• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    成年斑胸草雀HVCX神經(jīng)元電生理特性的側(cè)別和性別差異

    2020-03-23 05:14:44李東風

    李東風, 馮 凱

    (華南師范大學 生命科學學院,廣東 廣州 510631)

    斑胸草雀是研究語言發(fā)聲的模式動物,其高級發(fā)聲中樞HVC(higher vocal center)與人類大腦中的布洛卡區(qū)同源,是鳴禽腦內(nèi)控制鳴曲學習前端腦通路(anterior forebrain pathway, AFP)和控制鳴曲發(fā)聲運動通路(vocal motor pathway, VMP )的共同起點.HVC核團中的HVCX神經(jīng)元和HVCRA神經(jīng)元通過神經(jīng)投射分別控制AFP通路與VMP通路的X區(qū)與弓狀皮質(zhì)櫟核(robust nucleus of the arcopallium, RA)[1].此外,HVC中還含有一類中間神經(jīng)元HVCINT,在HVC核團內(nèi)部分別對上述兩類神經(jīng)元產(chǎn)生抑制作用[2-4].HVCX神經(jīng)元不僅將聽覺信息傳遞給APF通路,而且APF通路的聽覺應答也受HVCX神經(jīng)元的影響.AFP通路主要參與鳴曲的學習過程,VMP通路主要負責鳴曲的發(fā)聲行為.鳴曲的習得可以幫助斑胸草雀求偶、防御以及維護領地等社會性行為.

    成年雄性斑胸草雀擅長鳴唱,而雌性不會鳴唱.在雌性斑胸草雀皮下埋植睪酮后,可顯著增加HVC核團的體積和神經(jīng)元數(shù)量,提示雄激素在鳥類鳴唱系統(tǒng)中發(fā)揮著不可替代的作用[5].此外,本實驗室前期工作表明,損毀左側(cè)HVC核團,對長鳴和鳴曲的頻域和聲強特征都無顯著影響,而損毀右側(cè)HVC后,則會導致鳴曲特征的顯著性改變,包括鳴曲的振幅、平均頻率和峰頻率的顯著性降低等[6].然而雌雄兩性個體的HVCX神經(jīng)元電生理特性差異尚不清晰,且損毀HVC是破壞整個腦區(qū)的功能,并不能反映單個神經(jīng)元電生理特性的側(cè)別差異.因此,基于前期工作的基礎,探究HVC核團神經(jīng)元電生理特性是否具有側(cè)別差異和性別差異為本研究目的.

    1 實驗材料與方法

    1.1 實驗動物

    成年雌雄斑胸草雀(zebra finch,Taeniopygiaguttata)(>90 d).體重9~15 g,購于廣州花地灣花鳥蟲魚市場.

    1.2 試劑藥品

    人工腦脊液ACSF(mmol/L):NaCl 125,NaHCO325,NaH2PO4·H2O 1.27,KCl 2.5,MgSO4·7H2O 1.2,CaCl22.0,Glucose 25;切片液(mmol/L):Sucrose 248,KCl 5,NaHCO328,Glucose 10,MgSO4·7H2O 1.3,NaH2PO4·H2O 1.26;電極內(nèi)液(mmol/L):KMeSO4120,NaCl 5,HEPES 10,EGTA 2,Mg-ATP 2,Na-GTP 0.3,pH 7.2.

    1.3 主要儀器

    膜片鉗放大器,MultiClamp 700B(Axon Instrument, USA);模/數(shù)轉(zhuǎn)換器,DIGIDATA 1440A(Axon Instrument, USA),正置顯微鏡,BX51WI(Olympus, Japan),微電極拉制儀,P-97(Sutter Ins, USA),振動切片機NVSIMI(WPI, USA),分析天平等.

