艾迪注射液對(duì)兔舌VX-2鱗癌模型化療外周血中Th1/Th2平衡的影響

王明雪， 殷杰， 張霓霓， 易杰， 黃桂林

（遵義醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，貴州遵義 563000）

世界范圍內(nèi)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（以下簡(jiǎn)稱鱗癌）每年約有50萬(wàn)新發(fā)病例，口腔鱗癌是頭頸部區(qū)域最常見(jiàn)的腫瘤，占口腔腫瘤的90%，而其中舌部鱗癌新發(fā)病例為16萬(wàn)[1]。由于口腔癌發(fā)生部位的特殊性，因此治療此類癌癥要注意2個(gè)要素，即完整切除腫瘤和對(duì)功能的保護(hù)?？谇话┮话悴捎镁C合性的治療，除了外科手術(shù)治療，還采用放療、化療、免疫治療等。艾迪注射液以斑蝥、人參、黃芪、刺五加為主要成分，已經(jīng)是一種臨床上較為常用的治療腫瘤性疾病的中藥制劑，具有扶正祛邪、免疫調(diào)節(jié)以及抗腫瘤的作用[2-4]。本研究擬進(jìn)一步觀察艾迪注射液?jiǎn)为?dú)使用或聯(lián)合化療藥物對(duì)兔舌VX-2鱗癌腫瘤模型外周血中免疫因子的影響，從而為臨床輔助治療舌鱗癌提供理論依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物兔VX-2 腫瘤細(xì)胞株購(gòu)于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心細(xì)胞庫(kù)。新西蘭大白兔84 只，2～3 月齡，體質(zhì)量1.5～2.0 kg，雌雄不限，購(gòu)于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（粵）2014-0023。均飼養(yǎng)于遵義醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)環(huán)境：兔舍溫度為（20 ± 3）℃，相對(duì)濕度為（50 ±10）%，適量光照，青綠色顆粒飼料、清潔飲用水。新西蘭大白兔在上述環(huán)境條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，再進(jìn)行建模及給藥。本實(shí)驗(yàn)所有對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的操作均通過(guò)遵義醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)倫理審查同意后實(shí)施。

1.2藥物艾迪注射液，10 mL/支，貴州益佰制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z52020236；紫杉醇注射液（Paclitaxel Injection），30 mg/支，哈藥集團(tuán)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20059962。

1.3試劑與儀器兔干擾素γ（IFN-γ）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）試劑盒、兔腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA 試劑盒購(gòu)于北京誠(chéng)林生物科技有限公司；兔白細(xì)胞介素（IL）-2 ELISA 試劑盒、兔IL-6 ELISA試劑盒、兔IL-10 ELISA試劑盒購(gòu)于康寶生物公司。酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）。

1.4兔舌VX-2鱗癌模型的建立對(duì)60 只新西蘭大白兔行瘤粒植入術(shù)，30 mg/kg戊巴比妥鈉經(jīng)兔耳緣靜脈注射，約10 min 后麻醉生效，兔結(jié)膜反射消失。將兔子固定在手術(shù)臺(tái)上，用繃帶牽拉兔子的上下前牙，使兔子呈大開(kāi)口狀態(tài)，完全暴露口腔。在無(wú)菌條件下，用無(wú)齒鑷將兔舌牽拉出口外傾向一側(cè)，在兔右側(cè)舌緣的前中1/3交界處，沿舌體長(zhǎng)軸方向做長(zhǎng)3～4 mm 的切口，深約5 mm，切開(kāi)黏膜及舌肌，用眼科鑷將瘤粒4～5 枚放入切口內(nèi)，植入舌肌中。嚴(yán)密縫合切口（從腫瘤組織切取出到植入瘤粒完成，時(shí)間控制在2 h 內(nèi)）。實(shí)驗(yàn)兔術(shù)后連續(xù)3 d給予青霉素鈉（3萬(wàn)U·kg-1·d-1）肌肉注射，預(yù)防創(chuàng)口感染。各兔單獨(dú)籠養(yǎng)，正常清潔飼養(yǎng)。

