丹參飲對非酒精性脂肪肝大鼠血脂、肝臟及心臟PGC-1αmRNA 表達(dá)的影響

張衎，黃古葉，李媛

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530000）

0 引言

非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是一類組織學(xué)改變與酒精肝病相類似，但無過量飲酒史的病理綜合征，逐漸成為進(jìn)展肝硬化、肝癌的重要因素之一，同時也是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)，伴隨心血管方面脂質(zhì)代謝及微循環(huán)紊亂，已嚴(yán)重危害人類健康。過氧化物酶體增殖物激活受體γ 激活因子1α（peroxisome proliferators-activatied receptor γ coactivator-1α，PGC-1α） 是近年發(fā)現(xiàn)的一種核轉(zhuǎn)錄協(xié)同激活因子，屬于PGC-1 家族，主要表達(dá)于骨骼肌、心臟、肝腎等線粒體豐富和能量要求高的組織，研究發(fā)現(xiàn)PGC-1α 不僅參與調(diào)節(jié)適應(yīng)性產(chǎn)熱和線粒體生物合成，而且與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、糖脂代謝及腫瘤代謝也有著密切關(guān)系[1]，另外被認(rèn)為在胰島素抵抗及NAFLD 的發(fā)生過程中起到了關(guān)鍵作用[2]。

丹參飲是活血化瘀、行氣止痛的代表方，氣滯、痰郁、血瘀是本病的主要病理變化。筆者在臨床上應(yīng)用在中醫(yī)體質(zhì)辯證用方基礎(chǔ)上合用丹參飲治療脂肪肝、代謝綜合征相關(guān)高血壓心臟改變收效較好。本研究在中醫(yī)“整體觀”指導(dǎo)下觀察丹參飲在改善肝臟脂質(zhì)代謝同時對心臟脂質(zhì)代謝的微觀影響。

1 主要材料及試劑

1.1 材料。清潔級雄性SD 大鼠30 只購于廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心。高脂飼料（普通飼料88%+豬油10%+膽固醇2%）由廣西中醫(yī)藥大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室提供、配置；丹參、砂仁、木香飲片由廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房提供；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）由廣西中醫(yī)藥大學(xué)仁愛分院檢驗(yàn)科檢測；總RNA 提取試劑盒（天根生化科技有限公司）；trizol（日本TakaRa 公司）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國Thermo公司） 。

1.2 方法

1.2.1 分組、造模與給藥：清潔級雄性SD 大鼠30 只，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后隨機(jī)均分為空白組、對照組和丹參組，空白組以普通飼料喂養(yǎng)，對照組和丹參組以高脂飼料喂養(yǎng)，第8周開始正常組、對照組給予相同體積生理鹽水灌胃，丹參組劑量按3.6g/kg/d 給予丹參飲煎液灌胃。每組大鼠定時灌胃1 次/天，連續(xù)用藥4 周，用藥期間對照組及丹參組繼續(xù)高脂喂養(yǎng)。于12 周末處死大鼠。大鼠隔夜禁食，次晨腹主動脈采血后處死，取肝右葉組織、心臟組織組織-70℃保存?zhèn)錅y。

1.2.2 檢測指標(biāo)：①一般情況：觀察大鼠活動量、飲食、二便飲食。②血清中TC、TG 含量測定 大鼠腹主動脈采血5 mL，送廣西中醫(yī)藥大學(xué)仁愛分院檢驗(yàn)科進(jìn)行檢測。③ RT-PCR 法測定PGC-1αmRNA 的表達(dá)，細(xì)胞總RNA 的提取采用TRIzol 一步法，按說明書操作。PCR 反應(yīng)條件：預(yù)變性50℃2 min，95℃10 min；40 個循環(huán)中95℃30s，60 ℃30s。trizol 提取各組大鼠心臟、肝臟總RNA，檢測RNA 的濃度和純度后，后各取mRNA2μL 按照說明書及反應(yīng)條件進(jìn)行，同時以β-肌動蛋白（β-actin）為內(nèi)參，得出C 值。再根據(jù)2-ΔΔCT 法計算結(jié)果。PGC-1α引 物 上 游5’-AATGCAGCGGTCTTAGCACT-3， 下 游5’-GTGTGAGGAGGGTCATC，片段長度168 bp；β-actin引 物 上 游5’-CACGGAGGCCGGACTCATC-3’， 下 游5’-TAACCTCTATGCCAACAGT-3’，片段長度186 bp。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析。采用SPSS 25.0 統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料用x±s 表示，采用單因素方差分析，組間比較采用q 檢驗(yàn)，P＜0.05 有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察?？瞻捉M大鼠體力充沛、活動量大、二便正常；造模組（對照組及丹參組）大鼠體力稍差，活動量降低、大便稀溏、對外界刺激敏感性降低。灌胃過程中意外死亡3 只。

