基于特征圖譜的人參屬藥材西洋參、人參、三七的比較

嚴華 張慧秀 白宗利 樂智勇 魏鋒 馬雙成

摘要 目的：建立同時適用于五加科人參屬西洋參、人參和三七藥材高效液相色譜（HPLC）特征圖譜鑒別和含量測定方法，為同屬藥材的鑒定及質(zhì)量評價提供科學依據(jù)。方法：西洋參、人參、三七均以甲醇提取，特征圖譜及含量采用同一液相色譜條件：C8色譜柱，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，紫外光（203 nm）檢測，特征圖譜采用Chempattern化學計量學軟件進行數(shù)據(jù)處理、計算相似度、主成分分析。結(jié)果：西洋參特征圖譜有11個共有峰相似度為0.86～0.99，特征成分為人參皂苷Rc、人參特征圖譜有9個共有峰，相似度為0.98～0.99，特征成分為人參皂苷Rf，三七特征圖譜有8個共有峰，相似度為0.96～1.0，特征成分為三七皂苷R1，品種內(nèi)相似度均很高，品種間相似度低為0.54。主成分分析可將3種藥材顯著區(qū)分，并顯示特征成分及共有成分人參皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd峰對區(qū)分3種藥材累積貢獻權(quán)重值為87%，其中人參皂苷Rg1與人參皂苷Re峰面積比值在3個藥材中的差異有統(tǒng)計學意義，比值范圍穩(wěn)定，三者比值依次為0.13±0.08、1.20±0.60、8.30±3.0，對于藥材的鑒定有重要意義。各共有成分的單體含量及其總含量均以三七為最高，西洋參次之，人參最低，人參皂苷Rg1在西洋參與人參中的含量基本一致。結(jié)論：新建立的HPLC特征圖譜方法在鑒別同屬藥材品種的同時測定了主要皂苷成分的含量測定，方法的專屬強，穩(wěn)定性高，重復(fù)性好，且大幅縮短了分析時間，提高分析效率，為藥材的質(zhì)量評價提供科學便捷的方法和依據(jù)。

關(guān)鍵詞 西洋參;人參;三七;特征圖譜;主成分分析;人參皂苷;含量測定;共性成分;特征成分;成分比值

Comparison of Panax quinquefolium，Panax ginseng，and Panax notoginseng Based on Specific Chromatograms

YAN Hua1，ZHANG Huixiu2，BAI Zongli2，LE Zhiyoung2，WEI Feng1，MA Shuangcheng1

（1 National Institute for Food and Drug Control，Beijing 100050，China; 2 Kangmei Pharmaceutical Co.，Ltd.，Beijing 102629，China）

Abstract Objective：To establish a high-performance liquid chromatography （HPLC） method for identification and content determination of Panax quinquefolium，Panax ginseng，and Panax notoginseng，which belongs to Araliaceae，to provide scientific basis for the identification and quality evaluation of the same medicinal materials.Methods：Panax quinquefolium，Panax ginseng，and Panax notoginseng were all extracted with methanol，and the feature map and content were under the same liquid chromatography conditions：C8 chromatographic column，acetonitrile-water as mobile phase，gradient elution，ultraviolet light （203 nm） detection，Chempattern chemometrics software was used for data processing，similarity calculation and principal component analysis （PCA）.Results：The feature map of Panax quinquefolium had 11 common peaks，the similarity was 0.86-0.99，and the diagnostic component was ginsenoside Rc.The feature map of Panax ginseng had 9 common peaks，the similarity was 0.98-0.99，and the diagnostic component is ginsenoside Rf.The feature map of Panax notoginseng had 8 common peaks，the similarity was 0.96-1.0，and the diagnostic component is Panax notoginseng saponin R1.The similarity within the varieties was very high，and the similarity between the varieties was as low as 0.54.Principal component analysis could distinguish the 3 medicinal materials significantly，and display the diagnostic components and common components.The ginsenoside Rg1，Re，Rb1 and Rd peaks had a cumulative contribution weight value of 87% for distinguishing the 3 medicinal materials.Among them，the peak area ratios of ginsenoside Rg1 and ginsenoside Re were significantly different among the 3 medicinal materials，and the ratio range was stable.The ratios of the three were 0.13±0.08，1.20±0.60，and 8.30±3.0.Identification was significant.Regarding the monomer content and total content of each common component，Panax notoginseng was the highest，Panax quinquefolium was the second，and Panax ginseng is the lowest.The content of ginsenoside Rg1 in Panax quinquefolium was basically the same.Conclusion：The newly established HPLC feature map method determines the content of the main saponin components while identifying the same medicinal materials.The method is exclusive，has high stability，and has good repeatability.It also greatly shortens the analysis time and improves the analysis efficiency.Quality evaluation provides scientific and convenient methods and basis.