1.5分組與給藥在建模成功的56 只荷瘤兔中，選取舌部腫瘤直徑為1.0 cm 左右的荷瘤兔48 只，隨機(jī)分成4 組，每組12 只。再選擇24 只健康兔，隨機(jī)分成2 組，每組12 只。綜上，本實(shí)驗(yàn)共分6組：A、B、C、D、E、F 組（A、B 組為健康兔；C、D、E、F 組為荷瘤兔）。采用經(jīng)兔耳緣靜脈注射的給藥方式。具體分組及用藥方式：A 組（健康兔+ 生理鹽水），經(jīng)兔耳緣靜脈推注生理鹽水20 mL，連續(xù)2 周；B 組（健康兔+ 艾迪注射液），經(jīng)兔耳緣靜脈推注艾迪注射液（生理鹽水稀釋到20 mL），連續(xù)2周；C組（荷瘤兔+生理鹽水），經(jīng)兔耳緣靜脈推注生理鹽水20 mL，連續(xù)2 周；D 組（荷瘤兔+紫杉醇注射液），給藥第1天給予荷瘤兔紫杉醇注射液（將紫杉醇注射液用生理鹽水稀釋到20 mL 后，用微量注射泵經(jīng)兔耳緣靜脈輸液給藥，6.67 mL/h），第1周剩余6 d及第2周均經(jīng)兔耳緣靜脈推注生理鹽水20 mL；E 組（荷瘤兔+ 艾迪注射液），經(jīng)兔耳緣靜脈推注艾迪注射液（生理鹽水稀釋到20 mL），連續(xù)2周；F組（荷瘤兔+紫杉醇注射液+艾迪注射液），給藥第1 天給予紫杉醇注射液（將紫杉醇注射液用生理鹽水稀釋到20 mL 后，用微量注射泵經(jīng)兔耳緣靜脈輸液給藥，6.67 mL/h），第1 周剩余6 d 及第2 周均經(jīng)兔耳緣靜脈推注艾迪注射液（將生理鹽水稀釋到20 mL）。

1.6藥物劑量的折算及實(shí)驗(yàn)兔給藥劑量本實(shí)驗(yàn)設(shè)定人的體質(zhì)量為60 kg，實(shí)驗(yàn)兔的體質(zhì)量為1.5 ～2.0 kg，平均體質(zhì)量為1.8 kg，實(shí)驗(yàn)兔體表面積的計(jì) 算 公 式[5]：A=K×。A：兔體表面積（cm2）；K= 10.1，為常數(shù)；W：兔體質(zhì)量（g）。即體質(zhì)量1.8 kg 兔的體表面積為0.149 5 m2。中國(guó)人體表面積的計(jì)算用Stevenson 公式[6]：A1=0.006 1×H+ 0.012 8 ×W1- 0.152 9。A1：體表面積（cm2）；H：身高（cm）；W1：體質(zhì)量（kg）。即人的體表面積為1.621 6 m2。實(shí)驗(yàn)兔給藥劑量的折算公式[5，7]：D＝D1×A/W。D：實(shí)驗(yàn)兔的給藥劑量（mg/kg）；D1：人的給藥劑量（mg/kg）。根據(jù)人化療藥物的使用劑量折算實(shí)驗(yàn)兔藥物的使用劑量（詳見(jiàn)表1）。課題小組前期的實(shí)驗(yàn)[8]發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)動(dòng)脈灌注化療給予荷瘤兔全劑量的紫杉醇注射液時(shí)，荷瘤兔的死亡率相對(duì)較高，因此，為了避免實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的動(dòng)物死亡，使荷瘤兔能夠耐受紫杉醇注射液的化療，本次實(shí)驗(yàn)給予紫杉醇注射液的安全劑量是荷瘤兔最大劑量的一半，即將紫杉醇注射液用生理鹽水稀釋到20 mL，用微量注射泵經(jīng)荷瘤兔耳緣靜脈給藥，速度為6.67 mL/h。艾迪注射液人的用法為每次50～100 mL，每日1次，用生理鹽水稀釋到500 mL后靜脈滴注。擬定人的體質(zhì)量為60 kg，換算為人給藥量為0.83～1.66 mL/kg，折算后實(shí)驗(yàn)兔的給藥量為2.55～5.10 mL/kg。本實(shí)驗(yàn)是按照艾迪注射液最大劑量5.10 mL/kg 給藥，用生理鹽水稀釋到20 mL 后經(jīng)兔耳緣靜脈推注，每日1 次。紫杉醇注射液使用前30 min 用地塞米松磷酸鈉注射液肌肉注射，預(yù)防紫杉醇注射液過(guò)敏。

