肺炎支原體檢測(cè)方法的比較分析

方治翔

（浙江長興縣人民醫(yī)院，浙江 湖州 313100）

肺炎支原體（MP）是最小的原核細(xì)胞型微生物，可以在無生命的培養(yǎng)基上生長，也是一種導(dǎo)致兒童和成人支氣管炎和原發(fā)性非典型肺炎的重要病原體。MP感染可發(fā)生在所有任何年齡段的人群中，尤其是經(jīng)常發(fā)生于兒童上呼吸道和下呼吸道的急性感染，并且已經(jīng)變成是中老年重癥肺炎病人不得已住院的重要原因[1-3]。在實(shí)驗(yàn)室測(cè)試中對(duì)由病原體如MP、病毒和細(xì)菌引起的感染類病癥具有重要的檢測(cè)診斷價(jià)值，因?yàn)樵贛P感染的早期階段沒有典型性和特定性的臨床特征。對(duì)于MP感染的早期診斷和治療非常重要的是尋找敏感和特定的檢測(cè)參數(shù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 測(cè)試對(duì)象是我院2019年1月-2019年6月臨床證實(shí)的114例肺炎支原體肺炎患兒，并檢查了其咽拭子、血清樣本。男性56例，女性59例，年齡9個(gè)月-14歲，平均年齡為7.0歲，所選兒童的臨床癥狀以發(fā)燒，咳嗽和哮喘為主要特征。

1.2 方法

1.2.1 FQ-PCR 在生理鹽水中放置涂片，除去殘留的溶液，加入裂解物，并在95 ℃加熱10 min后，將上清液進(jìn)行PCR測(cè)試，并在熒光測(cè)量?jī)x中放置反應(yīng)容器，后期由電腦進(jìn)行主要的數(shù)據(jù)分析。選用ABI7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體核酸定量檢測(cè)試劑盒。嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.2.2 血清被動(dòng)凝集法 取患者3 mL血液經(jīng)過3500 r/min離心5 min后分離出血清，進(jìn)行MP復(fù)合抗體檢測(cè)，選用富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)的肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑盒（被動(dòng)凝集法）。嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.2.3 間接免疫熒光法 取患者3 mL血液經(jīng)過3500 r/min離心5 min后分離出血清，進(jìn)行MP-IgM檢測(cè)，選用歐蒙呼吸道病原體譜抗體抗體IgM檢測(cè)試劑盒。嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)具有一定的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果

114個(gè)樣本檢測(cè)最高的是FQ-PCR陽性率為93.8%，間接免疫熒光法檢出陽性率為86.0%，陽性率最低的為間接免疫熒光法50.9%，據(jù)結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確性，對(duì)整體測(cè)試結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)的分析之后。FQ-PCR法是目前最準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。具體數(shù)據(jù)見表1。

3 討論

MP是人類支原體肺炎的致病因子，支原體肺炎的病理變化主要是間質(zhì)性炎癥，在某些時(shí)候會(huì)并發(fā)支氣管肺炎，我們將此稱為原發(fā)性非典型性肺炎。這種病癥通過飛沫進(jìn)行傳播，在身體里會(huì)潛伏為2-3周，每年青少年發(fā)病率最高，在秋冬季發(fā)病率明顯大大增加，多為頭痛，喉嚨痛，發(fā)熱，咳嗽等癥狀，均為一般呼吸道癥狀，大多數(shù)患者并出現(xiàn)明顯的病癥。因此在治療方面，我們通常會(huì)采用中醫(yī)和西醫(yī)相結(jié)合的方式為每位患者進(jìn)行詳細(xì)的診斷。

表1 檢出陽性率

由于MP感染的臨床癥狀并不明顯且與其他肺炎無法區(qū)分，所以對(duì)支原體肺炎的診斷主要取決于臨床檢查。通常我們有三種檢測(cè)方法分別是FQ-PCR、血清被動(dòng)凝集法、間接免疫熒光法。FQ-PCR：靈敏度、特異性都能滿足臨床，但是MP死亡后其DNA仍可存在于部分患者體內(nèi)，時(shí)間達(dá)7周-7個(gè)月，且不易降解，導(dǎo)致DNA檢測(cè)結(jié)果不能很好地用于治療效果的評(píng)價(jià)。血清被動(dòng)凝集法：患者血清MP抗體滴度≥1:160作為近期或急性感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)；恢復(fù)期和急性期MP抗體滴度呈4倍及以上增高或減低時(shí)，可確診。間接免疫熒光法：實(shí)驗(yàn)室易受人為判斷熒光結(jié)果影響，包括抗原含量不足可能會(huì)產(chǎn)生假陰性，體內(nèi)含有類風(fēng)濕因子、多種自身免疫性抗體等與包被抗原有交叉反應(yīng)可能出現(xiàn)假陽性。

根據(jù)這項(xiàng)研究，使用FQ-PCR檢測(cè)陽性率在114例樣本中是最高的，為93.8%，其次是血清被動(dòng)凝集法為86.0%，間接免疫熒光法的陽性率最低為50.9%，該項(xiàng)數(shù)據(jù)結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確性。在實(shí)際操作檢測(cè)過程中，除肺炎支原體自身的陽性結(jié)果外，其他病原體檢測(cè)結(jié)果為陰性，且與其他病原微生物無不良反應(yīng)，說明檢測(cè)方法具有特殊性。綜上所述，病原學(xué)與血清學(xué)聯(lián)合診斷仍然是目前提倡的MP感染診斷策略，由實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的結(jié)果來進(jìn)行病情分析，隨后確定治療該病的具體方案。

總而言之，F(xiàn)Q-PCR法在快速診斷的早期階段更為有效，其臨床意義更為重要，與血清被動(dòng)凝集法和間接免疫熒光法相比較，未來應(yīng)使用FQ-PCR法作為主要的檢測(cè)手段，可以更加提高治療的準(zhǔn)確性。