犬發(fā)情期生殖激素的變化及授精時間的確

韓曉芳 石 強(qiáng) 宋望成張宇豪 華 松

母犬的繁育效率是衡量養(yǎng)犬業(yè)發(fā)展和檢測犬品種的重要參考，犬的高效繁殖是提升養(yǎng)犬業(yè)效益的根本措施。發(fā)情犬的精確授精是犬繁育周期中的關(guān)鍵一步。犬進(jìn)入發(fā)情周期后生殖激素的波動規(guī)律可間接反映發(fā)情犬的特征性生殖生理變化，犬生殖激素的波動規(guī)律為犬授精時間選擇提供理論基礎(chǔ)。本文主要對母犬在發(fā)情周期內(nèi)生殖激素的變化規(guī)律及選擇最佳授精時間方法的最新研究成果進(jìn)行了綜述，為提高母犬的受胎率提供參考。

犬在發(fā)情周期內(nèi)能夠順利受孕被認(rèn)為是繁育的第一步也是最關(guān)鍵的一步。在發(fā)情周期內(nèi)生殖激素水平發(fā)生了明顯的波動變化且濃度趨勢具有規(guī)律性，可以準(zhǔn)確反應(yīng)母犬發(fā)情周期所處階段，因此發(fā)情周期內(nèi)激素的變化規(guī)律為實踐中排卵檢測提供了理論基礎(chǔ)。實踐中檢測排卵的方法有多種，其中依靠血清孕酮濃度范圍來確定授精時間就是一個具有多重優(yōu)點的技術(shù)，在推廣上具有明顯優(yōu)勢。

除了依靠激素變化來選擇授精時間外，目前國內(nèi)的外排卵檢測技術(shù)還包括了陰道涂片鏡檢和唾液晶體鏡檢等方式，這些技術(shù)均以犬發(fā)情后發(fā)生的特征性生殖生理變化為判斷依據(jù)，據(jù)此形成了相應(yīng)的判斷標(biāo)準(zhǔn)，來確定臨床授精的最佳時間，本文論述了目前國內(nèi)外常用的幾種排卵監(jiān)測技術(shù)，繁育工作者可以在不同的條件下選擇合適的檢測方案，必要時結(jié)合使用，為使繁殖母犬達(dá)到高效繁育提供保障。

一、犬的繁殖特點

一般犬滿8 個月后性成熟。母犬發(fā)情后，根據(jù)其生理機(jī)能與外在行為表現(xiàn)的不同，犬的發(fā)情可分為四個時期，分別是發(fā)情前期（6d～11d），發(fā)情期（5d～9d），發(fā)情后期（56d～60d）和間情期（持續(xù)數(shù)月）。

犬科動物通過漫長的歷史進(jìn)化，擁有了自身獨特的繁育特點，家犬由于長期受人類活動因素的影響多展現(xiàn)出非季節(jié)性發(fā)情，相比之下野生犬科動物是嚴(yán)格的季節(jié)性發(fā)情動物。早在16 世紀(jì)，意大利和荷蘭的學(xué)者對黃體的功能進(jìn)行闡述，到20 世紀(jì)人們發(fā)現(xiàn)孕酮后，逐步了解到犬科動物具有獨特的黃體功能特點。犬的卵巢黃體化是出現(xiàn)在排卵之前的，孕酮的濃度在排卵之前上升明顯；犬排卵時排出的卵子是初級卵母細(xì)胞，排卵之后才出現(xiàn)卵子成熟；犬缺乏急性溶黃體機(jī)制，且外源性PGF2α 對犬黃體無明顯作用，黃體在未妊娠犬中仍可以持續(xù)較長時間，甚至超過妊娠犬；犬在妊娠期間缺乏妊娠特征蛋白；妊娠和分娩期間犬的雌激素水平無特異性的升高；犬發(fā)情后期結(jié)束進(jìn)入乏情期持續(xù)時間較長，約占繁育周期三分之二。以上是犬的繁殖特點，準(zhǔn)確掌握后將對實現(xiàn)犬高效繁殖提供理論依據(jù)。

雖然犬的發(fā)情持續(xù)時間長達(dá)半個月之久，但只有在排卵后卵泡成熟時授精才能成功受孕，據(jù)統(tǒng)計，犬的配種期只有3 d ～5 d，準(zhǔn)確把握發(fā)情犬的配種時間對犬的繁育非常重要。