表1 藥物使用劑量表Table 1 Dosage given comparison

1. 7 ELISA檢測(cè)分別在給藥前1 d，給藥第7、14 天，采用ELISA 法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)兔外周血中IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α 水平的變化。具體步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.8脾臟指數(shù)在給藥第7、14 天，各組分別處死6只實(shí)驗(yàn)兔，先稱量實(shí)驗(yàn)兔的體質(zhì)量，并按標(biāo)號(hào)記錄。將實(shí)驗(yàn)兔麻醉后，對(duì)兔子進(jìn)行解剖。先給實(shí)驗(yàn)兔腹部備皮，予以碘伏消毒鋪巾，在實(shí)驗(yàn)兔腹部行縱向切口，打開(kāi)腹腔，解剖分離，取出其脾臟，做好標(biāo)記，統(tǒng)一置于冰盒中。待送回實(shí)驗(yàn)室后，脾臟置于濾紙上1 h，再稱量脾臟的質(zhì)量（m/mg）、兔子的體質(zhì)量（m/g），計(jì)算脾臟指數(shù)（splenic index，SI）。公式：脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量×10。

1. 9統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較采用單因素ANOVA檢驗(yàn)。當(dāng)方差齊時(shí)各組間數(shù)據(jù)的兩兩比較采用Tukey檢驗(yàn)，當(dāng)方差不齊時(shí)各組間數(shù)據(jù)的兩兩比較采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兔舌VX-2鱗癌模型建立情況建模成功后，可見(jiàn)模型兔右側(cè)舌緣隆起，表面黏膜較完整，未見(jiàn)明顯破潰，呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，捫及包塊質(zhì)韌，活動(dòng)度較差，與周圍組織邊界不清，與舌肌輕度粘連，見(jiàn)圖1-A。鏡下可見(jiàn)舌部瘤體組織形態(tài)結(jié)構(gòu)混亂，見(jiàn)有絲分裂象，未見(jiàn)病理性核分裂象，細(xì)胞異型性明顯，未見(jiàn)角化，如圖1-B所示。

2.2各組荷瘤兔舌部瘤體變化隨著給藥時(shí)間的增加，F(xiàn) 組舌部瘤體明顯縮小，破潰皮損部分愈合，荷瘤兔的精神及飲食狀態(tài)較好；E組荷瘤兔的狀態(tài)較D 組荷瘤兔好，但舌瘤體的大小改變不明顯；D組舌瘤體縮小，破潰明顯，荷瘤兔的精神及飲食較差；C組荷瘤兔精神及飲食較差，舌瘤體組織不僅無(wú)明顯縮小，且有增大趨勢(shì)，破潰糜爛明顯。

圖1 兔舌VX-2鱗癌模型建立情況Figure 1 Establishment of rabbit tongue squamous VX-2 cell carcinoma

2.3各組兔外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10的水平表2 ～6 結(jié)果顯示：給藥前1 d 各組荷瘤兔之間及健康兔與荷瘤兔之間TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10 水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明給藥前各組之間的免疫因子水平無(wú)明顯差異。

治療第7、14 天，作為對(duì)照的A、B、C 組間TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10 水平比較，差異亦均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明VX-2 腫瘤細(xì)胞移植在實(shí)驗(yàn)成瘤的28 d 內(nèi)尚不足以使兔體內(nèi)免疫因子水平發(fā)生改變。

表2 各組兔外周血TNF-α水平比較Table 2 Comparison of TNF-α level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

表2 各組兔外周血TNF-α水平比較Table 2 Comparison of TNF-α level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

①P ＜0.05，與C 組比較；②P ＜0.05，與D 組比較；③P ＜0.05，與E組比較

組別A組（健康兔+生理鹽水）B組（健康兔+艾迪）C組（荷瘤兔+生理鹽水）D組（荷瘤兔+紫杉醇）E組（荷瘤兔+艾迪）F組（荷瘤兔+聯(lián)合用藥）給藥前1 d（N=12只）90.22±18.84 82.93±20.02 77.97±28.39 77.75±16.12 71.87±21.74 77.73±16.87給藥第7天（n=6只）75.63±17.12 89.01±13.69 64.63±11.19 77.57±7.22 115.73±35.40①134.21±31.77①②給藥第14天（n=6只）75.40±14.99 97.70±11.56 75.19±21.14 76.06±6.12 197.73±40.81①②306.36±27.20①②③

