攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠脂質(zhì)代謝的影響

唐一新　劉小芳　劉建志　祝春英　冷凱良　張輝珍

[摘要]目的 探討攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠脂質(zhì)代謝的影響。

方法將雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（灌胃生理鹽水）、大豆油組（灌胃大豆油）、魚油組（灌胃魚油）、南極磷蝦油組（灌胃南極磷蝦油），灌胃劑量2.625g/kg，連續(xù)灌胃30d。測定各組大鼠血清三酰甘油（TG）、膽固醇（TC）水平，血清及肝臟脂肪酸的組成變化。

結(jié)果與對(duì)照組相比，南極磷蝦油組及魚油組大鼠血清TG含量分別降低了19.00%、9.52%，TC含量分別降低了8.90%、4.14%，但差異無顯著性（P>0.05）;血清二十碳五烯酸（EPA）含量分別升高了309.00%、340.00%（F=12.015，P<0.05），二十二碳六烯酸（DHA）含量分別升高了80.20%、42.32%（F=8.825，P<0.05），花生四烯酸（AA）含量分別降低了37.67%、42.19%（F=8.395，P<0.05）;肝臟EPA含量分別升高了591.43%、548.57%（F=25.736，P<0.05），DHA含量分別升高了48.12%、42.26%（F=5.122，P<0.05），AA含量分別下降了45.77%、33.63%（F=8.806，P<0.05）。

結(jié)論攝食南極磷蝦油有助于改善大鼠脂質(zhì)代謝，提高血清和肝臟中EPA及DHA的水平，且效果要優(yōu)于TG型魚油。

[關(guān)鍵詞]膳食脂肪類，不飽和;南極磷蝦油;大鼠;脂類代謝;脂肪酸類

[中圖分類號(hào)]R151.2;R349.1

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]2096-5532（2020）01-0062-05

南極磷蝦隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門、甲殼綱、磷蝦目、磷蝦科、磷蝦屬，是以群集方式生活于環(huán)南大洋的單種浮游生物，生物量為6.5億～10.0億噸，年可捕量相當(dāng)于目前世界現(xiàn)有漁業(yè)產(chǎn)量的總和[1]。作為海洋優(yōu)質(zhì)蛋白和活性脂質(zhì)的新資源寶庫，南極磷蝦已經(jīng)成為我國遠(yuǎn)洋戰(zhàn)略資源最重要的開發(fā)對(duì)象。南極磷蝦脂質(zhì)組成極具特征性，富含磷脂、蝦青素、二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）等n-3多不飽和脂肪酸（n-3PUFA）。目前國內(nèi)外研究結(jié)果表明，南極磷蝦油具有改善機(jī)體脂質(zhì)代謝、調(diào)節(jié)血壓、抗氧化、改善睡眠、預(yù)防和治療神經(jīng)退行性疾病等功能[2-8]。特別值得關(guān)注的是，南極磷蝦中EPA和DHA等n-3PUFA更多以磷脂的形式存在，這有別于傳統(tǒng)魚油制品的三酰甘油（TG）形式或乙酯形式[9]，具有更好的生物利用度和生理活性[10]。近代營養(yǎng)學(xué)研究結(jié)果顯示，魚油對(duì)機(jī)體糖脂代謝的調(diào)控作用與其對(duì)機(jī)體靶組織/靶器官脂肪酸組成的改善有關(guān)[11]。南極磷蝦油在改善機(jī)體脂質(zhì)組成方面是否較傳統(tǒng)魚油制品具有更優(yōu)的效果亟待研究。本研究旨在探討南極磷蝦油對(duì)機(jī)體脂質(zhì)代謝的影響，從而為其在功能食品或特殊醫(yī)學(xué)用途食品領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)和理論支持。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1主要試劑南極磷蝦油，由青島市南極維康生物科技有限公司提供;TG型魚油，由福建高龍實(shí)業(yè)有限公司提供;金龍魚大豆油，由嘉里糧油（天津）有限公司提供。氯仿、甲醇、正己烷、石油醚、濃硫酸等分析純試劑（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;TG和膽固醇（TC）試劑盒（北京中生北控生物科技有限公司）;37種脂肪酸混標(biāo)（美國Sigma公司）。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性Wistar大鼠，購于山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20～25℃，濕度40%～70%，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲食、飲水。

