核桃低聚肽對(duì)亞健康大鼠氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的影響

劉 睿,康家偉,珠 娜,張 亭,王天星,杜 倩,張 黎,李 勇

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院,北京 100191)

亞健康(Sub-health)是指處于疾病與健康之間的一種中間狀態(tài),又稱為“次健康狀態(tài)”、“第三狀態(tài)”,根據(jù)其成因及表現(xiàn),主要分為軀體性亞健康、心理性亞健康和社會(huì)交往亞健康狀態(tài)[1-2]。隨著社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)的日趨激烈、行為和生活方式的改變、環(huán)境污染等因素,亞健康人群呈逐年上升趨勢(shì)[3]。我國(guó)亞健康人群比例為60%～70%,其中處于疲勞型亞健康狀態(tài)的比例近35%,亞健康高發(fā)人群多為青壯年,年齡段位于30～50歲[4]。亞健康狀態(tài)不符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有關(guān)疾病的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn),且易向慢性非傳染性疾病方向發(fā)展,甚至是癌癥等重大疾病的征兆,嚴(yán)重威脅人類的健康。但由于亞健康尚屬于未病的范疇,且引起不適的確切原因未明,臨床上多采用對(duì)癥治療,常用藥物有消炎鎮(zhèn)痛藥類、抗抑郁藥、抗疲勞藥物等,但這些藥物多有副作用,不宜長(zhǎng)期服用。因此,通過功能性食品防治亞健康的發(fā)生發(fā)展成為當(dāng)今亞健康研究的新趨勢(shì)。

核桃(JuglansregiaL.)又稱胡桃、羌桃,胡桃科胡桃屬植物。我國(guó)是核桃的原產(chǎn)地之一,栽培歷史已有7000多年。明代的《本草綱目》記載:“核桃味甘性平微苦微澀,有補(bǔ)腎固精、健脾補(bǔ)血、通便潤(rùn)腸、寧心安神等功效”?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),核桃中不僅含有豐富的蛋白質(zhì)、糖類、脂類成分,更含有人體需要的不飽和脂肪酸、VE、黃酮、葉酸、多酚類等多種生理活性成分[5]。核桃低聚肽(walnut oligopeptides,WOPs)是利用生物酶解技術(shù)從核桃蛋白中提取的小分子生物活性肽,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),低聚肽比單個(gè)氨基酸的吸收更有效,有效提高了蛋白質(zhì)的吸收利用率[6]。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)核桃低聚肽具有提高記憶力[7]、抗輻射[8]、潤(rùn)腸通便[9]、提高性功能[10]等多種生物活性。研究報(bào)道核桃肽可以延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物力竭游泳時(shí)間,加速乳酸消除,有效促進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疲勞的恢復(fù)和延緩疲勞的發(fā)生[11-12]。但尚未見核桃低聚肽防治亞健康的相關(guān)報(bào)道。本研究根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道,通過復(fù)合因素即睡眠剝奪(中樞疲勞)與負(fù)重力竭游泳(外周疲勞)相結(jié)合,在運(yùn)動(dòng)疲勞的基礎(chǔ)上添加精神上的影響,建立亞健康大鼠模型[13-15],探討核桃低聚肽對(duì)亞健康的防治作用及其可能機(jī)制,為核桃低聚肽用于防治亞健康提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

核桃低聚肽 淡黃色固體粉末,購(gòu)自北京天肽生物科技有限公司提供,通過高效液相色譜法分析WOPs分子量及氨基酸組成,分子量小于1000 Da的低聚肽占86.5%,小于2000 Da的肽類總量高達(dá)96.5%,游離氨基酸含量為2.98 g/100 g,其中精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸含量較多;健康SPF級(jí)雄性SD大鼠 60只,8周齡,體重(200±20) g,由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SYXK(京)2011-0039;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2011-0012);丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low densitylipoprotein-cholesterol,LDL-C)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)檢測(cè)試劑盒 英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司;超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、還原型谷胱甘肽(Reduced glutathione,GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin,IL-6)、白介素-1β(interleukin,IL-1β)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)檢測(cè)試劑盒 北京麥格泰克科技有限公司。