Keywords Panax quinquefolium; Panax ginseng; Panax notoginseng; Feature map; Principal Component Analysis （PCA）; Ginsenoside; Assay; Common elements; Diagnostic component; Content ratio

中圖分類號：R282.5;R284.1文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.06.006

西洋參（Panax quinquefolius L.）、人參（P.ginseng C.A.Mey）和三七（P.notoginseng F.H.Chen）均為來源于五加科人參屬的名貴中藥材，《中華人民共和國藥典》描述它們的藥性和功效有顯著差別：西洋參性涼，功效補氣養(yǎng)陰，清熱生津，人參性微溫，功效大補元氣，復(fù)脈固脫，補脾益肺，生津，安神，三七性溫，功效散瘀止血，消腫定痛[1]，三者內(nèi)在化學成分相同或相近，皂苷類成分是其中重要的一類具有生命活性的物質(zhì)，三者有很多的共性成分，如人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rd等，也各含特有成分，如西洋參中含擬人參皂苷F11，人參含人參皂苷Rf、三七含三七皂苷R1，R2等[2-5]，共有成分中有的對藥性和藥效有顯著影響，如二醇型皂苷人參皂苷Rb類，具有中樞鎮(zhèn)靜作用，表現(xiàn)出降血脂的作用較強，原人參三醇型皂苷人參皂苷Rg類，具有較強的中樞神經(jīng)興奮作用，表現(xiàn)出升血壓、增加心肌收縮力等作用，二者在藥材中比例的不同，最終表現(xiàn)出對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的雙向調(diào)節(jié)作用的不同，如人參常用于厥、脫癥的搶救[6-8];而三七中的三七素和人參皂苷Rg1是三七止血與活血雙向調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，由此可見三者不能相互混淆使用[9]，但在市場三者價格波動顯著時，常易發(fā)生替代或混雜使用的現(xiàn)象，尤其易發(fā)生在加工成粉末飲片，或中成藥投料中[10-11]。為了從內(nèi)在成分區(qū)分3種藥材，使其在臨床用藥上更加科學化、合理化，本研究以皂苷類成分為指標，建立特征圖譜[12-14]，通過主成分分析[15]，對具有代表意義的共有成分降維處理，鑒別藥材品種，并測定共有成分中4個主要成分的含量，比較其分布和比例關(guān)系，為3種藥材的質(zhì)量控制提供了可靠的方法及依據(jù)。與現(xiàn)行標準方法相比，統(tǒng)一了提取方法、色譜條件，分離效果好，專屬性強，在鑒定一個未知樣品時，大大提高檢定效率。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695-2996系列液相色譜儀（包括2695型高精度四元梯度泵、真空在線脫氣機和柱溫箱，2996型二極管陣列檢測器，Empower@3色譜工作站，Waters公司，美國）;Alltech ES2000蒸發(fā)光散射檢測器（Alltech公司，美國，型號：ES2000）;超聲波清洗儀（功率250 W，頻率40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司，型號：KQ-300DA）。ChemPattern化學計量分析軟件[科邁恩（北京）科技有限公司，型號：2.0版本，下文簡稱“指紋圖譜軟件”]。

1.2 試劑與試藥 對照品：人參皂苷Rg1（批號：110703-201530，純度92.4%）、人參皂苷Re（批號：110754-201525，純度93.4%）、人參皂苷Ro（批號：111903-201805）、人參皂苷Rb1（批號：110704-201424，純度91.2%）、人參皂苷Rb2（批號：111715-201203，純度93.8%）、人參皂苷Rb3（批號：111686-201504，純度97.0%）、人參皂苷Rd（批號：111818-201302，純度92.1%）、人參皂苷Rf（批號：111719-201505，純度90.0%）、三七皂苷R1（批號：110745-201820，純度93.1%），西洋參對照藥材（批號：120997-201309）、人參對照藥材（批號：120917-201712）、三七對照藥材（批號：120941-201409），均由中國食品藥品檢定研究院提供;人參皂苷Rc標準品（批號：180608/11021-14-0，純度大于98%）購于四川省維克奇生物科技有限公司，乙腈為色譜純（Fisher Chemical，加拿大，批號：144248/CAS-No：75-05-8）;甲醇為分析純（國藥集團化學試劑有限責任公司，批號：：20190812/CAS，No：67-56-1）;水為MILI-Q超純水（25 ℃，18 Ω，密理博公司，型號：MILLI-Q A10）。