2. 3. 1 Th1 型免疫因子 治療第7 天，E、F 組TNF-α 水平高于C 組（P＜0.05），且F 組TNF-α 水平明顯高于D組（P＜0.05）。治療第14天，E、F組TNF-α 水平均高于C、D 組（P＜0.05），且F 組TNF-α 水平顯著高于E 組（P＜0.05）。而D 組治療第7、14天TNF-α水平與C組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 各組外周血IFN-γ水平比較Table 3 Comparison of IFN-γ level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

表3 各組外周血IFN-γ水平比較Table 3 Comparison of IFN-γ level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

①P ＜0.05，與C 組比較；②P ＜0.05，與D 組比較；③P ＜0.05，與E組比較

組別/時(shí)間A組（健康兔+生理鹽水）B組（健康兔+艾迪）C組（荷瘤兔+生理鹽水）D組（荷瘤兔+紫杉醇）E組（荷瘤兔+艾迪）F組（荷瘤兔+聯(lián)合用藥）給藥前1天（N=12只）85.93±12.71 87.54±15.15 73.80±28.91 66.25±10.84 66.52±17.17 70.09±12.61給藥第7天（n=6只）85.34±13.05 105.96±16.07 61.59±15.93 66.33±9.15 89.58±17.00①154.29±29.38①②給藥第14天（n=6只）83.11±5.65 101.20±8.87 73.54±32.60 65.01±6.34 166.48±24.84①②277.86±31.78①②③

表4 各組外周血IL-2水平比較Table 4 Comparison of IL-2 level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

表4 各組外周血IL-2水平比較Table 4 Comparison of IL-2 level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

①P ＜0.05，與C 組比較；②P ＜0.05，與D 組比較；③P ＜0.05，與E組比較

組別/時(shí)間A組（健康兔+生理鹽水）B組（健康兔+艾迪）C組（荷瘤兔+生理鹽水）D組（荷瘤兔+紫杉醇）E組（荷瘤兔+艾迪）F組（荷瘤兔+聯(lián)合用藥）給藥前1天（N=12只）10.39±2.74 10.62±2.92 12.52±4.07 8.33±2.07 8.06±3.90 11.19±3.82給藥第7天（n=6只）10.35±2.04 13.37±3.53 10.11±3.82 8.74±2.17 15.30±3.16②20.47±4.89①②給藥第14天（n=6只）9.48±1.25 14.53±4.30 8.14±2.43 8.99±2.69 17.90±3.93①33.18±4.56①②③

表5 各組外周血IL-6水平比較Table 5 Comparison of IL-6 level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

表5 各組外周血IL-6水平比較Table 5 Comparison of IL-6 level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

①P ＜0.05，與C組比較；②P ＜0.05，與D組比較

組別/時(shí)間A組（健康兔+生理鹽水）B組（健康兔+艾迪）C組（荷瘤兔+生理鹽水）D組（荷瘤兔+紫杉醇）E組（荷瘤兔+艾迪）F組（荷瘤兔+聯(lián)合用藥）給藥前1天（N=12只）9.14±1.70 10.07±1.92 8.29±2.03 10.02±1.93 9.95±2.10 10.52±2.34給藥第7天（n=6只）8.50±1.75 7.58±2.26 8.22±2.50 7.75±2.37 3.29±1.68①②2.90±2.09①②給藥第14天（n=6只）8.82±1.60 8.67±2.29 10.19±2.50 8.08±1.76 2.01±0.59①1.34±1.05①②

表6 各組外周血IL-10水平Table 6 Comparison of IL-10 level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

表6 各組外周血IL-10水平Table 6 Comparison of IL-10 level in peripheral blood of various groups [±s，ρ/（ng·L-1）]

①P ＜0.05，與C組比較；②P ＜0.05，與D組比較

組別/時(shí)間A組（健康兔+生理鹽水）B組（健康兔+艾迪）C組（荷瘤兔+生理鹽水）D組（荷瘤兔+紫杉醇）E組（荷瘤兔+艾迪）F組（荷瘤兔+聯(lián)合用藥）給藥前1 d（N=12只）12.03±3.07 12.26±3.48 11.81±5.48 13.27±2.70 12.25±3.69 13.74±2.73給藥第7天（n=6只）12.46±2.78 12.88±2.58 13.21±5.69 8.35±1.34 4.77±3.38①3.31±1.01①②給藥第14天（n=6只）11.34±2.93 12.35±4.13 18.50±4.17 9.77±1.80 1.90±0.91①②1.48±0.94①②

