核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”,而檢測流程中的每一個環(huán)節(jié)都是精細活,容不得半點馬虎。
“這里是與病毒‘零距離接觸的地方,整個實驗室完全密封,室內(nèi)處于負壓狀態(tài),我們喜歡用‘三流來形容它,即人流、物流、氣流的單向流動,確保在里面的污染物不會泄漏到外面而造成污染。”廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室主任林劍國說。而他說的“這里”指的就是P3實驗室(生物安全防護三級實驗室)。廣東省第二人民醫(yī)院每天400多份新冠病毒核酸檢測就是在這里開展的。
現(xiàn)在,讓我們揭開廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室的神秘面紗,看看在這里病毒究竟是怎樣被“揪出來”的?
檢測流程每個環(huán)節(jié)都是精細活
核酸檢測確診新冠肺炎的流程可分為5個步驟:樣本進入“傳遞窗”-滅活處理-開蓋加樣和核酸提取-擴增反應(yīng)判斷結(jié)果-高壓滅菌。
第一步,采集的檢測樣本如咽拭子或肛拭子,在進入P3實驗室前就得先進入一個特殊的窗口——“傳遞窗”,這個窗口也叫Air Lock,空氣鎖,顧名思義,與空氣有關(guān)。這個傳遞窗有不能同時打開的雙重門,保證傳遞樣本時帶進去的空氣被隔離在雙重門中,確保實驗室外的環(huán)境不受污染。
第二步,樣本在水浴箱經(jīng)半個小時56℃的高溫滅活,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力,使實驗員在對樣本進行檢測時相對安全,但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。
第三步,進行開蓋加樣和核酸提取。
第四步,提取的核酸送到核酸檢測室內(nèi),就要上儀器了。提取的核酸加入擴增試劑中,通過熒光PCR儀進行RT-PCR反應(yīng),先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA,再以DNA為模版,對特定位點進行擴增,利用不同的溫度進行變性、退火和延伸,每個循環(huán)采集熒光值,45個循環(huán)后繪制熒光曲線,用時約110分鐘,實驗員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果為陰性或陽性。
第五步,實驗過程產(chǎn)生的污物通過高壓滅菌后,按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理。
檢測結(jié)果經(jīng)歷重重比對與復(fù)核
任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導(dǎo)致檢測結(jié)果差錯。因此,為保障檢測的質(zhì)量,檢測結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對與復(fù)核。
在檢測過程中,實驗員始終保持謹慎的態(tài)度進行每一次測試,不錯過任何一個可疑樣本,針對可疑樣本,還會選用不同的試劑進行復(fù)核確定;其次,按照流程,每進行一批實驗,均會隨機插入三個以上空白對照,針對陽性樣本還會進行病毒基因的測序比對,以防止“假陽性”的出現(xiàn)。
檢測后,實驗室還會定期隨機抽取檢測樣本送到第三方實驗室進行檢測,對數(shù)據(jù)進行對比分析,同時實驗室也會參加衛(wèi)生主管部門和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評,保障檢測的準確性。
(摘自《科技日報》)