吉林省不同產(chǎn)地和采收時(shí)間對白屈菜有效成分含量的影響

周 佳，楊明慧，周啟昕，徐 巖，劉玥欣，趙昕彤，李 鑫，許佳明，黃曉巍

（長春中醫(yī)藥大學(xué)·吉林長春·130117）

中藥是我國最早發(fā)現(xiàn)的藥物，也是中醫(yī)治病的核心手段，但在實(shí)際臨床治療中，醫(yī)者雖辨證論治準(zhǔn)確，但所用之方不能達(dá)到預(yù)期的治療效果，進(jìn)而產(chǎn)生“方靈藥不靈[1]”的結(jié)果。中藥藥性，又稱偏性，是中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對藥物基本性質(zhì)和功能的高度概括[2]，不同藥物的藥效通過藥物的性能得以體現(xiàn)[3]。同一種藥材，由于生長的地域差異受到溫度、濕度、降水、風(fēng)、地形、土壤、微生物發(fā)育等因素的影響，導(dǎo)致藥物稟受地址陰陽二氣存在差異，最終也會(huì)形成中藥藥性物質(zhì)基礎(chǔ)的差異，其在藥理藥效上也有不同程度的體現(xiàn)[4]。東漢藥物專著《神農(nóng)本草經(jīng)》[5]中記載：“土地所出，真?zhèn)涡玛悾⒏饔蟹ā?，唐代孫思邈編著的《千金翼方》中也特別強(qiáng)調(diào)“用藥必依土地”，表明中藥材的產(chǎn)地、生長環(huán)境可直接影響其療效。

白屈菜最早記載于明代早期朱橚所著的 《救荒本草》[6]，是罌粟科白屈菜屬植物白屈菜（Chelidonium majus L.）的干燥全草[7]，夏、秋二季采挖，全草入藥，歸肺、胃經(jīng)[8]，為中醫(yī)臨床常用藥物[9]。研究表明，白屈菜的主要活性成分為異喹啉類生物堿，主要包含白屈菜堿、血根堿、白屈菜紅堿、黃連堿、小檗堿等[10]。目前，白屈菜在吉林省范圍內(nèi)分布較廣泛，但存在不同產(chǎn)地、采收時(shí)間上的差異，導(dǎo)致白屈菜生物堿的含量及其療效存在差異。

本文通過分析吉林省不同產(chǎn)地及采收時(shí)間白屈菜中白屈菜紅堿的含量，來探討產(chǎn)地、采收時(shí)間因素對白屈菜藥材質(zhì)量的影響，指導(dǎo)臨床合理使用白屈菜。1材料

1.1 儀器

MS205DU十萬分之一天平 （梅特勒-托利多集團(tuán)）；ME204萬分之一天平 （梅特勒-托利多集團(tuán)）；HH-Ⅱ恒溫水浴鍋 （上海一恒科技有限公司）；KQ3200B型超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

分析乙腈 （上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?，批?113180301）；分析甲醇（山東禹王實(shí)業(yè)有限責(zé)任公司化工分公司，批號20171121）；三乙胺（西隴科學(xué)股份有限公司，批號1803161）；磷酸（北京化工廠，批號20170906）；鹽酸（北京化工廠，批號 A0300003）；白屈菜紅堿標(biāo)準(zhǔn)品 （上海源葉生物科技有限公司，貨號B20052）。

2 藥材

自2018年5月末至2018年10月末，分別對吉林省范圍內(nèi)平原、草原、半山、山區(qū)9個(gè)地點(diǎn)（長春、白城、伊通、吉林、九臺(tái)、雙陽、通化、扶余、靖宇）的白屈菜進(jìn)行采收，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院許佳明老師鑒定，所有樣品均為白屈菜（Chelidonium majus L.）正品，詳見表1。

表1 白屈菜樣品來源Table 1 Sources of Chelidonium majus L Samples

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 測定指標(biāo)

依據(jù)2015版《中華人民共和國藥典》[11]，以白屈菜紅堿為有效成分含量指標(biāo)。

3.2 藥材處理

將白屈菜全草樣品置于陰涼通風(fēng)處，陰干后過三號篩（355μm），混合均勻。

3.3 對照品溶液制備

精密稱定白屈菜紅堿對照品0.506mg置于10mL量瓶中，分析甲醇定容，制備濃度為0.0506mg·mL-1對照品溶液。

3.4 樣品溶液制備

準(zhǔn)確稱量2g白屈菜粉末于在圓底燒瓶，加入比例為0.5∶100的鹽酸-甲醇混合溶液，將40mL的鹽酸-甲醇混合溶液加熱回流1.5h，冷卻后，補(bǔ)足重量損失。搖勻并過濾，精確測量20mL濾液，蒸發(fā)至干，加入50%甲醇至殘余物中溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，過濾，取濾液。

3.5 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3 柱 （250×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-1%三乙胺溶液 （26∶74）磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0，柱溫 30℃，流速 1 mL·min-1，檢測波長 269 nm，進(jìn)樣量為10μL，根據(jù)白屈菜紅堿的峰值，理論塔板數(shù)應(yīng)不小于2000。

3.6 線性考察

取 1、2、5、8、10μL 分別在“3.3”項(xiàng)下制備的白屈菜紅堿對照品溶液依照“3.5”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 線性考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將白屈菜紅堿對照品溶液的進(jìn)樣量繪制為橫坐標(biāo)（X軸），并將峰面積繪制在縱坐標(biāo)（Y軸），得到回歸方程為：Y=96478X+60920，R2=0.9992。 白屈菜紅堿在峰面積上具有良好的線性關(guān)系，范圍為1~10μL（0.596~5.960μg），結(jié)果見圖 1。

