成，國內(nèi)外研究顯示[6，7]大環(huán)內(nèi)酯類抗生素阿奇霉素可通過抑制群體感應(yīng)系統(tǒng)有效抑制生物膜的形成。

2018年CHINET數(shù)據(jù)（http：//www.chinets.com/Chinet）顯示，23431株銅綠假單胞菌對抗菌藥物的耐藥率小于10%的藥物僅為多粘菌素B和阿米卡星，對碳青霉烯類抗菌藥物亞胺培南、美羅培南的耐藥率分別達(dá)到了30.7%和25.8%，本研究中2018年產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌（103株）的抗菌藥物的耐藥率低于CHINET數(shù)據(jù)中銅綠假單胞菌抗菌藥物的耐藥率，對碳青霉烯類抗菌藥物亞胺培南、美羅培南的耐藥率分別為8.90%和1.90%，可能與這些菌株免受抗生素的選擇性壓力有關(guān)[4]。

綜上所述，對于年齡>60歲，合并有支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病、阻塞性肺氣腫等肺部基礎(chǔ)疾病反復(fù)發(fā)生肺部感染的患者，臨床醫(yī)生應(yīng)警惕產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌感染的可能，應(yīng)及時送檢合格下呼吸道標(biāo)本進行細(xì)菌培養(yǎng)。臨床微生物實驗室分離到產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌時，因與不產(chǎn)生物膜銅綠假單胞菌的耐藥率存在明顯差異，實驗室應(yīng)選用紙片擴散法或Etest法作為常規(guī)敏感性試驗方法，由于這些菌株在24 h內(nèi)生長不良，將孵育時間延長至48 h后讀取藥敏結(jié)果，為臨床醫(yī)生提供準(zhǔn)確的藥敏結(jié)果，同時應(yīng)在檢驗報告單上備注或及時與臨床醫(yī)生溝通，以便臨床醫(yī)生結(jié)合藥敏結(jié)果和生物膜特性，選擇合理的聯(lián)合用藥方案。

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收稿日期：2019-10-15;修回日期：2019-10-25

編輯/肖婷婷