對(duì)比三七不同炮制品中皂苷類(lèi)成分的含量

陳英鑾

【摘 要】 目的：研究三七皂苷成分（Rg1、R1、Rd、Rb1、Re）在油炸、蒸制、砂燙、烘焙等炮制方法下其含量變化情況。方法：選取新鮮三七進(jìn)行不同方法的炮制處理，并對(duì)炮制時(shí)間進(jìn)行分類(lèi);取未經(jīng)炮制加工的生品三七作對(duì)照品。使用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)三七在不同炮制操作情況下皂苷的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：對(duì)比不同炮制情況下三七皂苷含量除烘焙情況下，蒸制保留皂苷最多，其次是油炸，最后是砂燙;烘焙的Rg1、R1、Rd、Rb1、Re的量均有所增加，但皂苷Rb1有所減少。結(jié)論：不同炮制情況下的三七，其皂苷含量會(huì)有所不同，不同炮制情況下三七皂苷含量大小順序?yàn)楹姹?蒸制>油炸>砂燙，初步推測(cè)為溫度越高，三七皂苷含量變化越大。

【關(guān)鍵詞】 三七;炮制加工;三七皂苷

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）21-0045-05

三七，別名田七、參三七、血山草等，為五加科植物三七的干燥根及根莖，分布于云、桂、川、贛一帶，其中以云南文山為著名道地藥材，三七歸心、肝、胃、小腸經(jīng)，味甘、微苦、性溫，生品具有活血化瘀、消腫定痛的功效[1]。中醫(yī)自古就有生熟功效各異且用法不同之說(shuō)[2]，而熟品三七主治失血過(guò)多、生血乏源、久病虧虛、腎精虧損等造成的血虛證，以及產(chǎn)后暈血、氣血不足、身體虛弱，有四肢無(wú)力、頭昏眼花、腰膝酸軟、食欲不振、面色蒼白等癥狀[3]。傳統(tǒng)記載三七炮制方法有“油炸”“蒸法”兩種熟制方法，通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[4]，本實(shí)驗(yàn)增加“砂燙”“烘焙”兩種熟制方法。三七總皂苷皂苷作為三七有效成分之一，有活血化瘀、活絡(luò)通脈之功效，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷具有增加腦血容量及抑制血小板聚集之效，對(duì)造血組細(xì)胞的增值作用[5]?！吨袊?guó)藥典》[6]（2015版第一部）對(duì)于三七的皂苷記載僅有人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb、三七皂苷R1含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)利用HPLC法對(duì)三七不同炮制品皂苷成分（Rg1、R1、Rd、Rb1、Re），在油炸、蒸制、砂燙、烘焙等炮制方法下含量的變化進(jìn)行測(cè)定。

1 材料準(zhǔn)備

1.1 藥品選取 選取三七生品（于文山高田三七種植產(chǎn)業(yè)基地采挖），按照《中國(guó)藥典》要求對(duì)藥品進(jìn)行油炸、蒸制、砂燙、烘焙等炮制加工。

1.2 試劑選取 選取三七總皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（購(gòu)于國(guó)家藥品生物制品檢定所），采用哇哈哈公司生產(chǎn)的純化水，使用乙腈（色譜純，購(gòu)至國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、甲醇（色譜純，購(gòu)至國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 儀器及輔料選取 選擇安捷倫高效液相色譜儀（型號(hào)：Agilent 1260 II代）;色譜柱（Hypersi 1 BDS-C18，250 mm×4.6 mm，5 μm）;十萬(wàn)分之一電子分析天平（AE-204，METTLER TOLEDO）;四兩裝高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（型號(hào)XS-D4A，浙江屹立工貿(mào)有限公司）;藥典篩（篩號(hào)：4，孔徑：0.25 mm，浙江上虞市道墟張興紗篩廠(chǎng)）;水浴鍋（HH-6，邦西儀器科技有限公司）;電熱真空干燥箱（型號(hào)：ZK-820，上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）;沙子（河沙）;微波爐（MQ-L213B型美的微波爐）;食用油（福臨門(mén)植物調(diào)和油）。

