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    三七美白化妝品的研究及開發(fā)

    2020-03-27 03:59:30周家明歐景春馮光泉
    人參研究 2020年1期
    關(guān)鍵詞:干燥箱白芨燒瓶

    周家明 ,歐景春 ,趙 愛 ,馬 妮 ,馮光泉

    (1.文山學(xué)院三七研究院,文山663099;2.文山學(xué)院三七學(xué)院,文山663099)

    三七是馳名中外的名貴藥材,其主要成分有三七皂苷、三七素、多糖、黃酮、蛋白質(zhì)等,以主根、根莖(三七剪口)入藥,生用可止血化瘀、消腫止痛,活血散瘀、抗衰老、降脂功效[1]。將三七作為此次化妝品配方中的主要藥材主要利用三七活血化瘀、抗衰老的功效??鄥槎箍浦参锘睂倏鄥⒌母稍锔诒静菥V目、神農(nóng)本草經(jīng)、本草匯言等著作中都有描述??鄥⒌挠行С煞种饕强鄥A,苦參具有清熱燥濕、殺蟲、利尿、消炎等功效,可用于熱痢、便血、黃疸、尿閉、赤白帶下,同時根據(jù)其殺蟲止癢的功效可用于陰腫瘙癢,各種皮膚病,根據(jù)其消炎的作用,將其放入化妝品中研究。白術(shù)為菊科蒼術(shù)屬的多年生草本植物,在神農(nóng)本草中有描述,苦、溫、無毒,具有補氣健脾,燥濕利水、止汗、安胎、抗氧化、除熱、消食等功效;根據(jù)其功效,白術(shù)可用于健脾益氣、燥濕利水,脾虛食少、泄瀉便溏、胎動不安等,用于化妝品的研究主要是其具有抗氧化的作用。白及為蘭科植物白及干燥的塊莖為一種多年生草本植物,白及的有效部位主要是假鱗莖,有效成分主要是揮發(fā)油、多糖、具有豐富黏液質(zhì)的白芨膠等,白芨具有收斂止血,消腫生肌等功效。白蘞為葡萄科植物白蘞的干燥塊莖,主要是春秋二季采收,白蘞中的有效成分有酚酸類、黃酮類、蒽醌類[2],同時還含有粘質(zhì)和淀粉、酒石酸、延胡索酸等有效成分,白蘞具有清熱解毒,散結(jié)止痛、斂瘡生肌的功效。

    1 實驗材料與方法

    1.1 材料及試劑

    三七(文山三七市場)、白術(shù)(文山百姓超市)、白芨(文山百姓超市)、白蘞(云南穗民生物科技開發(fā)有限公司)、苦參(昆明道地中藥飲片廠);磷酸二氫鉀(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)、氫氧化鈉(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)、L-酪氨酸(上海新興化工試劑研究所)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    759s型紫外/可見分光光度計(上海元析儀器有限公司)DLSB低溫冷卻液循環(huán)泵(鞏義市子華儀器有限責(zé)任公司)FA2004電子天平 (上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市子華有限責(zé)任公司)HH-600數(shù)顯恒溫水箱(金壇市大地自動化儀器廠)DZF-6020真空干燥箱(上海博訊實業(yè)有限公司)XL5A型湘立離心機 (湖南湘立科學(xué)儀器有限公司)。

    1.3 中藥樣品浸膏的制備

    1.3.1 藥材前處理與溶液的配制

    分別取150g三七、白術(shù)、白及、白蘞、苦參打粉,過20目篩,備用。pH6.8的磷酸緩沖液:精密稱取磷酸二氫鉀25g,加入125ml的蒸餾水即得0.2ml/l的磷酸二氫鉀溶液,再稱取11.6g的NaOH加入58ml的蒸餾水即得0.2mol/l的NaOH溶液,將兩種混合用500ml的蒸餾水稀釋,搖勻,即得。

    1.3.2 三七的提取物的制備

    將從三七市場購買來的60頭干燥三七粉碎,過10目篩,取150g藥粉,精密稱定,置于2000ml蒸餾燒瓶中,以70%的乙醇為有機溶劑提取液[3],回流提取3次,每次 2h,溫度為 85℃,第一次按照料液比 1∶10,第二次、第三次用料液比1∶8,合并乙醇提取液,合并的乙醇提取液按20倍的比例濃縮,將藥液放于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中70℃的條件下濃縮(2800ml的濃縮成140ml的),回收溶劑。將濃縮液分別置于三個鐵瓷盤中,于66℃的真空干燥箱中干燥,每小時對真空干燥箱進行排氣一次,同時不斷地觀察干燥的程度,隨后即得浸膏。