    1.4 腦片制備

    10%(質(zhì)量分數(shù))水合氯醛(0.05 mL/g)進行鳥胸大肌注射,待麻醉后快速斷頭取腦,置于切片液的冰水混合物中冷卻30~60 s,用振動切片機在冰水混合的切片液中將大腦進行矢狀切,切取含有HVC核團的250 μm厚的腦片后,將腦片移至溫度為37 ℃且已通混合氣(95%O2+5%CO2)30 min的孵育槽中孵育1 h,之后將溫度調(diào)整為35 ℃,孵育0.5 h后進行膜片鉗實驗.

    1.5 膜片鉗全細胞記錄

    1.5.1 電極制備及內(nèi)液灌注 用微電極拉制儀將硬質(zhì)玻璃毛坯管(1.5 mm outer diameter, 1.17 mm inner diameter,length 8 cm, Sutter Ins, USA)拉制成微電極.全細胞記錄電極尖端的阻抗為3~6 MΩ.

    1.5.2 HVC神經(jīng)元觀察及記錄 在顯微鏡下觀察置于記錄槽內(nèi)的腦片, 尋找合適的HVC神經(jīng)元.在電極接觸神經(jīng)元后對細胞給予負壓進行封接,形成高達GΩ電阻的細胞吸附式,進一步給予負壓進行破膜,形成全細胞記錄模式.在電流鉗模式下記錄HVC投射神經(jīng)元的誘發(fā)電位及閾值和后超極化幅值等各項電生理指標.

    1.6 數(shù)據(jù)采集及統(tǒng)計分析

    用pClampex 10.3軟件采樣系統(tǒng)獲得信號后,根據(jù)HVC各類神經(jīng)元的發(fā)放特性,將記錄到的神經(jīng)元進行分類.運用Origin 8.0軟件雙尾t-test檢驗方法對記錄到的HVCX神經(jīng)元的電生理特性指標進行統(tǒng)計與分析.統(tǒng)計指標如下:

    (1)靜息電位(resting potential,RP):指細胞膜未受刺激時,存在于細胞膜內(nèi)外兩側(cè)的外正內(nèi)負的電位差.

    (2)動作電位潛伏期(evoked action potential latency):誘發(fā)刺激開始至第一個誘發(fā)動作電位起始所經(jīng)歷的時間.

    (3)后超極化達峰值時間(AHP time to peak):動作電位下降相降至閾值時起算,直至AHP達最低點時所經(jīng)歷的時間.

    (4)動作電位發(fā)放頻率(spike rate):對500 ms、100 pA刺激下誘發(fā)的動作電位發(fā)放個數(shù)進行比較.

    2 實驗結(jié)果

    2.1 HVC神經(jīng)元的分類

    根據(jù)HVC核團中3類神經(jīng)元不同的發(fā)放特性,將記錄到的神經(jīng)元進行分類[7-8].HVCX神經(jīng)元具有內(nèi)向整流特性,在受到超極化電流刺激時具有明顯的膜電位凹陷(sag)現(xiàn)象.除此之外,在受到持續(xù)地去極化刺激時,發(fā)放頻率較高且存在適應性.中間神經(jīng)元HVCINT具有強烈的自發(fā)放活動,受到超極化刺激時,同樣存在sag現(xiàn)象,且比HVCX神經(jīng)元更明顯.此外,在超極化刺激結(jié)束后有一個反彈放電現(xiàn)象,HVCINT接受持續(xù)去極化刺激時會爆發(fā)一種發(fā)放持續(xù)、規(guī)則的緊張型高頻放電模式.HVCRA神經(jīng)元的靜息電位高于另外兩類神經(jīng)元,受到超極化刺激時不存在sag現(xiàn)象,刺激結(jié)束后也沒有反彈放電現(xiàn)象.受到去極化刺激時,只發(fā)放少數(shù)幾個甚至是單個的動作電位(圖1).研究表明,在鳴禽發(fā)聲或聽到多種鳴聲刺激時,HVCX神經(jīng)元都有相同的發(fā)放模式,顯示出了精確的感覺運動一致性[9].故本實驗以HVCX神經(jīng)元為目標神經(jīng)元,探究HVCX神經(jīng)元的側(cè)別差異和性別差異.本實驗通過觀察在電流鉗下給予神經(jīng)元500 ms、100 pA的去極化刺激和500 ms、-200~0 pA、步階+20 pA的超極化刺激下的發(fā)放特性來鑒定神經(jīng)元類型.