二、犬主要生殖激素的變化

犬從發(fā)情初期開始到排卵期出現(xiàn)，最后進(jìn)入發(fā)情后期，整個階段生殖系統(tǒng)都在激素的調(diào)控下發(fā)生了特異性的變化規(guī)律，激素水平的高低將直接影響生殖器官發(fā)育，其濃度范圍可間接反映排卵情況。

（一）雌激素（E）

E 是雌性動物用來維持第二性征的重要激素，可以維持正常的發(fā)情和繁殖并使排卵后的濾泡變?yōu)辄S體。E 由卵泡膜內(nèi)層及胎盤產(chǎn)生，進(jìn)入發(fā)情前期，E 水平上升，母犬出現(xiàn)外陰紅腫，流血興奮及吸引公犬嗅聞等特征性表現(xiàn)。隨著卵泡的發(fā)育成熟，E 的水平到達(dá)峰值，同時P 的濃度升高加快，隨后E 濃度逐漸下降，24h ～48h 后LH 到達(dá)高峰，進(jìn)入發(fā)情期，母犬的行為變化為從拒絕交配轉(zhuǎn)向主動求偶。

圖1 昆明犬E 濃度變化曲線

（二）卵泡刺激素（FSH）

FSH 能夠促進(jìn)卵泡的發(fā)育和成熟，協(xié)同LH 促進(jìn)E 分泌和排卵。間情期末，促性腺激素釋放激素（GnRH）脈沖頻率顯著升高，垂體對GnRH 的敏感性增加，血液中的FSH 濃度隨之升高。對犬卵巢切片的放射自成像分析表明，F(xiàn)SH 結(jié)合位點僅能在竇卵泡的顆粒細(xì)胞中檢測到，峰值強(qiáng)度在竇卵泡直徑小于1mm 時可見。相反，LH 的受體不存在于竇前卵泡中，并且在直徑大于1mm 的卵泡中發(fā)現(xiàn)，提示FSH 在犬早期卵泡發(fā)育及終止間情期起到一定作用。

多種哺乳動物的卵泡發(fā)育都伴隨著卵泡波的出現(xiàn)，卵泡的分泌呈脈沖式，通常在一個發(fā)情周期中會出現(xiàn)多個卵泡波，且每個卵泡波都伴隨著一個FSH 的分泌峰。例如羊的發(fā)情排卵期會出現(xiàn)3 ～4個卵泡波，每個卵泡波都伴隨著不同的FSH 峰值出現(xiàn)，F(xiàn)SH 在發(fā)情期時達(dá)到峰值，排卵后恢復(fù)至低水平，顯示出一種平穩(wěn)的脈沖式的分泌。研究顯示，F(xiàn)SH 和E 的分泌相互拮抗，F(xiàn)SH 處于峰值時E 含量處于低水平，在卵泡成熟后，卵泡受FSH 作用力減弱，從對FSH 的依賴轉(zhuǎn)移至LH 依賴。

圖2 FSH 濃度變化曲線

（三）促黃體生成素（LH）

LH 可以促使卵泡排卵后黃體形成，LH 和FSH 協(xié)同可促進(jìn)卵泡的成熟和排卵。據(jù)統(tǒng)計，LH 的大量分泌標(biāo)志著排卵的發(fā)生，LH 峰值持續(xù)時間為1d ～5d，LH 峰值后36h ～54h 發(fā)生排卵，排出的卵子首先是初級卵母細(xì)胞，經(jīng)歷48h ～54h 才可成為成熟的卵子具有受精功能，因此推算授精期約發(fā)生在LH 峰值后的84h ～104h（3d ～4d）。每個犬種的LH 峰值出現(xiàn)的時間不同，比格犬的LH 峰值出現(xiàn)在陰門滴血后的第10d，雪納瑞犬和貴賓犬的LH 峰值出現(xiàn)在有流血癥狀后的9d，可見不同品種的犬種授精時間存在差異。

使用LH 的峰值來判定排卵時間是多數(shù)學(xué)者認(rèn)為較理想的一種方式。有研究顯示子宮頸是在LH 達(dá)到峰值后的7d ～8d 關(guān)閉（排卵后第五天），排卵后6d ～9d 進(jìn)行每天子宮頸內(nèi)人工授精的成功率分別是100%、71.4%、37.5% 和0%，表明在犬出現(xiàn)LH 峰值后的3d ～7d（出現(xiàn)發(fā)情征兆后9d ～13d）配種可大大提高受孕率。