1.3 分析樣品 西洋參（P.quinquefolius L.），4年生，栽培品22批[16];人參（P.ginseng C.A.Mey），5年生[17]，栽培品，12批，三七（P.notoginseng F.H.Chen），3年生，栽培品，春七，12批[18]，各樣品的產(chǎn)地信息詳見表1，由康美藥業(yè)股份有限公司種植基地、及中國食品藥品檢定研究院提供，經(jīng)本論文作者嚴華鑒定，樣品留存于中國食品藥品檢定研究院中藥所。樣品實驗前粉碎，過四號篩，測定水分，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 西洋參、人參、三七特征圖譜的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Grace C8色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm，流動相以乙腈為流動相A，水為流動相B，梯度洗脫程序：0～10 min，20%A;10～11 min，25%A;11～33 min，33%A;33～38 min，46%A;38～40 min，80%A;40～45 min，100%A;46 min，20%A;流速為1.0 mL/min，檢測波長203 nm，柱溫為30 ℃;理論板數(shù)按人參皂苷Rb1計算應(yīng)不低于5 000，進樣量10～20 μL。

2.1.2 對照品溶液的制備 取人參皂苷Rg1、Re、Ro、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rf對照品和三七皂苷R1 10種對照品，分別加甲醇溶解，制成每1 mL各含0.5 mg溶液作為對照品母液，再分別精密吸取各對照品母液2 mL，置于同一25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，作為混合對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取西洋參樣品粉末0.5 g，精密稱定，置50 mL錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，搖勻，稱定重量，靜置1 h，超聲提取30 min，放置至室溫，稱重，以甲醇補足減失的重量，混勻，通過微孔濾膜（=0.45 μm），取續(xù)濾液，作為西洋參供試品溶液;另取人參、三七樣品粉末各0.5 g，同法制成人參供試品溶液及三七供試品溶液。

2.1.4 精密度 精密吸取同一批西洋參（批號：XYS-07）供試品溶液20 μL，按3.3項色譜條件連續(xù)進樣測定6次，分別記錄色譜圖。以人參皂苷Rb1為參照峰，計算特征峰的相對保留時間及相對峰面積，結(jié)果各特征峰的相對保留時間的RSD<1.2%，單峰面積占總峰面積大于2%的特征峰的相對峰面積RSD<2%，相似度評價結(jié)果為0.98，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.1.5 供試品溶液穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一批西洋參（批號：XYS-07）供試品溶液20 μL，分別于0、2、4、6、8、12、24 h按3.3項色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以人參皂苷Rb1為參照峰，計算特征峰的相對保留時間及相對峰面積，結(jié)果各特征峰的相對保留時間的RSD<1%，單峰面積占總峰面積大于2%的特征峰的相對峰面積RSD<2%，計算相似度結(jié)果為0.99，表明西洋參供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。取同一批次的人參（批號：RS05-01）、三七（批號：SQ-01）供試品溶液，同法操作，結(jié)果人參和三七特征圖譜中各特征峰的相對保留時間的RSD<1%，單峰面積占總峰面積大于2%的特征峰的相對峰面積RSD<2%，相似度分別為0.98和0.99，表明人參、三七供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性均良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗 取同一批西洋參（批號：XYS-07）樣品粉末6份，精密稱定，同法平行制備6份供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液20 μL，按上述色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以人參皂苷Rb1為參照峰，計算特征峰的相對保留時間及相對峰面積，結(jié)果各特征峰的相對保留時間的RSD<1%，單峰面積占總峰面積大于2%的特征峰的相對峰面積RSD<2%，計算相似度為0.95，表明該方法檢測西洋參時重復(fù)性良好。同法操作，分別取人參（批號：RS05-01）、三七（批號：SQ-01）樣品粉末，同法制備供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，特征圖譜結(jié)果顯示，各特征峰的相對保留時間的RSD<1%，單峰面積占總峰面積大于2%的特征峰的相對峰面積RSD均<2%，表明該方法檢測人參、三七時均具有良好的重復(fù)性。