    1.3.3 白芨的提取物的制備

    干燥白芨于粉碎機中粉碎并過10目篩,取150g藥粉,精確稱定,置于2000ml蒸餾燒瓶中,浸泡30min后,用蒸餾水回流提取90min[4],共提取3次,第一次按照料液比為1∶10加入1500ml的蒸餾水,第二次、第三次按照料液比1∶8分別加入蒸餾水,然后把蒸餾燒瓶置于水浴鍋中回流加熱提取,加熱溫度為100℃,提取液合并抽濾,濾液在溫度為85℃的條件下按照20倍的比例濃縮。把濃縮液分別放入鐵瓷盤中置于真空干燥箱中干燥,溫度為65℃。每小時對真空干燥箱進行排氣一次,同時不斷地觀察干燥的程度,即得白芨浸膏。

    1.3.4 白蘞的提取物的制備

    干燥白蘞于粉碎機中粉碎并過10目篩,取150g藥粉,精確稱定,置于2000ml蒸餾燒瓶中,浸泡30min后,用蒸餾水回流提取90min,共提取3次,第一次按照料液比為1∶10加入1500ml的蒸餾水,第二次、第三次按照料液比1∶8分別加入蒸餾水,然后把蒸餾燒瓶置于水浴鍋中回流加熱提取,加熱溫度為100℃,提取液合并抽濾,濾液在溫度為85℃的條件下按照20倍的比例濃縮。把濃縮液分別放入鐵瓷盤中置于真空干燥箱中干燥,溫度為65℃。每小時對真空干燥箱進行排氣一次,同時不斷地觀察干燥的程度,即得白蘞浸膏。

    1.3.5 白術(shù)的提取物的制備

    干燥白術(shù)于粉碎機中粉碎過10目篩,取150g藥粉,精確稱定,藥材粉末放到2000ml蒸餾燒瓶中,回流提取3次,每次2h,溫度為55℃,第一次按照料液比為1∶10加入 1500ml的 80%的乙醇,用 0.2mol/l的 NaOH將溶液的PH調(diào)為7[5],同樣的條件下,第二次、第三次的料液比調(diào)為1∶8,然后把蒸餾燒瓶置于水浴鍋中回流加熱,把提取液合并抽濾,濾液以20倍的比例,在50℃的條件下濃縮,最后將濃縮液分別置于三個鐵瓷盤中,放于真空干燥箱中45℃的條件下干燥,即得浸膏。

    1.3.6 苦參的提取物的制備

    干燥苦參于粉碎機中粉碎過10目篩,取150g藥粉,精確稱定。把過篩的藥材粉末放到2000ml蒸餾燒瓶中,以60%乙醇回流提取3次,每次2h,第一次料液比為 1:10,第二次料液比為 1:8,溫度為 85℃[6]。 將提取液用真空抽濾瓶抽濾,抽濾液以75℃的溫度濃縮,然后在將濃縮液抽濾(因為苦參屬于草本,濾渣較多),最后將濃縮液平分于鐵瓷盤中,在真空干燥箱中70℃的條件下干燥,苦參浸膏的制備即完成。

    1.4 酪氨酸酶活性的測定

    0.15 %ml/l的L-酪氨酸溶液的配置:取0.0015gL-酪氨酸,精密稱定,緩慢、多次、少量的加入100ml的蒸餾水,搖勻即可。

    1.4.1 酪氨酸酶的制備

    將馬鈴薯洗凈,去皮,切成邊長約1cm的塊狀,于-20℃冷凍過夜,稱重按 1∶1(w:v)的比例加入 4℃預(yù)冷的磷酸緩沖液(20g的土豆加入20ml的緩沖液),快速勻漿,用3成紗布過濾,濾液于3500r/min離心15min,上清液即為所得的酪氨酸酶粗酶液,用移液管移取10ml上清液裝在25ml棕色容量瓶中,用(Ph6.8)的磷酸緩沖液定容,冰水浴備用,2h內(nèi)用完。