    圖1 HVC核團中3類神經(jīng)元發(fā)放特性Fig.1 The firing properties of 3 types of neurons in HVC nucleus

    2.2 雌鳥左右腦HVCX神經(jīng)元電生理特性的側(cè)別比較

    對雌鳥左右腦HVCX神經(jīng)元施加5 ms、300 pA電流刺激,將記錄到的電生理指標進行統(tǒng)計.結(jié)果顯示,雌鳥右腦的靜息電位值((-61.63±3.77)mV,n=5)顯著低于雌鳥左腦((-66.57±9.51)mV,n=14,P<0.05,圖2B).但是,動作電位潛伏期(圖2C)和后超極化達峰值時間(圖2D)無顯著性差異.

    *P<0.05,差異且有顯著性;**P<0.01,差異極顯著圖2 雌鳥左右腦HVCX神經(jīng)元電生理特性比較Fig.2 The lateral comparison of electrophysiological properties in adult female zebra finches

    2.3 雄鳥左右腦HVCX神經(jīng)元電生理特性的側(cè)別比較

    對雄鳥左右腦HVCX神經(jīng)元施加5 ms、300 pA電流刺激,將記錄到的電生理指標進行統(tǒng)計.結(jié)果顯示,右腦HVCX神經(jīng)元的動作電位潛伏期((2.58±0.37) ms,n=5)低于左腦((3.89±0.48) ms,n=12),且差異極顯著(P<0.01,圖3C).右腦的后超極化達峰值時間((27.3±7.11) ms,n=5)低于左腦((41.83±6.90) ms,n=6),且差異極顯著(P<0.01,圖3D).而靜息電位(圖3B)無顯著性差異.說明右腦HVCX神經(jīng)元對傳入信息能夠進行更迅速地整合.HVCX神經(jīng)元發(fā)放頻率通過統(tǒng)計單位時間內(nèi)動作電位發(fā)放個數(shù)來表示.在電流鉗下給予HVCX神經(jīng)元500 ms、100 pA刺激,發(fā)現(xiàn)右腦HVCX神經(jīng)元動作電位發(fā)放頻率較高(圖3F).說明雄鳥右腦HVCX神經(jīng)元的興奮性強于左腦HVCX神經(jīng)元.

    *P<0.05,差異且有顯著性;**P<0.01,差異極顯著圖3 雄鳥左右腦HVCX神經(jīng)元電生理特性比較Fig.3 The lateral comparison of electrophysiological properties in adult male zebra finches

    2.4 雌雄鳥左腦HVCX神經(jīng)元電生理特性的性別差異

    對雌雄鳥左腦HVCX神經(jīng)元施加5 ms、300 pA電流刺激,將記錄到的電生理指標進行統(tǒng)計.結(jié)果顯示,靜息電位(圖4B)、動作電位潛伏期(圖4C)和后超極化達峰值時間(圖4D)均無顯著性差異.

    圖4 雌雄鳥左腦HVCX神經(jīng)元電生理特性的性別差異Fig.4 The sexual dimorphism of electrophysiological properties in left brain of adult male and female zebra finches

    2.5 雌雄鳥右腦HVCX神經(jīng)元電生理特性的側(cè)別比較

    對雌雄鳥右腦HVCX神經(jīng)元施加5 ms、300 pA電流刺激,將記錄到的電生理指標進行統(tǒng)計.雌雄鳥右腦的靜息電位(圖5B)無顯著性差異.雄鳥右腦的動作電位潛伏期((2.58±0.37) ms,n=5)顯著低于雌鳥((3.45±0.56) ms,n=5,P<0.05,圖5C).雄鳥右腦的后超極化達峰值時間((27.3±7.1) ms,n=5)低于雌鳥右腦((50.58±3.53) ms,n=5),且達到極顯著差異(P<0.01,圖5D).在電流鉗下給予HVCX神經(jīng)元500 ms、100 pA刺激,發(fā)現(xiàn)雄鳥右腦HVCX神經(jīng)元動作電位發(fā)放頻率為((11.1±3.18)個,n=10)顯著高于雌鳥右腦((8.71±1.28)個,n=14,P<0.05,圖5F).