Adventurer TM通用型分析天平 美國(guó)奧豪斯國(guó)際貿(mào)易有限公司;5804R高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)艾本德股份公司;DZKW-4電熱恒溫水浴鍋 北京天林恒泰科技有限公司;AU400全自動(dòng)生化儀 日本奧林巴斯株式會(huì)社;FSH-2A可調(diào)高速電動(dòng)勻漿機(jī) 金壇市金南儀器廠;GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱 上海創(chuàng)奕科教設(shè)備有限公司;BMG FLUO star Omega多功能酶標(biāo)儀 德國(guó) BMG LABTECH公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)在北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部,單籠飼養(yǎng),自由飲食、飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,進(jìn)行適應(yīng)性游泳訓(xùn)練(水深50 cm,水溫(30±1) ℃;每日一次,每次10 min,連續(xù)3 d)。適應(yīng)性游泳訓(xùn)練結(jié)束后,根據(jù)體重將大鼠隨機(jī)分為6組,每組10只:正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、核桃低聚肽(WOPs)低、中、高劑量組(220、440、880 mg/kg·bw,分別對(duì)應(yīng)WOPs 1、WOPs 2和WOPs 3組)。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠經(jīng)口灌胃給予蒸餾水,核桃低聚肽組給予相應(yīng)濃度受試物,灌胃量為1 mL/100 g。實(shí)驗(yàn)期間,大鼠單籠飼養(yǎng)、自由飲水進(jìn)食。

1.2.2 建立亞健康疲勞大鼠模型 分組結(jié)束后,采用睡眠剝奪+5%負(fù)重游泳的復(fù)合方式制備亞健康疲勞大鼠模型[13-15]:正常對(duì)照組大鼠正常飼養(yǎng),其余四組大鼠放入盛有2.2 cm水深的動(dòng)物籠中,迫使其保持站立的姿態(tài)不能睡眠從而導(dǎo)致疲勞。每籠1只,連續(xù)5 d,每日早晚各換水1次。造模期間,每日經(jīng)口灌胃給予受試樣品一次,自由飲水進(jìn)食,水溫維持與室溫相近(23±1) ℃。5 d后,各組大鼠于末次給予受試樣品1 h后[16],在鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮,置于游泳箱中進(jìn)行負(fù)重力竭游泳實(shí)驗(yàn)(水深50 cm,水溫(30±1) ℃)。采用力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)為大鼠游泳協(xié)調(diào)性顯著性下降、身體下沉、水淹沒鼻尖至再次浮出水面超過10 s[16-17]。記錄大鼠自游泳開始至力竭的時(shí)間,作為大鼠負(fù)重游泳時(shí)間。負(fù)重游泳結(jié)束后,采用乙醚麻醉處死大鼠,進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè)

1.2.3.1 臟器系數(shù)的測(cè)定 負(fù)重游泳結(jié)束后,采用乙醚麻醉處死大鼠,稱量體重，然后分離肝臟、腎臟、腎周脂肪和附睪脂肪稱重(g)。稱量肝臟、腎臟、腎周脂肪及附睪脂肪重量(g),并根據(jù)公式計(jì)算臟體比和脂體比。

臟體比(%)=臟器重量×100/體重

脂體比(%)=(腎周脂肪重量+附睪脂肪重量)×100/體重

1.2.3.2 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 負(fù)重游泳結(jié)束后,采用乙醚麻醉處死大鼠,股動(dòng)脈采血,在4 ℃ 3000 r/min離心10 min 吸取上清,使用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C和血尿素氮BUN含量。

表1 核桃低聚肽對(duì)大鼠體重和臟器系數(shù)的影響Table 1 Effects of WOPs on the body weight and organ index in

1.2.3.3 ELISA法檢測(cè)血清氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化指標(biāo) 血液3000 r/min離心10 min后,分離血清,根據(jù)試劑盒說明書用 ELISA 法檢測(cè)血清SOD、GSH、GSH-Px和MDA含量。

1.2.3.4 ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-6、IL-1β和LPS水平 血液3000 r/min離心10 min后,分離血清,根據(jù)試劑盒說明書用 ELISA 法檢測(cè)血清中TNF-α、IL-6、IL-1β和LPS的水平。

1.3 數(shù)據(jù)處理

表3 核桃低聚肽對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響Table 3 Effects of WOPs on serum biochemical parameters in