    1.4.2 吸光度的測定方法

    測定含有酪氨酸試液樣的吸光度。在酪氨酸酶反應(yīng)生成黑色素的過程中,酪氨酸酶的催化作用主要發(fā)生在酪氨酸轉(zhuǎn)化為多巴以及多巴轉(zhuǎn)化為多巴醌這兩個反應(yīng)中,多巴醌是一有色物質(zhì),可以用分光光度計(475nm)測定[7]。先將膏狀中藥提取物用蒸餾水稀釋至濃度為1mg/ml的溶液,在試管中把稀釋的藥品按照一定的比例配方(三七∶白術(shù)∶白芨∶白蘞∶苦參=3∶2∶2∶2∶1)混合,搖勻,備用。

    按表1準(zhǔn)確吸取中藥樣品,pH6.8磷酸鹽緩沖液和0.15%L-酪氨酸溶液,充分混勻,在室溫條件下靜置10min后,加入0.6ml土豆上清液,搖勻,再在室溫下靜置10min,PBS為參比,迅速轉(zhuǎn)移至比色皿中,在475nm處測吸光度,做3個平行樣。

    表1 -1待測液的組成

    利用各組吸光度,通過計算得出酪氨酸酶抑制率,其計算公式如下(1-1):

    (1-1)

    A組:未加中藥樣品的加酶混合液;B組:未加中藥樣品亦未加酶的混合液;C組:加中藥樣品和酶的混合液;D組:加中藥樣品未加酶的混合液。

    1.5 數(shù)據(jù)分析方法

    采用紫外分光光度法測定中藥樣品對酪氨酸酶的抑制率,包括最大值、最小值、平均值等,通過采用求平均值對實驗所得數(shù)據(jù)的進行比較、分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 數(shù)據(jù)處理

    表2 -1藥品所測的吸光度數(shù)值

    表2 -2樣品所測的吸光度

    表2 -3樣品所測的吸光度

    表2 -4中藥提取物對酪氨酸酶活性抑制率測定(%)

    2.2 實驗結(jié)果分析

    采用紫外分光光度計測定中藥樣品對酪氨酸酶活性的抑制率,每個樣品測定三次,每次做三個平行試樣,根據(jù)表5所得實驗數(shù)據(jù),表明三七、白術(shù)、白芨、白蘞、苦參(3∶2∶2∶2∶1)比例配方的中藥樣品的混合物對酪氨酸酶具有一定的抑制率,平均抑制率的數(shù)據(jù)為34.6%。該數(shù)據(jù)為化妝品的研究及開發(fā)提供了科學(xué)的數(shù)據(jù)支持,對酪氨酸酶具有一定的抑制率,說明此次實驗的研究配方的初步結(jié)果表明了文山道地藥材三七,七白膏中選取的三白,加上具有消炎作用的苦參具備一定的美白祛斑功效。

    3 結(jié)論

    3.1 對于現(xiàn)在人們存在的皮膚問題越來越嚴(yán)重,同時人們的生活水平的層次也在不斷的提高,化妝品行業(yè)暴露的問題也越來越嚴(yán)重,特別是美白祛斑的化學(xué)物質(zhì)的副作用的程度也在擴大的過程中,加上我國在運用中藥治療和護理各種皮膚病上已有幾千年的歷史[8],這些為科學(xué)研究者尋找天然的美白活性物質(zhì)提供了一定的基礎(chǔ)。

    3.2 本文在藥材的提取方面有些損失,特別是白芨、白蘞的提取液屬于黏液質(zhì),在過濾的時候,白芨、白蘞損失特別嚴(yán)重,同時苦參的過濾由于粉末較多,也導(dǎo)致?lián)p失嚴(yán)重。

    3.3 另一方面使用的酪氨酸酶不是酪氨酸酶制劑,而是用馬鈴薯提取制備的酪氨酸酶,這方面對于檢測的結(jié)果略有些影響,但是實驗結(jié)果的測定條件都是一定的,所以得到的實驗數(shù)據(jù)也是相對的,在沒有酪氨酸酶制劑的情況下,本次試驗也可以作為化妝品在研究開發(fā)方面初步選擇藥材的方法。

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