西洋參水提物對(duì)小鼠免疫力的影響

程再興

摘 要：目的 研究西洋參水提物對(duì)小鼠免疫力的影響。方法 以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究西洋參水提物對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、小鼠血清溶血素測(cè)定、NK細(xì)胞活性測(cè)定以及臟器/體重比值等試驗(yàn)的影響。結(jié)果 與陰性對(duì)照組比較，西洋參水提物中、高劑量組（0.2g/kg.BW、0.6g/kg.BW）能提高ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力、提高小鼠NK細(xì)胞活性，西洋參水提物高劑量組（0.6g/kg.BW）能提高小鼠抗體積數(shù)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 ?西洋參水提物具有增強(qiáng)小鼠免疫力的作用。

關(guān)鍵詞：西洋參水提物;小鼠;免疫力

西洋參為五加科植物西洋參Panax quinque folium L.的干燥根，甘、微苦、涼，歸心、肺、腎經(jīng)，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津等功效，用于氣虛陰虧、虛熱煩倦、咳喘痰血、內(nèi)熱消渴、口燥咽干等。西洋參為貴重藥材，主要含有皂苷類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、氨基酸類(lèi)、糖和多糖類(lèi)等成分，具有廣泛的生物活性和獨(dú)特的藥理作用，具有抗腫瘤、保護(hù)心血管系統(tǒng)、提高機(jī)體免疫功能、調(diào)節(jié)代謝、抗缺氧等藥理作用[1]。本實(shí)驗(yàn)研究了西洋參水提物粉末對(duì)小鼠免疫力的作用。

一、材料與方法

（一）樣品制備

西洋參飲片加水8倍量，提取3次，每次1.5h，收集提取液，濾過(guò)，濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.08（70℃），噴霧干燥，得西洋參水提物粉末（每克粉末相當(dāng)于生藥量2.60g）。

（二）受試動(dòng)物

SPF級(jí)雄性Ba1b/c小鼠，體重18～22g[北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006]。動(dòng)物飼料由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，飲水為純化水，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由攝食和飲水，動(dòng)物房溫度20～26℃，相對(duì)濕度40%～70%。

（三）主要試劑與儀器

刀豆蛋白A（ConA）、MTT、綿陽(yáng)紅細(xì)胞（SRBC）、YAC-1細(xì)胞、LDH基質(zhì)液、T-1000電子天平、7100全自動(dòng)生化分析儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。

（四）方法

1.實(shí)驗(yàn)分組及周期

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為4個(gè)測(cè)定組，每個(gè)測(cè)定組均分別包括陰性對(duì)照組和受試物三個(gè)劑量組，每組10只動(dòng)物。根據(jù)人體推薦西洋參水提物粉末劑量為1.2g（60kg.d）（相當(dāng)于生藥量3.12g），動(dòng)物給藥劑量分別按人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍設(shè)計(jì)低劑量組（0.1g/kg.BW）、中劑量組（0.2g/kg.BW）、高劑量組（0.6g/kg.BW）。所有測(cè)定組經(jīng)口（灌胃）給予不同劑量的樣品，灌胃量均為20mL/kg.BW，每天一次，連續(xù)灌胃30d;陰性對(duì)照組給予同等容積的純化水。

2.脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（MTT法）[2]

實(shí)驗(yàn)30d后，頸椎脫臼處死動(dòng)物，無(wú)菌取脾臟，撕碎，200目篩網(wǎng)過(guò)濾，用Hanks液洗滌3次，用完全1640培養(yǎng)液配成3×106個(gè)/mL細(xì)胞懸液。將每份脾細(xì)胞懸液加入24孔培養(yǎng)板，1mL/孔，2孔/份樣品，一孔加75μLConA液（相當(dāng)于7.5μg/mL），一孔作為對(duì)照，置CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)68h后，取出培養(yǎng)板，每孔輕輕吸取0.7mL上清液，加入0.7mL不含小牛血清的1640培養(yǎng)液及50μLMTT液（5mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4h。取出培養(yǎng)板，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打使紫色結(jié)晶完全溶解。將溶解液移入2mL比色杯，在570nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，以加ConA孔OD值減去未加ConA孔OD值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力，受試劑量組的光密度差值顯著高于陰性對(duì)照組的光密度差值，判為該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

3.小鼠血清溶血素的測(cè)定[2]

在試驗(yàn)第25天，每只小鼠腹腔注射0.2mL2%（V/V）綿陽(yáng)紅細(xì)胞（SRBC）懸液，進(jìn)行免疫。5d后，取血離心，收集血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋?zhuān)?7℃3h后觀察結(jié)果，記錄凝聚程度，計(jì)算抗體積數(shù)。

4.NK細(xì)胞活性測(cè)定[2]

處死動(dòng)物，取脾臟以制備單細(xì)胞懸浮液，離心，滅菌水加入細(xì)胞漿用于裂解紅細(xì)胞，加Hanks液，離心，培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度。96孔培養(yǎng)板中加入脾細(xì)胞和YAC-1細(xì)胞，加培養(yǎng)液和YAC-1細(xì)胞的為YAC-1細(xì)胞自然釋放孔，加2.5%Triton和YAC-1細(xì)胞的為YAC-1細(xì)胞最大釋放孔，經(jīng)4 h培養(yǎng)，離心，平底96孔培養(yǎng)板中加入上清液及LDH基質(zhì)液，10 min后再加1 mol/L的HCl，在波長(zhǎng)490 nm處酶標(biāo)儀測(cè)定光密度。如劑量組NK細(xì)胞活性顯著高于陰性對(duì)照組，視為陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果。

（五）臟器/體重比值測(cè)定

處死動(dòng)物，取其胸腺及脾臟，稱(chēng)重，計(jì)算胸腺/體重和脾臟/體重比值。

（六）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)分析使用 SPSS10.0 軟件，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）淋巴細(xì)胞增殖能力

西洋參水提物對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響，見(jiàn)表1。西洋參水提物中、高劑量組與陰性對(duì)照組比較，均能顯著提高脾淋巴細(xì)胞的增殖能力（P<0.05）。

（二）血清溶血素

西洋參水提物對(duì)小鼠血清溶血素的影響，見(jiàn)表2。西洋參水提物中、高劑量組與陰性對(duì)照組比較，均能顯著提高小鼠血清溶血素抗體積水平（P<0.05）。

（三）NK細(xì)胞活性

西洋參水提物對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響，見(jiàn)表3。西洋參水提物低、中劑量組與陰性對(duì)照組比較，其N(xiāo)K細(xì)胞活性率無(wú)顯著差異（P>0.05）;高劑量組與陰性對(duì)照組相比，其N(xiāo)K細(xì)胞活性率顯著增加（P<0.05）。

（四）臟器/比重比值

三個(gè)劑量組小鼠胸腺/體重比值及脾臟/體重比值和陰性對(duì)照組比較，均無(wú)顯著差異（P>0.05）。

三、討論

對(duì)小鼠免疫力研究結(jié)果顯示，西洋參水提物中、高劑量組能提高ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力、提高小鼠NK細(xì)胞活性，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;西洋參水提物高劑量組能提高小鼠抗體積數(shù)。實(shí)驗(yàn)證明，西洋參具有增強(qiáng)小鼠免疫力的作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 王蕾，王英平，許世泉，等.西洋參化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].特產(chǎn)研究，2017（3）：73-77.

[2] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：22-34.