但由于每頭犬的排卵數(shù)不同，受到促性腺激素的脈沖式分泌和年齡大小差異的影響，在單次測量中能準(zhǔn)確獲取LH 峰值較困難，此外，動物L(fēng)H 測定的專用試劑制備難度大，耗費成本高，在推廣使用上受到了限制。

圖3 雪納瑞LH 濃度變化曲線

（四）孕酮（P）

分泌P 的黃體是動物繁育周期中發(fā)揮重要作用的一個內(nèi)分泌組織。不同動物的黃體持續(xù)時間有所差別，由于犬缺乏急性溶解黃體機(jī)制，其黃體持續(xù)時間較長。黃體的調(diào)控激素有催乳素（PRL）和LH，能夠促進(jìn)黃體生成（但無阻礙黃體溶解的功能），PRL 發(fā)揮的作用大于LH，與其他家畜（豬牛馬黃體主要受LH 調(diào)控）存在差異。

各個犬種的P 濃度變化趨勢是一致的，郝志明等在天津帝豪犬業(yè)對61 頭犬種采樣檢測，依照P 的濃度變化將發(fā)情期分為LH 前期、峰期、后期及排卵前半期、后半期和配種期，其中配種期P 的濃度為26ng/ml ～30ng/ml，在此范圍內(nèi)配種產(chǎn)仔率達(dá)90.0%。朱海東等在誘導(dǎo)發(fā)情犬和自然發(fā)情犬試驗中比較證明了發(fā)情周期中P 濃度的變化范圍與趨勢基本一致。繁育工作者也通過足量的數(shù)據(jù)確定出一個大致P 濃度范圍，在這個范圍中授精可保證最佳受孕率。

圖4 昆明犬P 濃度變化曲線

圖5 格力犬P 濃度變化曲線

三、 犬授精時間的確定

目前判定犬授精時間的技術(shù)有很多種，其中包括了P 測定法、陰道涂片法、陰道黏液電阻值測定和唾液結(jié)晶法等。準(zhǔn)確的發(fā)情鑒定可以實現(xiàn)犬高效率的繁殖，傳統(tǒng)意義上的授精多依靠經(jīng)驗或者通過增加授精次數(shù)來保證受孕率，往往由于錯誤的配種造成母本資源以及精液的浪費。另一方面，由于犬的發(fā)情癥狀持續(xù)半個月之久，而能夠成功受孕的授精期卻只有3d ～5d，犬具有長達(dá)6 個月的發(fā)情周期，錯過一次配種時間將會給繁育工作帶來較大的成本損失。以下是幾種常用的授精時間選擇技術(shù)。

（一） 血清P 濃度測定

測定P 濃度是目前檢測排卵的最好的辦法，通過P濃度的量化結(jié)果，可以較精確的判定犬的排卵情況。血清P 濃度測定是目前較為準(zhǔn)確的一種判定排卵時間的方式。P 測量儀器在國內(nèi)多地區(qū)已普遍推廣，測試方法簡單便捷，無需專業(yè)人員就可準(zhǔn)確得出P 濃度，但因其成本問題多運用于以個體為單位的檢測。

張斌等對16 頭發(fā)情犬進(jìn)行P 測定時得出結(jié)論：隨著發(fā)情期的推進(jìn)，犬的排卵P 濃度也隨之上升，當(dāng)P 濃度達(dá)到5ng/ml 時可發(fā)生排卵，在試驗中證實了P濃度在25ng/ml ～45ng/ml 配種可以達(dá)到最大的受孕率。林嘉寶等對222 例發(fā)情犬（155 例藏獒和51 例德國牧羊犬）進(jìn)行P 檢測。通過回訪獲得犬的受孕情況，得到以下結(jié)果：藏獒的最佳配種時間是P 濃度在20ng/ml ～30ng/ml；德國牧羊犬的最佳配種孕酮濃度為10ng/ml ～20ng/ml，此外，大部分的犬種的P 濃度高于20ng/ml 為最佳的配種濃度。