2 結(jié)果與分析

2.1 核桃低聚肽對(duì)亞健康大鼠體重、臟器系數(shù)的影響

如表1所示,大鼠初始體重各組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。造模5 d后,模型組大鼠體重極顯著低于正常對(duì)照組(P<0.01)。與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組大鼠肝臟重量、腎周脂肪、附睪脂肪和脂體比均極顯著降低(P<0.01),腎臟重量、腎體比顯著降低(P<0.05)。與模型對(duì)照組相比,3個(gè)核桃低聚肽組除了低劑量組(WOPs 1)肝臟重量與附睪脂肪重量高于模型對(duì)照組(P<0.05),其它指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 核桃低聚肽對(duì)亞健康大鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

在負(fù)重力竭游泳測(cè)試中,模型對(duì)照組大鼠游泳時(shí)間極顯著低于正常對(duì)照組(P<0.01)。核桃低聚肽組大鼠游泳時(shí)間長(zhǎng)于模型對(duì)照組,其中核桃低聚肽中劑量組(WOPs 2)與模型對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),高劑量組(WOPs 3)具有極顯著差異(P<0.01)。

表2 核桃低聚肽對(duì)大鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響Table 2 Effects of WOPs on weight-loaded forced swimming endurance time in

2.3 核桃低聚肽對(duì)亞健康大鼠血清生化指標(biāo)的影響

血清ALT、AST水平是評(píng)價(jià)早期肝損傷的常用指標(biāo)。由表3可知,與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組ALT、AST含量均極顯著升高(P<0.01)。核桃低聚肽低劑量組和中劑量組ALT、AST含量顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)。血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量在各組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。模型對(duì)照組和核桃低聚肽各劑量組BUN水平較正常對(duì)照組均極顯著升高(P<0.01),但核桃低聚肽劑量組與模型對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.4 核桃低聚肽對(duì)亞健康疲勞大鼠氧化應(yīng)激的影響

表5 核桃低聚肽對(duì)大鼠血清炎癥因子和脂多糖的影響Table 5 Effects of WOPs on inflammatory cytokine and lipopolysaccharide levels in

如表4所示,與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組SOD、GSH活性顯著降低(P<0.05),表明亞健康大鼠體內(nèi)發(fā)生了一定程度的氧化應(yīng)激損傷。與模型對(duì)照組相比,核桃低聚肽高劑量組SOD活性顯著增高(P<0.05);3個(gè)核桃低聚肽劑量組GSH活性均極顯著高于模型對(duì)照組(P<0.01)。GSH-Px含量(核桃低聚肽高劑量組除外)在各組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

表4 核桃低聚肽對(duì)大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響Table 4 Effects of WOPs on serum oxidative stress

2.5 核桃低聚肽對(duì)大鼠過氧化產(chǎn)物的影響

如圖1所示,與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組MDA含量顯著增高(P<0.05)。與模型對(duì)照組相比,核桃低聚肽各組MDA含量均降低,其中高劑量組大鼠血清MDA含量顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05)。

圖1 WOPs對(duì)大鼠血清MDA含量的影響Fig.1 Effects of WOPs on serum

2.6 核桃低聚肽對(duì)亞健康疲勞大鼠細(xì)胞因子的影響

如表5所示,與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組血清TNF-α顯著升高(P<0.05)、IL-1β水平均極顯著升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組相比,3個(gè)核桃低聚肽干預(yù)組TNF-α、IL-1β水平均顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05或P<0.01);核桃低聚肽高劑量組IL-6含量顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05)。LPS水平在各組間均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