治療第7、14天，各組間IFN-γ水平比較結(jié)果同TNF-α。

而在IL-2水平上，治療第7天，F(xiàn)組IL-2水平高于C 組（P＜0.05），E、F 組IL-2 水平高于D 組（P＜0.05）；治療第14天，E、F組IL-2水平高于C組，且F 組IL-2 水平顯著高于D、E 組（P＜0.05）。而D組治療第7、14天IL-2水平與C組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

結(jié)果表明，在荷瘤兔治療方式對(duì)比中，使用艾迪注射液后Th1型免疫因子整體呈上升趨勢(shì)，且艾迪注射液聯(lián)合化療后其上升趨勢(shì)更加明顯。

2.3.2 Th2型免疫因子 治療第7天，E、F組IL-6水平低于C、D組（P＜0.05）。治療第14天，E、F組IL-6 水平低于C 組（P＜0.05），F(xiàn) 組IL-6 水平低于D組（P＜0.05）。且治療第7、14 天，E 組、F 組IL-6 水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而D組治療第7、14天IL-6水平與C組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

治療第7天，E、F組IL-10水平低于C組（P＜0.05），F(xiàn)組IL-10水平低于D組（P＜0.05）。治療第14 天， E、F 組IL-10 水平均低于C、D 組（P＜0.05）。且治療第7、14 天，E 組、F 組IL-10 水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而D 組治療第7、14 天IL-10 水平與C 組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

結(jié)果表明，艾迪注射液?jiǎn)为?dú)或與化療藥物聯(lián)合使用可下調(diào)舌鱗癌兔Th2 型免疫因子IL-6、IL-10。

2. 4各組脾臟指數(shù)比較給藥第7、14 天，C 組脾臟指數(shù)與A、B 組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），E、F 組脾臟指數(shù)均高于C、D 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且E、F組脾臟指數(shù)之間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表7。表明艾迪注射液?jiǎn)为?dú)或與化療藥物的聯(lián)合使用可提高舌鱗癌兔的免疫功能，優(yōu)于單純紫杉醇化療。

表7 各組脾臟指數(shù)比較Table 7 Comparison of spleen index of various groups （±s）

表7 各組脾臟指數(shù)比較Table 7 Comparison of spleen index of various groups （±s）

①P ＜0.05，與C組比較；②P ＜0.05，與D組比較

組別A組（健康兔+生理鹽水）B組（健康兔+艾迪）C組（荷瘤兔+生理鹽水）D組（荷瘤兔+紫杉醇）E組（荷瘤兔+艾迪）F組（荷瘤兔+聯(lián)合用藥）n/只6 6 6 6 6 6給藥第7天0.052±0.003 0.055±0.002 0.050±0.002 0.054±0.002 0.067±0.002①②0.078±0.002①②給藥第14天0.052±0.003 0.056±0.002 0.049±0.002 0.050±0.002 0.067±0.002①②0.080±0.003①②

3 討論

目前，舌鱗癌主要的治療方法是以手術(shù)治療為主，同時(shí)輔以放療和化療，再聯(lián)合中醫(yī)藥物的治療、免疫療法以及生物治療等[9]。放療、化療是治療舌鱗癌首選的輔助治療方式之一，但隨著放療、化療次數(shù)的增加，患者可能出現(xiàn)免疫功能下降的情況，如消化不良、骨髓抑制等不良反應(yīng)等。因此，尋找化療期間可提升免疫功能的中醫(yī)藥制劑正是目前舌鱗癌治療需進(jìn)一步探討及研究的項(xiàng)目。

艾迪注射液是臨床中常用的治療各種惡性腫瘤中藥?kù)o脈制劑，可以抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞。其抑制和殺傷的機(jī)制主要為：（1）注射液中的斑蝥素可以阻滯腫瘤細(xì)胞的有絲分裂或使有絲分裂紡錘體發(fā)生異常；（2）人參皂苷通過(guò)激活蛋白激酶抑制劑，影響腫瘤細(xì)胞G1 期的時(shí)程，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制mRNA 的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞的增殖受到限制，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。艾迪注射液因能改善腫瘤患者在放化療過(guò)程中的不良反應(yīng)，提高腫瘤患者的生存質(zhì)量，故可作為癌癥患者化療的輔助用藥。在臨床上廣泛應(yīng)用于原發(fā)性肝癌[10-11]、肺癌[12-14]、婦科腫瘤[15]、消化道惡性腫瘤[16]等多種惡性腫瘤的治療，其不僅能增強(qiáng)機(jī)體的特異性免疫功能，還可提高非特異性免疫功能和應(yīng)激能力[17]。