    圖5 雌雄鳥右腦HVCX神經(jīng)元電生理特性的性別差異Fig.5 The sexual dimorphism of electrophysiological properties in right brain of adult male and female zebra finches

    3 討 論

    雄激素對鳴曲的產(chǎn)生和學習有著至關重要的作用.去勢不僅影響鳴曲的學習,還會影響鳴唱核團的大小.雌鳥埋植雄激素會激發(fā)鳴曲學習,增加神經(jīng)元的數(shù)量和增大鳴唱核團的體積.雖然雌鳥具有鳴唱核團,但因其體內(nèi)缺乏雄激素,故其鳴曲學習受阻,只能鳴叫,而不能鳴唱.雌鳥未進行系統(tǒng)的鳴曲學習,HVC核團并不能發(fā)出指導鳴曲的指令,盡管雌鳥左右腦的靜息電位有顯著性差異,但其他指標并無差異,且動作電位發(fā)放個數(shù)也無差異,說明左右兩側(cè)神經(jīng)元在接受外界刺激或上游信息輸入時做出的反應是一致的.

    HVC是鳴禽斑胸草雀發(fā)聲控制通路中的最高級中樞.損毀HVC核團不僅會造成音節(jié)丟失,還會導致鳴曲結(jié)構發(fā)生改變,且均是損毀右側(cè)HVC造成的影響大于損毀左側(cè)HVC造成的影響[10].損毀左側(cè)HVC未對鳴聲造成顯著影響,而損毀右側(cè)HVC不僅對長鳴和鳴曲的頻域特征和聲強特征產(chǎn)生顯著影響,還會造成主題曲中音節(jié)的丟失和主題曲相似度的下降.分別損毀雄鳥左右側(cè)HVC,鳴曲出現(xiàn)去穩(wěn)定化和音節(jié)丟失,主題曲持續(xù)時間丟失和音節(jié)平均間隔時間均顯著增加.但是,損毀左側(cè)HVC對鳴曲的頻域聲強特征無顯著性影響,說明雙側(cè)HVC共同負責鳴曲的時域特征.此外,右側(cè)HVC還負責鳴曲的聲強特征[6].雄鳥右腦爆發(fā)的動作電位延時要低于左腦.動作電位的爆發(fā)與鈉離子通道的開放有關,當足夠多的鈉離子通道打開后,局部電位就會增加,達到閾值進而爆發(fā)動作電位.而右腦HVCX神經(jīng)元的動作電位延時短,說明在相同時間內(nèi)鈉離子通道開放數(shù)量更多或者相同數(shù)量的鈉離子通道開放更為迅速,使得其在接受刺激后更易爆發(fā)動作電位.雄鳥右腦HVCX神經(jīng)元的后超極化達到峰值時間比左腦低.該指標的一個重要作用就是與動作電位的發(fā)放頻率有關.左腦后超極化達到峰值時間長,限制了其動作電位的發(fā)放.說明雄鳥右側(cè)HVCX神經(jīng)元興奮性高于左側(cè),提示左右腦HVCX神經(jīng)元在鳴曲學習中發(fā)揮不同的功能,右側(cè)HVCX神經(jīng)元的興奮性可能與聲強特征的右側(cè)優(yōu)勢有關.