3 討論與結(jié)論

國(guó)內(nèi)外對(duì)亞健康問題的研究中面臨的重點(diǎn)問題是缺乏成熟的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,很多研究借鑒疲勞動(dòng)物模型來(lái)制備亞健康動(dòng)物模型,如懸吊、束縛、游泳、跑臺(tái)等,但跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)易引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物足部和尾部的損傷,懸吊和束縛作為應(yīng)激刺激與人類疲勞的應(yīng)激原因明顯不同,不具備相似性。而且上述單一因素造模無(wú)法確定模型是否處于亞健康狀態(tài),不宜應(yīng)用到亞健康動(dòng)物模型的制備中[18]。大鼠游泳疲勞模型是目前國(guó)內(nèi)外比較公認(rèn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疲勞模型,采用5%負(fù)重力竭游泳模型,力竭是疲勞長(zhǎng)期積累而引起機(jī)體功能紊亂的病理狀態(tài),負(fù)重力竭游泳時(shí)間的長(zhǎng)短可以反映動(dòng)物疲勞的程度,是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗疲勞能力的有效指標(biāo)[19]。本研究在以往研究單一因素及復(fù)合因素建立亞健康模型的基礎(chǔ)上,綜合考慮亞健康狀態(tài)者的疲勞、失眠、活力降低等主要表現(xiàn),采用睡眠剝奪(中樞疲勞)與負(fù)重力竭游泳(外周疲勞)復(fù)合造模法,在運(yùn)動(dòng)疲勞的基礎(chǔ)上添加精神上的影響,來(lái)制備亞健康疲勞大鼠模型,并在既往研究和預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)了高、中、低3個(gè)WOPs劑量組(220、440、880 mg/kg·bw)。研究發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組大鼠體重、體脂比明顯下降,精神狀態(tài)差、易疲勞、易激惹。核桃低聚肽各劑量組大鼠負(fù)重游泳時(shí)間的持續(xù)時(shí)間均高于模型對(duì)照組,其中核桃低聚肽中、高劑量組大鼠負(fù)重游泳時(shí)間相比模型對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(P<0.05或P<0.01),表明核桃低聚肽有效增強(qiáng)了亞健康疲勞大鼠體力和運(yùn)動(dòng)耐力,起到了防治亞健康疲勞的效果。

研究發(fā)現(xiàn),在力竭性運(yùn)動(dòng)過程中,血液的重新分布、能源物質(zhì)的消耗和代謝產(chǎn)物的堆積等,都會(huì)不同程度地影響肝臟組織的結(jié)構(gòu)和功能[19]。機(jī)體內(nèi)含有20余種轉(zhuǎn)氨酶,當(dāng)肝細(xì)胞被破壞時(shí),轉(zhuǎn)氨酶便會(huì)進(jìn)入血液,通過測(cè)定血清或血漿中轉(zhuǎn)氨酶的活性,即可反映肝細(xì)胞受損情況,其中以ALT和AST的升高最為敏感。本研究結(jié)果顯示,模型對(duì)照組大鼠血清ALT、AST水平相較正常對(duì)照組極顯著升高(P<0.01),說明模型對(duì)照組大鼠肝功能出現(xiàn)了損傷,聶曉莉等[20]的研究中也出現(xiàn)了相似結(jié)果。在本研究中,核桃低聚肽干預(yù)后，低、中劑量組大鼠血清ALT、AST水平顯著降低(P<0.05或P<0.01),說明核桃低聚肽對(duì)亞健康大鼠出現(xiàn)的肝損傷有一定的保護(hù)作用。血清尿素氮是腎功能能量代謝的產(chǎn)物。較長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)后,當(dāng)糖、脂肪代謝不能供給機(jī)體足夠的能量時(shí),蛋白質(zhì)和氨基酸分解代謝加強(qiáng),導(dǎo)致機(jī)體中血尿素氮含量增加。體內(nèi)尿素氮和身體耐力之間呈正相關(guān),即身體承受運(yùn)動(dòng)耐力越差,尿素氮水平增加越多[21]。模型對(duì)照組和核桃低聚肽劑量組BUN水平較正常對(duì)照組均極顯著升高(P<0.01),但各模型組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。此外血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平在各組間也未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),提示核桃低聚肽對(duì)亞健康大鼠腎功能和脂代謝的影響尚不明確,還有待進(jìn)一步研究。

亞健康狀態(tài)與氧化應(yīng)激反應(yīng)關(guān)系密切,當(dāng)活性氧分子水平超過機(jī)體清除能力時(shí),大量活性氧蓄積,造成DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及某些重要酶的損害,同時(shí)力竭性運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體自由基產(chǎn)生增多,脂質(zhì)過氧化程度也會(huì)增加,加重對(duì)機(jī)體的損傷[22]。SOD是機(jī)體清除自由基的首要物質(zhì),可抵制氧自由基對(duì)細(xì)胞造成的損害,并及時(shí)修復(fù)受損細(xì)胞;GSH是機(jī)體重要的抗氧化物質(zhì)之一,它能敏感有效地反映機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài);GSH-Px是體內(nèi)廣泛存在的一種催化過氧化物分解的酶,可使脂質(zhì)過氧化物分解成相應(yīng)的醇類,從而起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用[23-24]。在疾病或應(yīng)激狀態(tài)下,SOD活性、GSH含量、GSH-Px活性均會(huì)下降。本研究結(jié)果表明,模型對(duì)照組SOD、GSH活性顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05),表明亞健康大鼠體內(nèi)發(fā)生了氧化應(yīng)激損傷,說明核桃低聚肽在一定程度上緩解了亞健康引起的氧化應(yīng)激損對(duì)機(jī)體的損傷。