2 制備樣品及對(duì)照品溶液

2.1 制備對(duì)照品溶液 參照《中國(guó)藥典》（2015版第一部）中對(duì)當(dāng)歸皂苷含量要求，Rg1、Rb1及R1要有不小于5.0%的總含量，且其制得對(duì)照品溶液分別要有0.4 mg/mL、0.4 mg/mL、0.2 mg/mL的濃度，以此為標(biāo)準(zhǔn)，取三七總皂苷對(duì)照品干燥至恒重，采用十萬(wàn)分之一電子分析天平進(jìn)行精密稱(chēng)量，取0.1430 g移至容量瓶，最終加甲醇制得對(duì)照品濃度均為：三七總皂苷1.430 g/mL;人參皂苷Re 0.061 g;人參皂苷Rd 0.099 mg/mL;人參皂苷Rg10.403 mg/mL;人參皂苷Rb10.419 mg/mL;三七皂苷R10.101 mg/mL。

2.2 制備樣品溶液 將油炸、蒸制、砂燙、烘焙過(guò)的炮制三七樣品及生品三七樣品進(jìn)行粉碎;過(guò)四號(hào)篩，對(duì)其進(jìn)行精密稱(chēng)量，取0.6 g置于回流瓶中（規(guī)格為250 mL），用胖度移液管精密量取甲醇50 mL加入回流瓶中，用封口膜封存靜置過(guò)夜，第二天置于水浴鍋上于溫度80℃的情況下回流2 h，放冷，回流前后進(jìn)行對(duì)回流瓶及其內(nèi)容物重量進(jìn)行稱(chēng)量，并用甲醇進(jìn)行補(bǔ)重，搖勻后對(duì)其進(jìn)行過(guò)濾（采用F型0.45 μm聚偏氟乙烯微孔有機(jī)濾膜，上海興亞凈化材料廠(chǎng)生產(chǎn)），取續(xù)濾液。

3 三七不同炮制品的制備

砂燙：取適當(dāng)干凈河沙置于鐵鍋內(nèi)，進(jìn)行翻炒攪拌，待其砂熱并具有流動(dòng)性時(shí)，將三七倒入，并進(jìn)行翻炒攪拌，待三七表面燙至呈金黃色時(shí)，立即取出，放冷，并進(jìn)行敲碎，打粉。過(guò)四號(hào)藥典篩;蒸制：用水對(duì)三七進(jìn)行浸潤(rùn)，時(shí)間為1～2 h，對(duì)其進(jìn)行6 h清水蒸制，后取出干燥，放冷，敲碎，打粉，過(guò)四號(hào)藥典篩;烘焙：用微波爐對(duì)三七進(jìn)行中檔烘焙10 min左右，取出，放冷，敲碎，打粉，過(guò)四號(hào)藥典篩;油炸：使用植物調(diào)和油對(duì)三七進(jìn)行文火煎炸，至其表面呈金黃色，取出，放冷，打粉，過(guò)四號(hào)藥典篩。另取生品三七進(jìn)行干燥打粉，過(guò)四號(hào)藥典篩[7]。

4 HPLC法分析

4.1 HPLC分析 準(zhǔn)備采用Hypersi 1 BDS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，柱溫設(shè)置20℃;流動(dòng)相條件：以乙腈-水進(jìn)行梯度洗脫，流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置203 mm，進(jìn)樣量設(shè)置為10 μL，塔板數(shù)按三七皂苷R1計(jì)算，應(yīng)不低于4000。洗脫步驟見(jiàn)表1。

4.2 對(duì)照品線(xiàn)性關(guān)系 對(duì)三七總皂苷對(duì)照品進(jìn)行梯度量?。壕芪?、5、7、9、11、13 μL的對(duì)照品溶液，按上述方法進(jìn)行準(zhǔn)備工作后，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為Y軸，以進(jìn)樣量為X軸（單位為μg），線(xiàn)性方程公式為y=mx+b，以m表斜率，b表截距，R2為相關(guān)系數(shù)，線(xiàn)性范圍單位為mg，分析進(jìn)樣量與峰面積的關(guān)系，結(jié)果顯示，正線(xiàn)性相關(guān)性較好，因此，其可以較好地應(yīng)用于評(píng)價(jià)各炮制加工情況下的三七皂苷含量。