    雌雄斑胸草雀均會長鳴,但是雌鳥長鳴基頻較低,諧波平坦,而雄鳥長鳴音節(jié)時程比較短且穩(wěn)定,基頻較高,在音節(jié)中段及尾段出現(xiàn)向下的頻率調(diào)制.損毀雄鳥左側(cè)HVC前后的長鳴不存在明顯的改變,而損毀右側(cè)HVC后,長鳴已不具備習得性長鳴的特征,與雌性長鳴和亞鳴期的長鳴類似.雌雄鳥左腦HVCX神經(jīng)元電生理特性并無顯著性差異,雄鳥右腦HVCX神經(jīng)元的興奮性卻高于雄鳥左腦,提示雄鳥右側(cè)HVC可能是習得性長鳴與雌性長鳴和亞鳴期長鳴不同的源頭.

    腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)是一種具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的蛋白質(zhì).雖然雌雄兩性個體HVC核團中都有腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體TrkB表達,但BDNF只存在成年雄性HVC核團,雌性HVC中并未檢測到該因子的存在[11].雌鳥中埋植睪酮可以增加腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子含量,BDNF通過提高神經(jīng)元的存活率增加HVC核團神經(jīng)元數(shù)量和核團體積.雌雄鳥性別差異與體內(nèi)睪酮含量有密不可分的聯(lián)系,雌鳥埋植睪酮不僅可提高神經(jīng)元的存活率,而且還會增加神經(jīng)元胞體之間的間隙連接,提示雄鳥大腦中擁有更復雜的神經(jīng)網(wǎng)絡,雌雄鳥的電生理特性的差異可能與此有關.提示雄鳥右側(cè)HVCX神經(jīng)元比雌鳥具有更高的興奮性,利于信息的接收及其向下游核團的傳遞,有助于鳴曲的學習.

    本實驗對雌雄兩性的側(cè)別差異和性別差異進行了研究.雄鳥個體右側(cè)大腦HVCX神經(jīng)元興奮性強于左腦,即存在右側(cè)優(yōu)勢,提示雙側(cè)HVC核團除具備共同的鳴曲學習功能外,右側(cè)HVC在鳴曲學習中還發(fā)揮其他的作用.雌雄右腦存在性別差異且雄鳥HVCX神經(jīng)元興奮性強于雌鳥,雄鳥HVCX神經(jīng)元能更精準地接收聽覺信息以及能將聽覺信息有效地進一步傳輸給下游核團X區(qū),增強AFP通路信息傳遞能力,從而指導鳴曲的學習.