MDA作為脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性,可以特異的反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間接反映出細(xì)胞損傷的程度[25]。本研究結(jié)果顯示模型對(duì)照組MDA含量顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05),說明經(jīng)模型組大鼠體內(nèi)發(fā)生了明顯的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。核桃低聚肽干預(yù)后,高劑量組大鼠血清MDA含量顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05),提示核桃低聚肽干預(yù)可顯著降低亞健康狀態(tài)引起的大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。核桃低聚肽可在一定程度上抑制亞健康引起的機(jī)體過度氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化反應(yīng),從而起到保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激損傷的作用,這也與之前對(duì)核桃低聚肽具有抗氧化作用的研究相符[26]。

疲勞是亞健康的主要表現(xiàn)之一,疲勞狀態(tài)下炎癥反應(yīng)在體內(nèi)廣泛存在,大量細(xì)胞因子產(chǎn)生和累積加重了機(jī)體的損傷[27]。細(xì)胞因子由循環(huán)系統(tǒng)和組織內(nèi)的白細(xì)胞及其它細(xì)胞產(chǎn)生,包括IL-1β、IL-6、TNF-α等,是炎癥反應(yīng)時(shí)免疫系統(tǒng)和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)之間的重要媒介物質(zhì)。IL-1除了能通過刺激蛋白酶的合成影響肌肉炎癥反應(yīng)外,還可以誘導(dǎo)其它細(xì)胞因子的表達(dá);TNF-α的作用與IL-1有交迭,能增加白細(xì)胞的附著性、激發(fā)白細(xì)胞的功能和增加巨噬細(xì)胞的活性,與炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝和細(xì)胞死亡都密切相關(guān);IL-6是另一個(gè)重要的促炎因子[28-29]。LPS是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外模的主要組成部分,一旦進(jìn)入血液被免疫系統(tǒng)識(shí)別,便會(huì)引發(fā)內(nèi)毒素血癥。本研究結(jié)果顯示,模型對(duì)照組亞健康大鼠血清TNF-α、IL-1β水平均極顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01),但血清LPS水平在各組間無(wú)顯著性差異(P>0.05),表明亞健康模型大鼠體內(nèi)發(fā)生了炎癥反應(yīng),刺激了炎癥因子的過量產(chǎn)生,但尚未觀察到腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生。核桃低聚肽劑量組TNF-α、IL-1β水平均顯著低于模型對(duì)照組,高劑量組IL-6含量顯著降低(P<0.05或P<0.01),表明核桃低聚肽可在一定程度上改善機(jī)體炎癥反應(yīng),具有一定的抗炎作用。

綜上所述,本研究通過模擬亞健康相關(guān)發(fā)生發(fā)展因素,使大鼠站立于水盒中連續(xù)5 d,并結(jié)合負(fù)重力竭游泳實(shí)驗(yàn),制備了亞健康疲勞大鼠模型。核桃低聚肽的干預(yù)能夠明顯提高亞健康大鼠力竭游泳時(shí)間,改善模型大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平異常,提高抗氧化酶活力和抗氧化物質(zhì)含量,降低脂質(zhì)氧化產(chǎn)物水平,抑制血清炎癥因子水平的升高,從而延緩和減輕了亞健康狀態(tài)對(duì)機(jī)體的傷害,提示核桃低聚肽能夠較好地對(duì)抗亞健康,這位改善亞健康的臨床研究提供了科學(xué)依據(jù)。但仍有許多問題有待進(jìn)一步探討。其一,動(dòng)物模型目前并沒有統(tǒng)一定論,造模方式各不相同,穩(wěn)定性、相似性、可重復(fù)性還有待加強(qiáng),因此亟待建立成熟的亞健康動(dòng)物模型;其二,目前關(guān)于核桃低聚肽的研究相對(duì)較少,還需繼續(xù)優(yōu)化劑量設(shè)置,進(jìn)行更深入的研究。此外也需要人群研究進(jìn)一步證實(shí)其對(duì)亞健康狀態(tài)的改善效果及適宜劑量。