2.1.7 西洋參、人參、三七特征圖譜構(gòu)建及相似度評價 取全部西洋參樣品粉末，分別精密稱定，照2.1.3項供試品溶液制備方法制成供試品溶液，照2.1.1色譜條件注入液相色譜儀，測定，記錄60 min HPLC色譜圖，圖譜以AIA文件格式導(dǎo)入Chempatter指紋圖譜分析軟件，以進口西洋參（XYS-04）為代表樣品，其他所有圖譜與之比對，擬合特征圖譜，利用夾角余弦法計算特征圖譜的相似度，范圍在0.86～0.99;另取全部的人參、三七樣品粉末，分別精密稱定，同西洋參特征圖譜建立方法，以人參對照藥材、三七為代表樣品，分別擬合生成人參特征圖譜和三七特征圖譜，相似度范圍分別在相似度范圍在0.96～0.99、0.96～1.0，各品種特征圖譜種內(nèi)相似度均大于0.85，而種間相似度低，分別在0.38～0.54、0.26～0.43，說明各特征圖譜說明相似性均良好，且具備較強的專屬性;樣品信息及相似度計算結(jié)果見表1，樣品疊加圖譜見圖1，生成的特征圖譜見圖2。

2.1.8 特征峰的確認 按峰面積最小面積占總峰面積2%積分處理所有圖譜，西洋參全部的樣品圖譜擬合生成11個主要的特征峰的特征圖譜，標記為xys①～B11，經(jīng)與對照品色譜峰比對，并結(jié)合DAD光譜，確認其中6個主要特征峰：xys①、人參皂苷Rg1、xys②（人參皂苷Re）、xys③（人參皂苷Ro）、xys④（人參皂苷Rb1）、xys⑤（人參皂苷Rc）、xys⑥（人參皂苷Rd），同法人參全部樣品生成9個特征峰的特征圖譜，標記為rs①～⑨，確認其中5個主要特征峰：rs①（人參皂苷Rg1）、rs②（人參皂苷Re）、rs③（人參皂苷Rf）、rs④（人參皂苷Rb1）、rs⑤（人參皂苷Rd）;三七全部樣品生成8個特征峰的特征圖譜，標記為sq①～⑧，確認其中5個主要特征峰：sq①（三七皂苷R1）、sq②（人參皂苷Rg1）、sq③（人參皂苷Re）、sq④（人參皂苷Rb1）、sq⑤（人參皂苷Rd）;西洋參特有人參皂苷Ro、Rc，人參特有人參皂苷Rf，三七特有三七皂苷R1，三者的共有峰主要有4個：人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，人參皂苷Rb2、Rb3（圖2中8號、9號峰）為同分異構(gòu)體，雖在3種藥材中均可檢出，但因含量均相對很低，保留時間接近易混淆，故未作為主要的共有峰分析。見圖2。

2.1.9 共有峰比值關(guān)系 人參皂苷Rg1、Re為3種藥材特征圖譜共有峰，二者峰面積的比值差異有統(tǒng)計學意義：西洋參該在0.13±0.08，人參該在1.20±0.60，三七在8.30±3.0，這對于藥材的鑒定具有重要意義。見表1。

2.1.10 主成分分析 采用Chempattern化學計量學軟件，特征色譜峰標準化處理，進行主成分分析（Principal Component Analysis，PCA）?？梢?，建立的特征圖譜方法能夠?qū)?種藥材分成3組，從而達到鑒別的目的。箭頭所指為主成分中變量的權(quán)重，箭頭距離原點越遠，表明該成分在區(qū)分樣品中發(fā)揮的權(quán)重值越大，通過降維處理可見，對區(qū)分3種藥材具重要鑒別貢獻的變量PC1載荷51.34%、PC2載荷35.68%，二者之和解釋了大于87%的變量的影響，說明提取PC1、PC2反映所有樣品的87%的。特征向量指標由大至小依次為人參皂苷Re、xys⑨、Rf、Rg1、Rb1、sq⑧、Rc、Rd。見圖3。