    亚洲片人在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲成人久久爱视频| 性色av乱码一区二区三区2| 丁香欧美五月| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲,欧美精品.| 我要搜黄色片| xxxwww97欧美| 真人做人爱边吃奶动态| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产乱人伦免费视频| 精品久久久久久,| 少妇的逼好多水| 日韩欧美精品免费久久 | 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美日韩精品网址| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 香蕉久久夜色| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 99精品久久久久人妻精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 成年版毛片免费区| 久久久久久久久大av| 91久久精品国产一区二区成人 | 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲熟妇熟女久久| 国产成人aa在线观看| 亚洲在线自拍视频| 我的老师免费观看完整版| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 少妇丰满av| 性色av乱码一区二区三区2| 首页视频小说图片口味搜索| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 好男人电影高清在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 十八禁人妻一区二区| 内地一区二区视频在线| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久久久久久黄片| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产成人欧美在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品无人区乱码1区二区| 美女被艹到高潮喷水动态| ponron亚洲| 宅男免费午夜| 欧美成人一区二区免费高清观看| 日本一本二区三区精品| 日韩欧美 国产精品| 天堂动漫精品| 青草久久国产| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 一进一出抽搐gif免费好疼| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲成人久久爱视频| 中文字幕高清在线视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 婷婷丁香在线五月| 日本成人三级电影网站| 亚洲熟妇熟女久久| 国产免费一级a男人的天堂| 午夜免费成人在线视频| 日韩av在线大香蕉| 一本精品99久久精品77| 在线天堂最新版资源| 亚洲自拍偷在线| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久国产成人精品二区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲自拍偷在线| а√天堂www在线а√下载| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美乱色亚洲激情| 精品国产三级普通话版| 日本 欧美在线| 亚洲不卡免费看| 黄色成人免费大全| 五月玫瑰六月丁香| 51国产日韩欧美| 在线国产一区二区在线| av国产免费在线观看| 成人午夜高清在线视频| 在线播放国产精品三级| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品三级大全| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲片人在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产亚洲精品一区二区www| 色在线成人网| 日韩欧美精品免费久久 | 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩欧美三级三区| aaaaa片日本免费| 无限看片的www在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美zozozo另类| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产单亲对白刺激| 日本熟妇午夜| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美黑人巨大hd| 观看免费一级毛片| 国产男靠女视频免费网站| 欧美一区二区亚洲| svipshipincom国产片| 在线a可以看的网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产欧美日韩一区二区精品| 搞女人的毛片| 男女床上黄色一级片免费看| 日本黄色片子视频| 欧美日韩精品网址| 亚洲精品色激情综合| 99精品久久久久人妻精品| 久久精品国产综合久久久| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国模一区二区三区四区视频| av专区在线播放| 精品电影一区二区在线| 嫩草影院精品99| 免费看日本二区| 国产乱人伦免费视频| 五月玫瑰六月丁香| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲电影在线观看av| 久久精品影院6| 午夜激情欧美在线| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品,欧美在线| 亚洲成av人片免费观看| 国产午夜精品论理片| www日本黄色视频网| 天天躁日日操中文字幕| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久久精品欧美日韩精品| 成年女人毛片免费观看观看9| av天堂中文字幕网| 少妇的逼好多水| 美女高潮的动态| 国产精品乱码一区二三区的特点| www.色视频.com| 成人av在线播放网站| 欧美日本视频| 宅男免费午夜| 亚洲精品456在线播放app | 99久久精品一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品久久久久久久久免 | 午夜免费成人在线视频| 男人的好看免费观看在线视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美+亚洲+日韩+国产| 两个人视频免费观看高清| 在线播放国产精品三级| 午夜免费成人在线视频| 一区二区三区免费毛片| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 成人av在线播放网站| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久久成人免费电影| 久久久国产成人免费| 又黄又粗又硬又大视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 在线观看免费午夜福利视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 色吧在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 黄色日韩在线| 黄色视频,在线免费观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 成年女人看的毛片在线观看| 69人妻影院| 两个人看的免费小视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 三级毛片av免费| 国产精品亚洲美女久久久| 国产免费av片在线观看野外av| 精品欧美国产一区二区三| 一区二区三区国产精品乱码| 岛国视频午夜一区免费看| av片东京热男人的天堂| 亚洲一区二区三区色噜噜| 99国产综合亚洲精品| www.