4.3 生品三七及其不同炮制品含量 精密稱(chēng)取生三七粉0.6 g，按上述方法進(jìn)行樣品溶液制備，對(duì)生三七三種皂苷：人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1進(jìn)行含量探究，測(cè)定其峰面積進(jìn)行計(jì)算，總含量為7.98%，符合藥典要求。另取四種炮制品粉末0.6 g，按上述方法進(jìn)行樣品溶液制備，對(duì)其進(jìn)行HPLC法含量測(cè)定，峰面積見(jiàn)表2。

4.4 生品三七及其不同炮制品含量圖譜比較 結(jié)果如圖1～5所示。圖1為三七生品HPLC圖譜以及41～44 min放大圖，可以看到在40 min左右時(shí)出現(xiàn)了較大的波動(dòng)。圖2為蒸制三七HPLC圖譜變化情況其中HPLC圖譜在25 min時(shí)有一定波動(dòng)，40 min時(shí)波動(dòng)達(dá)到頂峰。圖3為油炸三七，同樣是在40 min之前達(dá)到頂峰，而且還出現(xiàn)兩個(gè)巔峰，只有一個(gè)組分含量出現(xiàn)明顯的增加情況。圖4、圖5分別是砂燙三七與烘焙三七的檢測(cè)結(jié)果，都是在40 min左右達(dá)到峰值，但是具體峰值的數(shù)值存在差異。

5 討論

目前炮制加工三七多以油炸三七與蒸三七為研究對(duì)象，通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[8-9]，本實(shí)驗(yàn)相應(yīng)增加砂燙法與烘焙法兩種新方法。砂燙法具有溫度高，傳熱快且均勻的特點(diǎn);而烘焙法為微波烘焙，具有受熱均勻，溫度相對(duì)較低的特點(diǎn)。炮制品與生三七外觀(guān)有不同之處，油炸三七與砂燙三七呈金黃色，而蒸制三七與烘焙三七的顏色較深。

本次研究中，除烘焙情況下，蒸制保留皂苷最多，其次是油炸，最后是砂燙，而烘焙炮制加工，除人參皂苷Rb1類(lèi)成分，其它皂苷類(lèi)成分均有增加。初步推測(cè)可能是由于烘焙破壞了促使皂苷類(lèi)成分分解的成分，對(duì)抗處理樣品時(shí)回流加熱對(duì)其皂苷類(lèi)成分的破壞。而查閱文獻(xiàn)可知[10]，進(jìn)行樣品處理時(shí)，超聲情況下的三七皂苷類(lèi)成分與回流情況下的三七皂苷類(lèi)成分有出入，且前者保留皂苷能力大于后者。而本次實(shí)驗(yàn)的溫度大小為砂燙最大，油炸次之，然后是蒸制，最后是烘焙，而三七皂苷類(lèi)成分與其大小關(guān)系相反，由此得出，炮制溫度與三七皂苷類(lèi)成分有負(fù)相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，不同炮制情況下的三七，其皂苷含量會(huì)有所不同，不同炮制情況下三七皂苷含量大小順序?yàn)楹姹?蒸制>油炸>砂燙，初步推測(cè)為溫度越高，三七皂苷含量變化越大。而值得注意的是，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示了三七其它成分的增減情況，而隨著炮制溫度的增高（烘焙至砂燙），三七所含其它含量有增加情況，即其除三七皂苷外其它含量的峰面積有增高情況，且在分析過(guò)程中，筆者還發(fā)現(xiàn)在R1與Rd的峰面積圖之間，其原有含量的變化及新成分的增加較為突出，值得進(jìn)一步探究。

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（收稿日期：2020-06-04 編輯：程鵬飛）