（二）犬陰道細(xì)胞學(xué)檢查

犬發(fā)情時陰道鱗狀上皮細(xì)胞角質(zhì)化程度取決于E和P 水平，陰道粘膜細(xì)胞學(xué)變化為陰道涂片確定發(fā)情階段提供理論基礎(chǔ)。Bouchard（1991）通過對正常發(fā)情后的母犬同時進(jìn)行P 檢測和陰道上皮涂片鏡檢時發(fā)現(xiàn)，陰道上皮的變化趨勢和激素的變化呈線性相關(guān)，結(jié)合兩者之間的變化規(guī)律確定適時配種，可以取得滿意的受孕率。值得注意的是，陰道上皮的采樣操作對于鏡檢結(jié)果的準(zhǔn)確性影響較大，因此在采樣時要選取受E 影響較大的陰道深部采樣。

陰道涂片的變化情況如下，間情期時，陰道由非角質(zhì)化的扁平上皮細(xì)胞覆蓋；進(jìn)入發(fā)情期，上皮細(xì)胞層增生且開始角質(zhì)化，角質(zhì)化最大可達(dá)到20 層。視野呈現(xiàn)了80%以上的角質(zhì)化表皮，最大角質(zhì)化程度持續(xù)1d ～6d，平均持續(xù)2.6d，這個時期母犬接受公犬的爬跨且輸精后受孕率最高；進(jìn)入發(fā)情后期，有核上皮細(xì)胞重新形成。

孫素歌等以陰道前端細(xì)胞的無核細(xì)胞指數(shù)為根據(jù)確定配種時間，研究證明，如果在視野中看到角質(zhì)化表層細(xì)胞大約80%～90%時視為最大角質(zhì)化，75%的母犬在最大角質(zhì)化程度后的第一天發(fā)生排卵。

（三）陰道黏液電阻值測定

母犬在不同的發(fā)情階段陰道粘膜的分泌處于動態(tài)變化中，陰道黏液的電阻隨著粘液分泌的干物質(zhì)和離子濃度的變化而變化。乏情期時母犬子宮陰道分泌物以電解質(zhì)成分為主，電阻較小，進(jìn)入發(fā)情期，分泌物粘性升高，電解質(zhì)濃度下降，黏液阻力升高。發(fā)情母犬從發(fā)情前期到發(fā)情排卵期的陰道黏液電阻變化呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，排卵后血液成分的電解質(zhì)濃度逐步升高，電阻恢復(fù)低水平。黏液電阻值達(dá)到峰值后1d ～2d 內(nèi)配種成功率可以達(dá)到90%以上。

郭浩等對36 頭試驗犬分組觀察得出結(jié)論，陰道黏液電阻達(dá)到峰值后的1d ～2d 配種，受孕率可達(dá)到94.44%，峰后3d～4d 配種受孕率為13.33%，峰值及峰值前配種受孕率為0。由此可見，黏液的電阻值和排卵時間相對應(yīng)，電阻峰值可代表排卵時間，排卵后檢測陰道黏液電阻值可以確定犬授精最佳時間。

檢測電阻值來推斷授精時間是一種操作簡單、安全、低成本、準(zhǔn)確性高的檢測方法，在犬的繁育市場中得到諸多推廣。

表1 母犬不同發(fā)情階段生殖系統(tǒng)的變化規(guī)律

四、討論

（一）發(fā)情期生殖激素規(guī)律變化

犬的生殖激素之間相互協(xié)同，各激素都對繁育的整個過程承擔(dān)了重要角色。不同的生殖激素在犬的發(fā)情過程中表現(xiàn)出了特征性的變化趨勢，且和母犬不同發(fā)情階段的生殖系統(tǒng)及行為變化相對應(yīng)。

母犬在發(fā)情階段生殖激素的變化處于動態(tài)變化中，E 在發(fā)情前期濃度不斷升高，導(dǎo)致生殖道腫脹充血。發(fā)情前期末孕酮濃度開始上升加快，24h ～48h 后LH 達(dá)到峰值，LH 和FSH 協(xié)同誘導(dǎo)卵泡發(fā)育成熟并排卵，卵母細(xì)胞在輸卵管中成熟，母犬主動出現(xiàn)求偶行為，此期進(jìn)行授精受孕率最高，為發(fā)情期。發(fā)情期結(jié)束后母犬進(jìn)入妊娠或者空懷階段，妊娠母犬在P 的支持下維持胎兒的發(fā)育（58d ～62d）。胎兒生產(chǎn)后母犬進(jìn)入間情期，間情期內(nèi)卵巢處于相對安靜狀態(tài)，但卵巢內(nèi)仍然存在3 ～4次的卵泡發(fā)育和退化的過程，血液中E 水平呈現(xiàn)輕度波動變化，持續(xù)約1～3 個月，再次進(jìn)入發(fā)情前期。由此看來，激素水平可以間接地反應(yīng)母犬發(fā)情所處階段。利用這個原理對發(fā)情期的母犬進(jìn)行排卵檢測，進(jìn)而推斷較可靠的授精時間。

