高效液相色譜法測(cè)定蔬菜中硝基苯

(1.榆林職業(yè)技術(shù)學(xué)院 化學(xué)工程系， 榆林 719000；2.榆林學(xué)院 信息工程學(xué)院，榆林 719000)

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

高效液相色譜儀：由RO230溶劑管理器、DAD230+二極管陣列檢測(cè)器、ZW230II色譜柱溫箱、P230高壓恒流泵組成(大連依利特儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn))；高速組織搗碎機(jī)(德國(guó)IKA公司)；H1750臺(tái)式高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司)。

1.2 試劑

硝基苯母液：濃度1000mg/L，購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

硝基苯標(biāo)準(zhǔn)使用液：取硝基苯母液若干稀釋配制，濃度分別為0.25mg/L、0.50mg/L、0.75mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L。

甲醇： HPLC Grade，Honeywell Burdick&Jackson公司生產(chǎn)；乙腈：色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；四氫呋喃;色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；正己烷：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；無(wú)水硫酸鈉 ： 分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；丙酮：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；硫酸：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；高純水(自制，二次蒸餾水經(jīng)0.25um水相濾膜過(guò)濾后使用)。

1.3 樣品前處理

把蔬菜(以茼蒿、萵苣、胡蘿卜為樣品)切成 1～ 2cm的段狀，準(zhǔn)確稱取約200g樣品，加入100mL 10%硫酸溶液(密度1.07g/mL)，樣品加硫酸溶液總重307克，用組織搗碎機(jī)搗碎至勻漿，制備成均勻樣品，稱取上述勻漿樣品15.35克(相當(dāng)于10.0 g樣品的量)，置于100 mL塑料離心管中，加入40 mL丙酮-正己烷(1:9，v/v)，于均質(zhì)機(jī)上高速均質(zhì)3 min，3800 r/min離心5 min，提取液移入250 ml分液漏斗中，加入100 mL20 g/L硫酸鈉水溶液，于分液漏斗振蕩器上160 rpm/min振蕩2 min，靜置分層，將下層溶液轉(zhuǎn)移到另一250 mL分液漏斗中，用20 mL正己烷萃取，合并兩次正己烷萃取液，用無(wú)水硫酸鈉脫水(或轉(zhuǎn)入K-D濃縮器中濃縮并定容)備色譜分析用。

2 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

2.1 色譜柱的選擇

比較了5種不同型號(hào)的反相色譜柱對(duì)硝基苯的分離效果：

Diamonsil C18色譜柱(5μm，4.6mm×150mm)；Asahipak色譜柱(5μm，4.0mm×250mm)；nucleodurC18ec色譜柱(5μm，4.6mm×150mm)；Waters biosuite色譜柱(5μm，4．6mm×35mm)；

SinochromODS-BP色譜柱(5μm，4.6mm×200mm)。

結(jié)果表明，硝基苯通過(guò)SinochromODS-BP色譜柱(5 μm，4.6mm×200 mm) 色譜柱峰形最好，與其他可能的干擾物質(zhì)分離效果最好，可以充分滿足測(cè)定要求。因此，選擇SinochromODS-BP色譜柱作為分析柱。

2.2 流動(dòng)相選擇

通過(guò)比較四氫呋喃-水、乙腈-水，甲醇-水這3種混合流動(dòng)相體系，發(fā)現(xiàn)甲醇-水混合流動(dòng)相體系能夠很好的分離硝基苯，峰形良好，不會(huì)出現(xiàn)峰拖尾，鬼峰，平頭峰，以及其他不完全出峰的情況，出峰結(jié)果見圖1、圖2、圖3。

圖1 0.5mg/L 硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖四氫呋喃-水體系 v/v=10∶90，流速1mL/min-1

圖2 0.5mg/L 硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖乙腈-水體系 v/v=60∶40，流速1mL/min-1

圖3 0.5mg/L硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖甲醇-水體系 V/V=85∶15，流速1mL/min-1

甲醇和水的比例不同，可以導(dǎo)致出峰時(shí)間不同，峰形不同，以及分離度的差異，經(jīng)過(guò)不同的體積比選擇，本方法選擇甲醇∶水v/v=85∶15，硝基苯出峰時(shí)間為3.516min。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

對(duì)硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行紫外-可見光全波長(zhǎng)掃描分析，在264 nm 波長(zhǎng)附近有最大吸收，過(guò)低的吸收波長(zhǎng)基線噪音大，容易造成干擾，過(guò)高的吸收波長(zhǎng)例如350 nm 波長(zhǎng)之后基本上無(wú)吸收，綜合考慮硝基苯的紫外光譜特性，最后選擇264 nm 作為定值波長(zhǎng);，并利用硝基苯的保留時(shí)間和紫外光譜特性進(jìn)行定性分析。

2.4 方法的精密度、線性關(guān)系和檢出限

分別取硝基苯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液若干體積稀釋到 0.25、0.5、0.75 、1.0、2.0mg/L作為硝基苯的測(cè)定使用液，然后每一個(gè)濃度測(cè)定6次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、表2。

表1 0.75mg/L 硝基苯溶液保留時(shí)間測(cè)定數(shù)據(jù) min

表2 不同濃度硝基苯溶液峰面積測(cè)定及回收率實(shí)驗(yàn) mg/L

根據(jù)不同濃度硝基苯對(duì)應(yīng)的峰面積值，可以求得線性回歸方程為A=81.115C-0.1193，線性相關(guān)系數(shù)值為0.9998，以3倍信噪比(S/N)計(jì)算硝基苯的檢出限為0.1mg/kg

由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得到峰面積測(cè)定RSD在1.06%～4.97%之間，加標(biāo)回收率在99.5%～101.9%之間，0.75 mg/L硝基苯使用液保留時(shí)間數(shù)據(jù)RSD等于0.93%，以3倍信噪比(S/N)計(jì)算硝基苯的檢出限為0.1mg/kg由此可見方法的精密度和準(zhǔn)確度良好，靈敏度高。

2.5 實(shí)際樣品測(cè)定

對(duì)隨機(jī)購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的茼蒿、萵苣和胡蘿卜共 10 份樣品，進(jìn)行前處理及測(cè)定，樣品未檢出含有硝基苯。檢測(cè)結(jié)果表明，市售蘆筍、萵苣和胡蘿卜沒(méi)有受硝基苯的污染。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)選用反相高效液相色譜分析蔬菜中硝基苯，在采用均質(zhì)、高速離心提取、萃取前處理后，甲醇/水作為混合流動(dòng)相的條件下，可以得到良好的分離效果。該方法精密度好，準(zhǔn)確度高，檢出限低，線性關(guān)系良好，具備良好的應(yīng)用前景。