2.2 對NAFLD 大鼠血清TC、TG 的影響。與正常組比較，對照組大鼠血清TC、TG 的水平明顯升高（P＜0.05）。與對照組比較，給予丹參飲干預(yù)后，大鼠血清TC、TG 水平明顯降低（P＜0.05），見表1。

表1 丹參飲對NAFLD 大鼠血清TC、TG 的影響

表1 丹參飲對NAFLD 大鼠血清TC、TG 的影響

注：與空白組比較，?P<0.05；與對照組比較，ΔP<0.05。

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2.3 對NAFLD 大鼠心臟、肝臟組織PGC-1αmRNA 表達(dá)的影響。與正常組比較，對照組心臟、肝臟PGC-1αmRNA的表達(dá)明顯降低（P<0.05）；與對照組比較，給予丹參飲干預(yù)后，丹參組大鼠心臟、肝臟PGC-1αmRNA 表達(dá)明顯上升（P<0.05），見表2。

表2 丹參飲對NAFLD 大鼠心臟組織、肝臟組織PGC-1αmRNA 表達(dá)的影響

表2 丹參飲對NAFLD 大鼠心臟組織、肝臟組織PGC-1αmRNA 表達(dá)的影響

注：與空白組比較，?P<0.05；與對照組比較，ΔP<0.05。

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3 討論

非酒精性脂肪肝病在中醫(yī)古代文獻(xiàn)中并沒有記載，根據(jù)其癥狀及臨床特點(diǎn)，可把其歸屬于祖國醫(yī)學(xué)的“脅痛”、“痞滿”、 “積聚”等范疇。該病成因與情志、飲食、痰濕及瘀血有關(guān)，鄭丁、郭建利等均認(rèn)為該病基本病機(jī)為痰瘀交阻[3-4]，筆者認(rèn)為痰瘀有形病理因素必有氣滯，因而氣滯、痰郁、血瘀是本病的主要病理變化。丹參飲出自《時方歌括》，方中由丹參一兩，檀香及砂仁各一錢組成。諸藥合用共湊活血化瘀，行氣止痛之功。倪青[5]等探討丹參飲對糖尿病性心肌病大鼠的保護(hù)作用，丹參組與模型組相較，其血糖、甘油三脂、總膽固醇明顯降低，電鏡觀察心肌細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞程度較輕，能顯著延緩高血糖大鼠的糖尿病心肌病發(fā)展進(jìn)程。周小青[6]等用丹參飲、桃紅四物湯等五首活血化瘀復(fù)方研究表明對高脂飲食家兔動脈粥樣硬化均有調(diào)節(jié)血脂、改善血液動力學(xué)及抑制動脈粥樣硬化作用。而本次實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)NAFLD 模型大鼠肝臟組織中PGC-1αmRNA 表達(dá)降低，而丹參飲干預(yù)后肝臟及心臟組織PGC-1αmRNA 表達(dá)上升，同時血清TC、TG 下降。提示PGC-1α 參與調(diào)節(jié)NAFLD 脂質(zhì)代謝過程，對心血管的脂質(zhì)代謝亦有改善作用。

綜上所述，丹參飲能夠提高肝臟、心臟組織PGC-1α 的表達(dá)，改善脂質(zhì)代謝，與臨床上運(yùn)用中醫(yī)治未病思想指導(dǎo)，在治療NAFLD 同時早期干預(yù)心血管的脂質(zhì)代謝及微循環(huán)紊亂理念相符，為NAFLD 早期預(yù)防心血管病變提供治療手段，開拓中醫(yī)肝病方向治未病臨床思路。