犢牛腹瀉性大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗

郭永恒

(甘州區(qū)堿灘鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，甘肅張掖734014)

犢牛腹瀉是一種臨床中比較常見的疾病，其主要是病原菌為大腸桿菌，高達(dá)90%的腹瀉基本都是大腸桿菌引起的[1]。犢牛由大腸桿菌感染引起的腹瀉病，俗稱牛白痢，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中具有比較高的發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重威脅著犢牛的健康生長[2]。大腸桿菌為條件致病菌，腸毒素是引起大腸菌肝致病的主要條件，當(dāng)其刺激腸道腸黏膜的上皮細(xì)胞時，使其細(xì)胞內(nèi)的離子失衡進而引起動物產(chǎn)生腹瀉[3-4]。犢牛腹瀉的臨床癥狀主要有腹瀉嚴(yán)重，高燒、偶爾會排出含有凝乳塊的稀糞，犢牛伴隨嘔吐，出現(xiàn)脫水癥狀、精神萎靡等，后期嚴(yán)重時會導(dǎo)致其死亡[5]。犢牛腹瀉后會產(chǎn)生生長發(fā)育緩慢、滯后，影響其生長性能，導(dǎo)致整個養(yǎng)殖周期的經(jīng)濟效益。目前，隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的快速、規(guī)模發(fā)展，為了減少因犢牛腹瀉引起的經(jīng)濟損失，在臨床中當(dāng)犢牛出現(xiàn)腹瀉一般采用抗生素藥物治療。在治療過程中難免出現(xiàn)藥物濫用的問題，導(dǎo)致大腸桿菌對一些臨床中常用的藥物產(chǎn)生耐藥性，很難對癥下藥，錯過最佳的治療時間，而產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟損失。因此，本試驗通過對引起犢牛腹瀉的大腸桿菌進行分離鑒定和藥敏試驗，以期為甘肅地區(qū)的獸醫(yī)在臨床中科學(xué)的診斷和治療犢牛腹瀉提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

甘肅地區(qū)某規(guī)?；馀ｐB(yǎng)殖場患腹瀉病的犢牛。

1.2 試驗藥品及試劑

細(xì)菌培養(yǎng)基、細(xì)菌生化編碼鑒定管等試驗藥品和耗材均購自于上海生工生物工程股份有限公司。藥敏試紙片頭孢他啶、紅霉素、強力霉素等購自于杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 試驗儀器

高壓蒸汽滅菌鍋、全自動微生物生化/藥敏鑒定儀、超凈無菌工作臺、顯微鏡、細(xì)菌恒溫培養(yǎng)箱等。

1.4 試驗方法

1.4.1 培養(yǎng)基的制作 試驗過程中所用的到各種培養(yǎng)基均按照標(biāo)準(zhǔn)方法配置[6]

1.4.2 細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定 將采集犢牛肛門處的糞便放入培養(yǎng)基中37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后劃線接種于各種培養(yǎng)基中繼續(xù)37 ℃培養(yǎng)24 h。挑取單個菌落用于革蘭染色，用顯微鏡觀察染色結(jié)果初步判斷菌種。再將分離菌接種到細(xì)菌生化編碼鑒定管中繼續(xù)37 ℃培養(yǎng)24 h，最終觀察培養(yǎng)試驗結(jié)果。

1.4.3 藥敏試驗 將分離得到的大腸桿菌使用14種臨床中常用藥物的藥敏片進行藥敏試驗，判定結(jié)果以美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(CLSI)推薦的藥敏試驗結(jié)果判定(2006版)為標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌落形態(tài)結(jié)果

在普通固體瓊脂培養(yǎng)基上菌落形態(tài)為灰白色、光滑；在SS瓊脂培養(yǎng)基上菌落為紅色；在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上菌落為圓形、邊緣整齊、凸起、表面光滑、紫黑色帶有金屬光澤；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上菌落為圓形、整齊、扁平、光滑、濕潤、中心為深紅色。

2.2 革蘭染色結(jié)果

在顯微鏡下可看見紅色、短小、桿狀、兩端圓滑、略微彎曲的桿菌。

2.3 生化鑒定結(jié)果(詳見表1)

表1 分離菌株生化鑒定結(jié)果

由表1可知，細(xì)菌生化反應(yīng)試驗結(jié)果符合大腸桿菌生化反應(yīng)特性。

2.4 藥敏試驗結(jié)果(詳見表2)

由表2可知，分離的大腸桿菌對頭孢哌酮和頭孢呋辛藥物中度敏感；對頭孢他啶、米諾環(huán)素、頭孢曲松和頭孢唑林藥物敏感；對其他剩余藥物產(chǎn)生耐藥性。

表2 藥敏試驗一覽表

3 討論

本試驗結(jié)果表明，甘肅地區(qū)某規(guī)模肉牛場引起犢牛腹瀉主要是由大腸桿菌所致。試驗選取的14種臨床常用治療腹瀉的藥物中，該場腹瀉犢牛對頭孢哌酮和頭孢呋辛藥物中度敏感；對頭孢他啶、米諾環(huán)素、頭孢曲松和頭孢唑林藥物敏感；對紅霉素等其他剩余藥物產(chǎn)生耐藥性。陳虹豆等[7]的研究中，分離得到的引起犢牛腹瀉的大腸桿菌對諾氟沙星和環(huán)丙沙星有良好的敏感性，對米諾環(huán)素有輕微的敏感性，而本試驗結(jié)果表明，腹瀉犢牛使用環(huán)丙沙星卻沒有什么治療效果，造成以上不同結(jié)果的原因可能是大腸桿菌對這3種藥物的敏感性發(fā)生變化，本試驗牛場在日常治療腹瀉的時候，經(jīng)常使用環(huán)丙沙星，因此大腸桿菌產(chǎn)生了耐藥性，在治療的時候效果不是很好。通過以上結(jié)果顯示，在對腹瀉犢牛治療過程中，應(yīng)先確定主要是由哪種致病菌引起的，并對致病菌進行藥敏試驗，確定何種藥物具有很好的治療效果，不能盲目用藥，反復(fù)治療無效果，錯過最佳的治療時間，導(dǎo)致犢牛生長緩慢甚至死亡，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失[8]。此外，加強飼養(yǎng)管理，定期清理犢牛舍，做好環(huán)境衛(wèi)生消毒工作，減少致病菌和病毒的滋生，是降低犢牛腹瀉發(fā)病率的有效措施[9]。

4 小結(jié)

綜上所述，甘肅地區(qū)某規(guī)模肉牛場引起犢牛腹瀉的主要致病菌為大腸桿菌，并對頭孢哌酮和頭孢呋辛藥物中度敏感；對頭孢他啶、米諾環(huán)素、頭孢曲松和頭孢唑林藥物敏感；對其他藥物產(chǎn)生耐藥性。