2.2 皂苷類成分的含量測定

2.2.1 色譜條件 同2.1.1項下色譜條件，以人參皂苷Rb1計算，理論塔板數(shù)大于6 000，分離度大于1.3。對照品及樣品色譜圖見圖2。

2.2.2 對照品溶液的制備 同2.1.2項。

2.2.3 供試品溶液的制備 同2.1.3項。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rd對照品儲備液各0.1，0.2，0.3，0.5，1.0 mL分別置于同一個25 mL量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得各個對照品系列濃度的混標溶液。分別精密吸取各系列濃度的混標溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定，以各對照品進樣量（ng）為x軸，以峰面積為y軸，進行線性回歸，得各對照品回歸方程及線性范圍。見表2。

2.2.5 檢測限（LOD）與定量限（LOQ） 取2.2.4項下混合對照品溶液繼續(xù)稀釋，當峰面積信噪比為3的進樣量時，即作為檢出限;當信噪比為10時，即作為定量限。見表2。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取2.2.4項中間濃度的混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd峰面積的RSD分別為0.26%，0.25%，0.37%，0.58%，0.29%（n=6），表明儀器的精密度良好。

2.2.7 供試品溶液穩(wěn)定性試驗 見2.1.5。西洋參、人參、三七供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性均良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗 取西洋參樣品（批號：XYS-07）粉末，精密稱定6份，每份0.5 g，按2.1.3項方法分別制備供試品溶液，按2.1.1色譜條件進樣測定，記錄峰面積，外標法計算含量。結(jié)果各份供試品溶液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd含量測定結(jié)果的RSD（n=6）分別為1.09%，1.16%，1.81%，1.20%，1.22%，結(jié)果表明西洋參采用該方法的重復(fù)性良好。同法取人參、三七樣品粉末，分別精密稱定6份，制備成人參供試液、三七供試液，分別精密注入儀器，測定峰面積，外標法計算含量，結(jié)果人參供試品溶液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd含量測定結(jié)果的RSD（n=6）分別為1.75%、1.01%，0.65%，1.10%，1.28%，三七供試品溶液中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd含量測定結(jié)果的RSD（n=6）分別為0.87%、0.99%，1.05%，1.5%，1.2%，結(jié)果表明人參、三七采用該方法的重復(fù)性均良好。

2.2.9 回收率試驗 取已測知含量的西洋參樣品（批號：XYS-07）粉末、人參樣品（批號：RS05-01）粉末、三七樣品（批號：SQ-01）粉末，分別精密稱定0.5 g，各6份，置具塞錐形瓶中，照表3按品種分別精密加入相應(yīng)體積的對照品溶液，按照2.1.3項方法制備供試品溶液，按2.1.1 項色譜條件測定，記錄峰面積，計算回收率。結(jié)果各品種中各皂苷成分的平均加樣回收率（n=6）及RSD（%），結(jié)果表明方法準確性良好。見表3。

2.2.10 樣品含量測定 分別取西洋參、人參、三七樣品粉末，照2.1.3項下方法制備供試液，再按2.1.1項色譜條件測定峰面積，用外標法計算含量，結(jié)果見表4。人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd 4個共有單體成分的含量在三七均為最高;西洋參與人參中人參皂苷Rg1含量基本一致，西洋參中人參皂苷Re、Rb1、Rd含量均顯著高于人參，西洋參中人參皂苷Rd與人參皂苷Rb1的含量分布基本一致;依據(jù)藥典標準規(guī)定：人參中人參皂苷Rg1與Re的總量不得少于0.30%，人參皂苷Rb1不得少于0.20%，西洋參中人參皂苷Rg1、Re與Rb1的總量不得少于2.0%，三七中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1與三七皂苷R1的總量不得少于5.0%，為此計算比較了3種藥材中人參皂苷Rg1與Re的總量（第1組總量）、人參皂苷Rg1、Re與Rb1的總量（第2組總量），以及4種共有成分總含量（第3組總量）3組皂苷的總量，結(jié)果均顯示出三七>西洋參>人參（含量由高至低順序），也可見人參皂苷Rb1、Re的含量對總量的影響最為顯著。見圖4、圖5。3種藥材中特有成分與共有成分總量的比值為：西洋參在0.37%～4.96%范圍內(nèi)，人參在8.64%～14.48%范圍內(nèi)，三七在6.96%～15.51%范圍內(nèi)。