（二）常見授精時間選擇技術(shù)比較

臨床上除了文中介紹的三種判斷技術(shù)外，還有其他操作技術(shù)同樣比較實用。從經(jīng)驗角度看，靜立反射和外陰觀察等方法都在一定程度上反應(yīng)了母犬發(fā)情后適當(dāng)?shù)妮斁珪r間，但這些方法受犬的個體差異影響較大，例如年齡大的犬流血持續(xù)時間短，而青年犬流血時間甚至可以持續(xù)達(dá)10d，所以應(yīng)用行為和外陰的變化無法準(zhǔn)確判斷母犬的排卵和授精時間；與依靠經(jīng)驗判斷相比，發(fā)情期唾液晶體鏡檢可以呈現(xiàn)出可觀性的變化，當(dāng)唾液晶體呈現(xiàn)羊齒狀、主梗粗而硬時，代表犬正處于排卵期，唾液晶體鏡檢法具有方便經(jīng)濟(jì)的特點，且成為了預(yù)測排卵期的較可靠的輔助檢測。B 超檢測通過無回聲區(qū)判斷卵泡的動態(tài)變化，和其他技術(shù)相比具有經(jīng)濟(jì)、安全和重復(fù)性好的特點，但是由于超聲波檢查時其目標(biāo)范圍小和對技術(shù)員的要求較高，推廣使用難度較大。

本文介紹的三種授精時間確定中，陰道細(xì)胞學(xué)檢查快速、直觀、簡單易行，依據(jù)各發(fā)情階段陰道上皮細(xì)胞表現(xiàn)出不同的細(xì)胞學(xué)變化可以較準(zhǔn)確地確定犬所處的發(fā)情階段，但陰道涂片法需要做連續(xù)的檢測才能從對照中確定角質(zhì)化程度規(guī)律，花費的時間較多，不利于在短時間內(nèi)準(zhǔn)確確定配種時間；陰道黏液電阻值測定來判定排卵的方法不受采樣操作而受限，簡單易行，大大提高了發(fā)情母犬的受孕率；相比之下，P 濃度檢測和上述技術(shù)相比有其獨特的優(yōu)勢，血漿P 濃度測定方便快捷，且結(jié)果量化，受主觀因素影響小，技術(shù)員可以在較短時間內(nèi)讀取P 的血清濃度，進(jìn)而準(zhǔn)確判斷排卵情況。目前P 測試儀已經(jīng)應(yīng)用廣泛且走向低成本化，隨著科學(xué)的不斷進(jìn)步，P 檢測將是未來判斷發(fā)情母犬授精時間的主流檢測方法。當(dāng)然，在未來市場上的檢測排卵儀器會更加專業(yè)及便利化，且激素和陰道粘膜的生殖生理變化始終是儀器檢測所遵循的基本理論依據(jù)。

五、小結(jié)與展望

現(xiàn)如今家養(yǎng)犬的發(fā)情行為受到了人類活動的影響越來越大，使得犬發(fā)情行為出現(xiàn)了各種變化，為達(dá)到高效率的配種，正確把握發(fā)情犬的排卵時間變得更加重要。本文通過對發(fā)情犬在不同發(fā)情階段發(fā)生的激素水平變化規(guī)律進(jìn)行了歸納總結(jié)，該理論對實踐中鑒定發(fā)情犬的授精時間提供了指導(dǎo)。激素孕酮測定以方便快捷、準(zhǔn)確性高的優(yōu)勢成為確定發(fā)情犬準(zhǔn)確排卵的最優(yōu)選擇。實踐中鑒定發(fā)情犬授精時間有多種方式，本文綜述的幾種技術(shù)都擁有獨特的優(yōu)勢，繁育工作者可以依照現(xiàn)有的儀器和條件選擇恰當(dāng)?shù)姆椒?，必要時進(jìn)行綜合分析。

隨著國內(nèi)犬種數(shù)量的增加，確定不同品種犬的最適配種時間的方法會越來越完善，但各項輔助檢測授精時間的技術(shù)在品種差異方面有待進(jìn)一步研究，迫切需要建立完備的配種參考數(shù)據(jù)，以期為犬的高效繁殖提供更多依據(jù)。