非洲豬瘟的檢測(cè)技術(shù)

車(chē)寧寧

非洲豬瘟（ASF）是野豬和家豬的一種高度致死性傳染病，死亡率可達(dá)100%，主要由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起。據(jù)臨床研究發(fā)現(xiàn)，該病可細(xì)分為四大類(lèi)型。急性型潛伏期略短，大約5天以內(nèi)，在臨床上主要表現(xiàn)為高熱、表皮發(fā)黑，在1周左右發(fā)生死亡。豬在感染病毒后以發(fā)熱、出血性病變?yōu)橹饕卣?。有的毒株可引起高發(fā)病率和高死亡率。目前尚無(wú)有效預(yù)防該病的疫苗?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)ASF的臨床癥狀與經(jīng)典豬瘟十分相似，對(duì)于防控和根除該病，簡(jiǎn)便、靈敏的診斷技術(shù)至關(guān)重要。沈陽(yáng)市首次出現(xiàn)此類(lèi)病例，隨后在多個(gè)省份暴發(fā)，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。ASF的慢性病例與艾滋病的某些癥狀相似，也曾有研究者將ASF稱(chēng)為豬的獲得性免疫缺乏綜合征。ASF屬于一種復(fù)雜的出血性傳染病，并且目前并沒(méi)有研制出預(yù)防該病的疫苗。適用于ASF或與其相似臨床癥狀的疾病的診斷與鑒別的方式相對(duì)較少，并且對(duì)于活病毒的診斷技術(shù)手段較為欠缺。隨著ASF的肆意蔓延，愈加需要更完善的技術(shù)來(lái)診斷鑒別病毒，而對(duì)于實(shí)驗(yàn)室而言，則需要把檢測(cè)方法進(jìn)一步的完善，減少漏洞的出現(xiàn)。

該病目前還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)治愈和防控的疫苗，所以我國(guó)研究并建立高效，完善的ASFV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，通過(guò)該實(shí)驗(yàn)室的快速成立為ASF的防控和治療做好了很重要的鋪墊。就目前來(lái)看，ASF病原學(xué)診斷技術(shù)包括核酸檢測(cè)、抗原檢測(cè)和活病毒檢測(cè)等一系列。目前，ASFV的檢測(cè)技術(shù)主要有針對(duì)病毒DNA的核酸檢測(cè)技術(shù)和病毒抗原、抗體反應(yīng)的免疫學(xué)技術(shù)兩大類(lèi)，通過(guò)研究世界衛(wèi)生組織推薦ASFV的檢測(cè)方法主要有 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)、PCR檢測(cè)和ELISA檢測(cè)等。通過(guò)免疫學(xué)的知識(shí)進(jìn)行抗體檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)我們可以了解到ASFV的感染過(guò)程以及發(fā)生階段，這樣會(huì)使我們更好的進(jìn)行治療，但是這種方式的檢測(cè)，抗體只有感染病毒到一定程度才會(huì)出現(xiàn)，這樣會(huì)對(duì)治療造成一定延誤，所以ELISA等其他抗體檢測(cè)的方法存在一定的限制性。PCR、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR、LAMP等分子生物學(xué)技術(shù)在豬感染ASFV的早期即可檢測(cè)到病毒核酸，這種方法的研究和普及對(duì)早期的檢測(cè)起到至關(guān)重要的作用?？傮w來(lái)說(shuō)，ASFV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法有很多種，各自有不同的優(yōu)缺點(diǎn)。

核酸檢測(cè)，PCR檢測(cè)技術(shù)是目前應(yīng)用最為廣泛的檢測(cè)技術(shù)，其具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的特性。PCR檢測(cè)操作方法簡(jiǎn)單、快捷。但擴(kuò)增后需要使用溴化乙錠來(lái)進(jìn)行電泳檢測(cè)，且該方法的敏感性較低。是目前最簡(jiǎn)單的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。同時(shí)PCR技術(shù)也適用于對(duì)保存不當(dāng)?shù)慕M織及血液樣品進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，將光譜技術(shù)引入其中，特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的量是通過(guò)熒光信號(hào)的強(qiáng)弱變化定量測(cè)定，不但解決了敏感性較低的問(wèn)題，而且減輕了電泳檢測(cè)中溴化乙錠對(duì)環(huán)境的污染。實(shí)時(shí)熒光定量PCR可同時(shí)快速檢測(cè)大批量樣品，因其特異性高、敏感性好，是目前應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA），目前常用的免疫學(xué)診斷技術(shù)是ELISA試驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程簡(jiǎn)單、操作速度快，可用于豬群中ASFV感染的大規(guī)模調(diào)查，但無(wú)法對(duì)ASFV的早期感染做出診斷，具有一定的滯后性。