3 討論

3.1 同科同屬藥材采用統(tǒng)一檢測方法利于鑒別及應(yīng)用 藥典中同科同屬的西洋參、人參、三七各自有含量測定方法，從供試品提取、儀器測定方法，到成分及含量限度各不相同，其中雖測定了共有成分，如3種藥材均測定人參皂苷Rg1、Rb1，但因未在同一水平上，無法比較高低。本研究基于同一高效液相色譜（HPLC）方法分析測定人參屬西洋參、人參、三七藥材的共有和特有成分，更有效地比較共性及差異成分，有利于真?zhèn)舞b定及供臨床應(yīng)用參照。建議藥典標準在研究同科同屬藥材品種時，在研究單個品種的同時，結(jié)合其他同屬其他品種綜合研究，制訂一致的評價標準，更便于標準的使用。

3.2 樣品的選擇 西洋參、人參、三七藥材的產(chǎn)地、規(guī)格、品種繁多[19]，特征圖譜應(yīng)建立基于地道產(chǎn)地，符合規(guī)范化生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)藥材，因此本研究以大批量道地產(chǎn)地規(guī)范化種植的藥材為基礎(chǔ)，建立特征圖譜并測定比較成分分布差異，保證數(shù)據(jù)更具代表性。

3.3 提取方法的選擇 西洋參、人參、三七為同屬不同種植物，含有很多相近的成分，現(xiàn)行標準檢測中采用的樣品前處理方法各不相同，如西洋參前處理采用水飽和正丁醇加熱回流，再以50%甲醇定容的方法，人參采用置索氏提取器，以三氯甲烷回流處理后，棄去三氯甲烷液，殘渣再以水飽和的正丁醇浸泡過夜提取，再以甲醇定容的方法提取，三七采用甲醇浸泡過夜，水浴回流提取的方法，為了比較3種藥材中主要皂苷成分的分布狀況，本研究在現(xiàn)行國內(nèi)外標準研究的基礎(chǔ)上，如香港中藥材標準及美國、歐洲藥典標準，分別考察了以50%、80%、100%甲醇為溶劑，浸泡過夜超聲、浸泡2 h后超聲及浸泡2 h后回流的方法，結(jié)果采用樣品粉末加甲醇，浸泡2 h，超聲提取30 min的方法制備樣品溶液，方法學驗證適用于3種藥材的提取，較原方法縮短提取時間，保留了更多成分信息，有利于化學計量統(tǒng)計分析。

3.4 色譜柱的選擇 本研究采用C8色譜柱代替了現(xiàn)行標準采用的C18色譜柱，達到有效分離多個同分異構(gòu)體人參皂苷的目的，如人參皂苷Rb2和人參皂苷Rb3、人參皂苷Rf與擬人參皂苷F11，擬人參皂苷F11為西洋參的一個特征成分，而人參皂苷Rf為人參的一個特征成分，以C18色譜柱，紫外光檢測波長（203 nm）檢測時，擬人參皂苷F11吸收弱，對人參皂苷Rf的檢測影響微弱，但在蒸發(fā)光散射器檢測時，二者因不易分離造成誤判。

3.5 流動相的選擇 目前文獻報道測定3種藥材中人參皂苷類成分的研究較多，已發(fā)現(xiàn)西洋參中含有30余種，人參中有50余種人參皂苷類成分，三七中有20余種，多采用HPLC-UV法，或HPLC-UV-ELSD法，人參皂苷類成分的結(jié)構(gòu)極為類似，實驗分析要求較高，目的均為分離出不同種皂苷，鑒別或測定含量。本研究和色譜條件選擇乙腈-水替代藥典標準中的磷酸溶液[20]，既有利于環(huán)保，也利于蒸發(fā)光散射器的安全使用，經(jīng)過流動相梯度的優(yōu)化，大幅度地縮短了測定時間，由藥典標準的近2 h縮短至1 h以內(nèi)，主要皂苷類成分色譜峰分離良好。

3.6 分析成分的選擇 實驗中還曾分析比較3種藥材中多種皂苷成分的含量，如人參皂苷Rb2、Rb3等，它們雖在3種藥材中均含有，但含量微少（遠低于西洋參中人參皂苷Rg1的含量），對3種藥材的差異比較貢獻微弱，故最終選擇性分析了正文中的特有及共有皂苷類成分，目的是在同一分析條件下比較更清晰地比較3種藥材皂苷類成分的差異性與一致性，為臨床應(yīng)用提供參照依據(jù)。

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（2019-09-17收稿 責任編輯：王明）