不同免疫檢驗在抗HIV 檢測中的結(jié)果對比

徐彩姝

艾滋病作為一種具有較強傳染性的疾病,主要由HIV 感染后所引發(fā),當(dāng)人體感染這種病毒后會導(dǎo)致自身免疫系統(tǒng)中的CD4T 淋巴細胞受到不同程度的破壞,使人體免疫系統(tǒng)功能損害或者喪失,進一步增加身體感染各種疾病的風(fēng)險性,對于生命安全威脅極大［1］。由于該疾病會對人體免疫功能造成損害,因此又被稱為獲得性免疫缺陷綜合征,目前醫(yī)學(xué)界尚無明確的該疾病治療方法,同時該疾病本身具備較長潛伏期,且發(fā)病前無特殊癥狀,因此臨床上診斷難度很高,如何有效確診艾滋病患者,使該疾病得到有效控制已經(jīng)成為目前醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的重點內(nèi)容［2］。目前臨床上常用的檢測方法為免疫檢驗,其中以膠體金快速法與ELISA法較為常見,但對于這兩種方法臨床診斷準(zhǔn)確性仍然需要進一步確定。本次研究旨在探討膠體金快速法與ELISA 法對于HIV 抗體的檢測準(zhǔn)確性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019 年1～12 月采集的189 例艾滋病疑似患者,其中男103 例,女86 例,年齡26～45 歲,平均年齡(33.18±4.26)歲,病程1～6 年,平均病程(2.91.±0.80)年。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均由免疫印跡法確診；②自愿簽署知情同意書；③病情穩(wěn)定且意識處于正常狀態(tài)；④經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)；⑤無嚴重內(nèi)科疾病或者肢體功能障礙。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并存在嚴重惡性腫瘤；②存在精神障礙或者溝通障礙情況；③合并存在嚴重代謝異常情況；④臨床資料不夠完善。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 本次研究所涉及的儀器與試劑包括：HIV 抗體檢測試劑盒(英科新創(chuàng)科技)、Anti-HIV ELISA Kit(北京萬泰生物藥業(yè))、全自動時間分辨熒光-酶聯(lián)免疫分析儀(深圳愛康)。

1.2.2 檢測方法 所有患者分別接受膠體金快速法與ELISA 法。

1.2.2.1 膠體金快速法 ①待標(biāo)記蛋白溶液制備：將提前準(zhǔn)備好的pH=7.0 氯化鈉溶液(0.005 mol/L)與待標(biāo)記蛋白進行透析,確保其中多余鹽離子去除后,再將10000 g 4℃進行離心處理,以1 h 為標(biāo)準(zhǔn)時長,將其中聚合物徹底清除。②待標(biāo)膠體金溶液準(zhǔn)備：使用適量的碳酸鉀(0.1 mol/L)或者適量的氯化氫(0.1 mol/L)對膠體金液pH 值進行適當(dāng)調(diào)節(jié)。根據(jù)不同標(biāo)記類型適當(dāng)調(diào)節(jié)pH 值,在標(biāo)記IgG 時需調(diào)節(jié)至9.0,在標(biāo)記單克隆抗體(McAb)時需調(diào)節(jié)至8.2,在標(biāo)記親和層析抗體時需調(diào)節(jié)至7.6,在標(biāo)記金黃色葡萄球菌A 蛋白(SpA)時需調(diào)節(jié)至5.9～6.2,在標(biāo)記刀豆凝集索A(ConA)時需調(diào)節(jié)至8.0,在標(biāo)記親和素時需調(diào)節(jié)至9～10。按照待標(biāo)記蛋白需求的相應(yīng)要求,對膠體金的pH 進行調(diào)節(jié)后分別裝入10 個不同試管內(nèi),每個試管1 ml。以免疫球蛋白G(IgG)為例,通過pH=9.0 硼酸鹽緩沖液(0.005 mol/L)對標(biāo)記蛋白進行稀釋處理后,將1 ml 的稀釋液加入金膠溶液內(nèi),確認混勻；其中對照組試管僅加入1 ml 的稀釋液,待5 min 后再次添加濃度為10%的0.1 ml 的氯化鈉溶液于上述各試管內(nèi),待混勻后靜置一段時間,以2 h 為標(biāo)準(zhǔn),對結(jié)果進行觀察記錄。最后通過超速離心法對膠體金標(biāo)記蛋白純化情況進行準(zhǔn)確檢測,記錄相應(yīng)結(jié)果。