熟女人妻精品国产| 午夜福利18| 桃红色精品国产亚洲av| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲无线在线观看| 真实男女啪啪啪动态图| 少妇丰满av| 欧美日韩一级在线毛片| 精品不卡国产一区二区三区| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产成人a区在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 无人区码免费观看不卡| 亚洲人与动物交配视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 天堂√8在线中文| 国产69精品久久久久777片| 一区二区三区激情视频| 亚洲黑人精品在线| 看片在线看免费视频| 日本 av在线| 少妇人妻精品综合一区二区 | 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 99精品在免费线老司机午夜| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一进一出抽搐动态| 婷婷精品国产亚洲av| 色综合站精品国产| 国产成人a区在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜免费激情av| 99久久99久久久精品蜜桃| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| av天堂在线播放| 亚洲精华国产精华精| 国产探花在线观看一区二区| 久久中文看片网| 国产成人欧美在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 最后的刺客免费高清国语| 在线观看舔阴道视频| 美女黄网站色视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 3wmmmm亚洲av在线观看| 成年免费大片在线观看| 97碰自拍视频| 久99久视频精品免费| h日本视频在线播放| 嫩草影院精品99| 亚洲在线观看片| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 两人在一起打扑克的视频| 国产极品精品免费视频能看的| 日本a在线网址| 窝窝影院91人妻| 香蕉av资源在线| 国产成人欧美在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 操出白浆在线播放| 免费av不卡在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜精品一区二区三区免费看| 一区福利在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 精品一区二区三区人妻视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 91在线观看av| 国产一区二区在线av高清观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲真实伦在线观看| 欧美色视频一区免费| 国产乱人伦免费视频| 听说在线观看完整版免费高清| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产免费av片在线观看野外av| 少妇的丰满在线观看| 91久久精品电影网| 久久午夜亚洲精品久久| 波野结衣二区三区在线 | 国产激情偷乱视频一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 内地一区二区视频在线| 欧美bdsm另类| 老司机午夜福利在线观看视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 免费看十八禁软件| 一个人看的www免费观看视频| 极品教师在线免费播放| 少妇的逼水好多| 亚洲精品色激情综合| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产高清激情床上av| www国产在线视频色| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产真实乱freesex| 国产精品久久久久久久电影 | 午夜福利高清视频| 99在线视频只有这里精品首页| 精品不卡国产一区二区三区| 中国美女看黄片| 伊人久久精品亚洲午夜| 香蕉丝袜av| 久久久久久久久中文| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久人妻av系列| 草草在线视频免费看| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品影院久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 精品电影一区二区在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美最新免费一区二区三区 | 免费观看的影片在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲av熟女| 特级一级黄色大片| 超碰av人人做人人爽久久 | 深夜精品福利| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产精品久久久人人做人人爽| 特大巨黑吊av在线直播| 在线观看一区二区三区| 内地一区二区视频在线| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 午夜福利成人在线免费观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| svipshipincom国产片| 国产不卡一卡二| 中出人妻视频一区二区| av天堂在线播放| 无人区码免费观看不卡| 久久久久久九九精品二区国产| 午夜福利视频1000在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 精品久久久久久久末码| 久久国产精品影院| 桃红色精品国产亚洲av| 久久香蕉精品热| 久久久久国内视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 一本久久中文字幕| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲最大成人手机在线| 成人av一区二区三区在线看| 国产真实乱freesex| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久午夜亚洲精品久久| 久久久久久人人人人人| 午夜激情福利司机影院| 欧美日本亚洲视频在线播放| 免费看日本二区| 在线视频色国产色| 婷婷丁香在线五月| 国产高清激情床上av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 热99在线观看视频| 中文在线观看免费www的网站| 草草在线视频免费看| 99久久综合精品五月天人人| 国产主播在线观看一区二区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | a级一级毛片免费在线观看| 有码 亚洲区| 国产激情偷乱视频一区二区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 免费观看精品视频网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国内精品久久久久精免费| 国产成年人精品一区二区| 久久人妻av系列| 亚洲av美国av| 99久久精品一区二区三区| 成年女人永久免费观看视频| 中文资源天堂在线| 男女之事视频高清在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精华一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费| 51国产日韩欧美| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 日本在线视频免费播放| 高清日韩中文字幕在线| 国产色婷婷99| 露出奶头的视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 俄罗斯特黄特色一大片| 又黄又粗又硬又大视频| 母亲3免费完整高清在线观看| av天堂中文字幕网| 久久久色成人| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 成人鲁丝片一二三区免费| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品,欧美在线| 