4.2 吉林省不同產(chǎn)地和采收時(shí)間白屈菜紅堿含量

將 54個(gè)批次白屈菜樣品按照“3.4”、“3.5”項(xiàng)下的方法進(jìn)行制備和測定，得到54個(gè)批次白屈菜樣品的白屈菜紅堿含量，結(jié)果如表2所示，峰形圖見圖2。不同產(chǎn)地、采收時(shí)間白屈菜樣品之間的白屈菜紅堿含量均有差異，其中C22（靖宇市7月末）白屈菜紅堿含量最高，達(dá)到 0.333mg/g（16.65%），C37（白城 9 月末）白屈菜紅堿含量最低，達(dá)到0.050mg/g（2.5%）。在54個(gè)樣品中，其中有28個(gè)樣品的白屈菜紅堿含量小于0.2mg/g，均不符合2015年版《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，主要包括5月末、9月末、10月末采集的大多數(shù)地區(qū)白屈菜樣品及白城地區(qū)5～10月末的白屈菜樣品，剩余26個(gè)樣品的白屈菜紅堿含量都符合2015年版《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，7月份白屈菜紅堿含量普遍較高。

圖1 白屈菜紅堿對照品溶液線性關(guān)系圖Fig.1 Linear relationship of chelidoninereferencesolution

表2 吉林省不同產(chǎn)地和采收時(shí)間白屈菜紅堿含量Table 2 Content of Chelerythrine in Different Origins and Harvesting Time in Jilin Province

圖2 吉林省不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間白屈菜紅堿含量HPLC圖Fig.2 Content of Chelerythrine in Different Origins and Harvesting Time in Jilin Province HPLC

5 討論

2015年版《中國藥典》將白屈菜紅堿作為白屈菜藥材的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，故本研究選用白屈菜紅堿作為藥材質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)，以評價(jià)吉林省白屈菜藥材質(zhì)量為研究目的，從產(chǎn)地和采收時(shí)間兩個(gè)方面對白屈菜藥材的質(zhì)量進(jìn)行綜合分析，結(jié)果得出：54個(gè)白屈菜樣品中，有28個(gè)樣品的白屈菜紅堿含量低于0.02%，不符合2015年版《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，說明產(chǎn)地和采收時(shí)間對白屈菜的質(zhì)量有較大影響。

白屈菜多生長于陽光明媚、溫暖濕潤的地區(qū)，具有耐寒、耐熱和抗旱的特性，一般生長在濕潤地、水溝邊，松林下和住宅旁。通過本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：吉林省范圍內(nèi)，靖宇、扶余、通化地區(qū)的白屈菜紅堿含量較高，伊通、九臺(tái)、長春、吉林、雙陽地區(qū)的白屈菜紅堿含量較低，白城地區(qū)含量最低。這可能是由于靖宇、扶余、通化地區(qū)位于吉林省東南部，2/3以上的面積為山區(qū)，屬長白山系，中溫帶濕潤氣候區(qū)，山上土質(zhì)肥沃疏松，最宜白屈菜生長，故所產(chǎn)白屈菜中白屈菜紅堿的含量都較高。伊通、九臺(tái)、長春、吉林、雙陽地區(qū)地處吉林省中部，是東南部山區(qū)與西北部平原的過渡地帶，多為平原和丘陵，溫帶大陸性半濕潤季風(fēng)氣候區(qū)，由于東南部長白山地的阻擋和西北部西伯利亞極地大陸氣團(tuán)暢通無阻，中部地區(qū)的冬季嚴(yán)寒漫長，夏季溫暖短促，導(dǎo)致溫、濕度都不如吉林省的東南部地區(qū)，故所產(chǎn)白屈菜中白屈菜紅堿的含量較低。白城地區(qū)位于吉林省西北部，地處大興安嶺山脈東麓平原區(qū)，溫帶大陸性季風(fēng)氣候區(qū)，土地的鹽堿度較高[12]，不利于白屈菜生長，故所產(chǎn)白屈菜中白屈菜紅堿的含量都較低。

選擇適當(dāng)?shù)牟墒諘r(shí)間是決定藥材質(zhì)量和產(chǎn)量的重要因素之一，直接影響到中藥材的生長發(fā)育階段，進(jìn)而決定有效成分的積累量。2015年版《中國藥典》中提及白屈菜的采收期為“夏秋兩季”過于寬泛，無法準(zhǔn)確確定有效成分累積量最大的時(shí)間點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出：白屈菜中白屈菜紅堿含量較高的采收時(shí)間是每年的6～8月份，其中7月含量最高，說明吉林省范圍內(nèi)的白屈菜在7月份時(shí)有效成分的累積達(dá)到高峰，此時(shí)白屈菜果實(shí)已逐漸成熟，養(yǎng)分消耗減少，次生代謝產(chǎn)物的累積增加，莖葉最為茂盛，達(dá)到生物產(chǎn)量最大值，因此7月份是最適宜的白屈菜采收時(shí)間。5月的白屈菜處于次生代謝產(chǎn)物積累初期，尚未開花結(jié)果，生物產(chǎn)量小。9、10月份天氣開始轉(zhuǎn)涼，白城、通化等地區(qū)的白屈菜開始枯萎，白屈菜藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量均有所下降。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，生長地區(qū)和采收時(shí)間會(huì)影響白屈菜中白屈菜紅堿的含量變化，通過檢測白屈菜紅堿的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)靖宇地區(qū)的白屈菜采收時(shí)間在7月份，即果實(shí)逐漸成熟，莖葉最為茂盛時(shí)，其白屈菜紅堿的含量最高，為今后白屈菜藥材在臨床中的選擇應(yīng)用提供有力依據(jù)。