近年來(lái)，Th1/Th2細(xì)胞亞群的狀態(tài)是腫瘤免疫治療研究中的一個(gè)熱點(diǎn)[18]。伴隨腫瘤免疫治療的不斷發(fā)展，因天然產(chǎn)物的藥物毒副作用較小，同時(shí)還對(duì)免疫功能具有一定的調(diào)節(jié)作用等優(yōu)點(diǎn)，也在腫瘤的免疫研究中備受青睞[19]。大量的研究發(fā)現(xiàn)，艾迪注射液能夠調(diào)節(jié)腫瘤的免疫機(jī)制，對(duì)Th1/Th2型細(xì)胞因子產(chǎn)生影響。早在1986 年，Mosmann 等根據(jù)小鼠分泌細(xì)胞因子的不同將Th 細(xì)胞分為2 個(gè)功能亞型（Th1、Th2）[20]。隨后，在人類和其他物種中發(fā)現(xiàn)了Th1和Th2亞型。機(jī)體在正常的生理?xiàng)l件，Th1/Th2是處在一個(gè)相對(duì)平衡的狀態(tài)下，而在這個(gè)動(dòng)態(tài)的平衡中，機(jī)體是通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞的比例來(lái)調(diào)節(jié)體液免疫或細(xì)胞免疫[21-22]。但是當(dāng)機(jī)體功能處于異常狀態(tài)的時(shí)候，細(xì)胞因子平衡的網(wǎng)絡(luò)就會(huì)遭到破壞，一般會(huì)伴隨著Th1/Th2平衡的失調(diào)，這種現(xiàn)象被稱為“Th1/Th2 平衡漂移”，此狀態(tài)會(huì)對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能造成紊亂，致使機(jī)體趨向病態(tài)[19]。Th1 細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α 等，介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)和遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)，主要在針對(duì)外源性病原體以及腫瘤的免疫防御中發(fā)揮作用。Th2 細(xì)胞分泌IL-6、IL-10 等，刺激細(xì)胞增殖和抗體產(chǎn)生，介導(dǎo)體液免疫，此類細(xì)胞因子可能介導(dǎo)機(jī)體的免疫抑制和腫瘤免疫逃逸[23-24]。

脾臟是機(jī)體重要的免疫器官之一，它既是外周免疫器官，也是機(jī)體免疫的第三道防線，具有豐富的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，但B淋巴細(xì)胞比例較大，因此與體液免疫關(guān)系更為密切。脾臟指數(shù)的高低決定了其中淋巴細(xì)胞增殖的程度，可以在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱。通常免疫器官質(zhì)量的增加表示免疫能力的增強(qiáng)，免疫器官指數(shù)越大表明動(dòng)物的免疫能力越強(qiáng)[25]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單純艾迪注射液可能促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子的分泌，抑制Th2型細(xì)胞因子的分泌，使Th1/Th2 平衡向Th1 占優(yōu)勢(shì)的狀態(tài)漂移，且艾迪注射液聯(lián)合紫杉醇注射液較單純艾迪注射液對(duì)Th1型細(xì)胞因子的促進(jìn)作用及Th2型細(xì)胞因子的抑制作用更為顯著，使Th1/Th2 平衡向Th1 方向漂移，可升高脾臟指數(shù)。由于本實(shí)驗(yàn)中對(duì)荷瘤兔模型各項(xiàng)指標(biāo)的觀察受限于生存期，單純艾迪注射液、艾迪注射液和紫杉醇注射液聯(lián)合使用是否能夠持續(xù)使Th1/Th2 的平衡向Th1 方向漂移，是否可以改善荷瘤兔的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期，改善荷瘤兔的免疫微環(huán)境還有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，本研究工作旨在探索艾迪注射液在舌鱗癌治療中發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，艾迪注射液通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)Th1/Th2型細(xì)胞因子的平衡來(lái)達(dá)到治療舌鱗癌的目的，進(jìn)而起到改善機(jī)體的綜合免疫狀態(tài)的功效，為艾迪注射液在舌鱗癌治療中進(jìn)一步研究其作用機(jī)理和臨床聯(lián)合化療的應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)。