天堂网av新在线| 国产一区二区在线av高清观看| 国产激情欧美一区二区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲无线观看免费| 免费搜索国产男女视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产淫片久久久久久久久 | 一a级毛片在线观看| svipshipincom国产片| 美女黄网站色视频| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩国内少妇激情av| 色播亚洲综合网| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久色成人| av中文乱码字幕在线| 中出人妻视频一区二区| 免费av毛片视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 一二三四社区在线视频社区8| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美性感艳星| 国产毛片a区久久久久| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美日韩综合久久久久久 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产97色在线日韩免费| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 天天添夜夜摸| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美性猛交黑人性爽| 国产综合懂色| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 国产精品1区2区在线观看.| 国产成人av激情在线播放| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 成人精品一区二区免费| 亚洲av熟女| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品熟女少妇八av免费久了| 在线视频色国产色| 日韩欧美国产在线观看| 有码 亚洲区| 亚洲无线观看免费| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲成人久久爱视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲精品色激情综合| 中文字幕高清在线视频| 丝袜美腿在线中文| 我的老师免费观看完整版| aaaaa片日本免费| 少妇丰满av| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 一个人看的www免费观看视频| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 伊人久久精品亚洲午夜| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲 国产 在线| 精品日产1卡2卡| 99久久精品热视频| 亚洲人成网站高清观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 日本成人三级电影网站| 国产麻豆成人av免费视频| av国产免费在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲专区国产一区二区| 国产成人aa在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| xxx96com| 欧美一区二区亚洲| 99视频精品全部免费 在线| 黄色片一级片一级黄色片| eeuss影院久久| 国产色爽女视频免费观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精华一区二区三区| 国产野战对白在线观看| 制服人妻中文乱码| 嫩草影院精品99| 欧美最新免费一区二区三区 | 校园春色视频在线观看| 少妇的逼好多水| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久伊人香网站| 国产精品三级大全| 99久久九九国产精品国产免费| 1024手机看黄色片| 在线视频色国产色| 淫妇啪啪啪对白视频| 免费观看人在逋| 成人特级黄色片久久久久久久| aaaaa片日本免费| www.色视频.com| 看黄色毛片网站| 一个人观看的视频www高清免费观看| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧美激情综合另类| 黄色女人牲交| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲精华国产精华精| 91字幕亚洲| 亚洲av不卡在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 在线十欧美十亚洲十日本专区| tocl精华| eeuss影院久久| 啦啦啦韩国在线观看视频| 两个人视频免费观看高清| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99久久综合精品五月天人人| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 最新在线观看一区二区三区| 国产91精品成人一区二区三区| 色综合婷婷激情| 一个人观看的视频www高清免费观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 九色成人免费人妻av| 婷婷亚洲欧美| 国产麻豆成人av免费视频| 国产一区在线观看成人免费| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲黑人精品在线| 男人舔奶头视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 九九在线视频观看精品| 两人在一起打扑克的视频| 97超视频在线观看视频| 99国产精品一区二区三区| 免费观看的影片在线观看| 在线视频色国产色| 欧美最黄视频在线播放免费| 夜夜爽天天搞| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 超碰av人人做人人爽久久 | 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 午夜福利成人在线免费观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久国产精品影院| 欧美黄色淫秽网站| 久久精品影院6| 成年版毛片免费区| 免费在线观看成人毛片| 欧美黄色片欧美黄色片| www日本在线高清视频| 在线观看日韩欧美| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产伦在线观看视频一区| 久久性视频一级片| 一级a爱片免费观看的视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 一区二区三区免费毛片| 亚洲自拍偷在线| 亚洲在线观看片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲在线观看片| 男女视频在线观看网站免费| 免费看a级黄色片| 国产色婷婷99| 欧美黑人巨大hd| 欧美日本亚洲视频在线播放| 免费观看精品视频网站| 中亚洲国语对白在线视频| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲av成人精品一区久久| 91久久精品国产一区二区成人 | 麻豆成人午夜福利视频| 久久99热这里只有精品18| 久久精品国产综合久久久| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品av视频在线免费观看| 91九色精品人成在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美+日韩+精品| 女警被强在线播放| 他把我摸到了高潮在线观看| 99国产精品一区二区三区| 热99re8久久精品国产| 久久精品国产清高在天天线| 国产探花极品一区二区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 88av欧美| 99久久九九国产精品国产免费| 国产中年淑女户外野战色| 99热只有精品国产| 国产伦在线观看视频一区|