1.2.2.2 ELISA 法 嚴格按照HIV 抗體檢測試劑盒說明書進行操作,對檢測結(jié)果進行觀察與記錄。

1.3 觀察指標(biāo) 以免疫印跡法診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn),分別統(tǒng)計ELISA 法、膠體金快速法與免疫印跡法診斷結(jié)果。按照相應(yīng)計算公式對兩種檢測方法的敏感性、特異性及檢測準(zhǔn)確率。敏感性=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%；檢測準(zhǔn)確率=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

189 例疑似艾滋病患者經(jīng)由免疫印跡法確診,經(jīng)血清檢驗后其中HIV 抗體陽性114 例,HIV 抗體陰性75 例。ELISA 法檢測HIV 抗體陽性114 例、HIV 抗體陰性75 例。膠體金快速法檢測HIV 抗體陽性115 例、HIV 抗體陰性74 例。ELISA 法檢測HIV 的敏感性、特異性、準(zhǔn)確率分別為92.1%、88.0%、90.5%高于膠體金快速法檢測的83.3%、73.3%、79.4%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1,表2,表3。

表1 ELISA 法與免疫印跡法診斷結(jié)果比較(n)

表2 膠體金快速法與免疫印跡法診斷結(jié)果比較(n)

表3 兩種免疫檢測方法敏感性、特異性、準(zhǔn)確率比較(%)

3 討論

根據(jù)相關(guān)資料顯示,艾滋病多見于青壯年群體,HIV 病毒在人體內(nèi)潛伏期較長,平均潛伏時間可達到8～9 年；許多患者在發(fā)病前均可正常工作與生活,但發(fā)病后會表現(xiàn)出多種臨床癥狀,包括盜汗、持續(xù)性發(fā)燒、全身淋巴結(jié)腫大、虛弱等,當(dāng)病情逐漸加重會導(dǎo)致導(dǎo)致消化道癥狀、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、呼吸道癥狀、皮膚損害、腫瘤、黏膜損害等。艾滋病存在較強傳染性,傳染途徑包括母嬰傳播、性接觸傳播、血液傳播［3,4］。

目前臨床上針對該疾病的檢查方法較多,主要包括機體免疫功能檢查、病原體檢查、HIV 抗體檢測等,其中以HIV 抗體檢測應(yīng)用較為廣泛,其中常見的檢測方法為膠體金快速法與ELISA 法［5］。ELISA 法即酶聯(lián)免疫吸附試驗,其檢測原理為：當(dāng)抗體與酶相結(jié)合后,不會造成抗體免疫性反應(yīng)的特異性發(fā)生變化,也不會對酶活性造成影響,在補充相應(yīng)底物后造成基質(zhì)水解呈色,可改變還原型氫體顏色,使其從無色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩?通過呈色反應(yīng)可發(fā)現(xiàn)酶,該方法能夠在細胞水平上顯示抗體存在部位,不僅具備較高特異性與敏感性,還可通過納米水平或者微克水平進行定量,可有效避免正常受檢者假陽性檢出結(jié)果,整體應(yīng)用效果較好,目已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床［6,7］。而膠體金快速法主要通過膠體金進行檢測,由于膠體金呈現(xiàn)為紅色,檢測過程中安全性較高,且標(biāo)記物穩(wěn)定性較強,整體檢驗過程較為簡便,具備較高準(zhǔn)確性,反應(yīng)時間不超過30 min,對于儀器藥物不高,因此該方法也得到廣泛應(yīng)用［8,9］。

在本次研究中,膠體金快速法檢測HIV 抗體陽性115 例、HIV 抗體陰性74 例。ELISA 法檢測HIV 的敏感性、特異性、準(zhǔn)確率高于膠體金快速法檢測,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。說明該方法能夠兩種方法對于HIV 抗體均具有較高檢測準(zhǔn)確性,臨床應(yīng)用價值均較高；但其中ELISA 法的陽性準(zhǔn)確性更高,因此在實際檢驗中更推薦以ELISA 法進行檢測,與劉丹丹等［10］的研究結(jié)果具有一致性,值得臨床推廣應(yīng)用。

綜上所述,在抗HIV 臨床檢測過程中,膠體金快速法與ELISA 法均能夠達到較高檢測準(zhǔn)確性,兩種方法檢驗特異度與靈敏度均較高,均能夠為臨床治療提供相應(yīng)指導(dǎo)；但ELISA 法陽性準(zhǔn)確性更高,更推薦臨床應(yīng)用。