1.1.3儀器與設(shè)備UV-2000型紫外線分光光度計(jì)（尤尼柯上海儀器有限公司）;7820型氣相色譜儀（美國Agilent公司）;WiseMixVM-10型渦旋振蕩器（韓國DAIHAN公司）;BAS224S-CW型電子天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）;DHG型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海三發(fā)儀器有限公司）;30-30K型低溫離心機(jī)（美國Sigma公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組及處理將雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（A組，灌胃生理鹽水）、大豆油組（B組，灌胃大豆油）、魚油組（C組，灌胃魚油）以及南極磷蝦油組（D組，灌胃南極磷蝦油），每組20只。根據(jù)成人每天食用油推薦攝入量25g，等量換算成大鼠每天灌胃劑量為2.625g/kg，故各實(shí)驗(yàn)組大鼠每天灌胃劑量2.625g/kg，對(duì)照組灌胃等量生理鹽水，連續(xù)灌胃30d。

1.2.2大鼠生長發(fā)育觀察實(shí)驗(yàn)期間記錄動(dòng)物體質(zhì)量、攝食量變化。于末次灌胃后禁食不禁水12h，以戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血，分離血清備用。然后處死大鼠，剝離肝臟、脾臟和腎臟并測其質(zhì)量，分別計(jì)算臟器指數(shù)。將肝臟迅速置于液氮中，-80℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3血清TG、TC水平檢測按試劑盒說明書規(guī)定操作。

1.2.4血清脂質(zhì)提取參照BLIGH等[12]的方法。取適量血清，按照血清∶氯仿∶甲醇=0.8∶1∶1的體積比加入氯仿和甲醇，渦旋混勻，8000r/min離心5min，收集下層氯仿層，重復(fù)3次，合并氯仿層即為血清脂質(zhì)提取液。

1.2.5肝臟脂質(zhì)提取參照FOLCH等[13]的方法。取0.25g肝臟，加入適量氯仿和甲醇（體積比2∶1）溶液制備勻漿液，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，定容，37℃水浴30min提取脂質(zhì)，過濾至具塞量筒中，加入4mL雙蒸水，混勻，靜置過夜分層，收集下層氯仿溶液，減壓旋蒸后用石油醚將脂質(zhì)溶解，定容至25mL，即為肝臟脂質(zhì)提取液。

1.2.6血清及肝臟脂肪酸組成分析參照樓喬明等[14]的方法。①甲酯化：取適量血清及肝臟脂質(zhì)提取液和南極磷蝦油、魚油、大豆油于具塞試管中，氮?dú)獯蹈桑尤塍w積分?jǐn)?shù)0.10硫酸甲醇溶液，混勻后置60℃加熱1h，冷卻至室溫后，加入一定量正己烷，混勻，靜置分層。取正己烷層濃縮后過0.45μm有機(jī)膜，待測。②氣相色譜分析：應(yīng)用SP2560色譜柱（100m×0.25mm×0.2μm）、FID檢測器（溫度260℃）;高純氦氣載氣，載氣流量0.5mL/min;進(jìn)樣口溫度250℃，分流比15∶1;進(jìn)樣量1μL。程序升溫：初始溫度140℃，保持6min;以10℃/min升至180℃，保持6min;以1℃/min升至200℃，保持20min;以4℃/min升至240℃，保持22min。依據(jù)出峰時(shí)間進(jìn)行定性，按照面積歸一化法計(jì)算各脂肪酸的百分含量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以[AKx-D]±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1南極磷蝦油和魚油的脂肪酸組成分析

南極磷蝦油和魚油脂肪酸組成分析結(jié)果見表1。由表1可知，南極磷蝦油含EPA21.71%、DHA12.46%，魚油的EPA、DHA含量與南極磷蝦油基本一致。

2.2攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠生長的影響

連續(xù)喂養(yǎng)30d后，各實(shí)驗(yàn)組大鼠生長良好，其體質(zhì)量增長量及肝體比、脾體比、腎體比等主要臟器指數(shù)與對(duì)照組比較差異均無顯著意義（P>0.05）。見表2。

2.3攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠血脂的影響

與對(duì)照組相比，南極磷蝦油組與魚油組大鼠血清TG含量分別降低了19.00%、9.52%，TC含量分別降低了8.90%、4.14%，但差異無顯著意義（P>0.05）。見表3。

2.4攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠血清脂肪酸組成的影響

與對(duì)照組相比較，南極磷蝦油組和魚油組大鼠血清中AA的含量分別降低了37.67%、42.19%（F=8.395，P<0.05），而EPA的含量分別升高了309.00%、340.00%（F=12.015，P<0.05），DHA含量分別升高了80.20%、42.32%（F=8.825，P<0.05）。與大豆油組相比，南極磷蝦油組和魚油組EPA+DHA的含量分別升高了141.44%、120.72%（F=37.085，P<0.05）;南極磷蝦油組EPA+DHA含量較魚油組升高了9.39%，但兩組差異無顯著性（P>0.05）。與對(duì)照組相比較，大豆油組飽和脂肪酸（SFA）的含量下降了7.44%，而多不飽和脂肪酸（PUFA）的含量升高了2.87%，但差異無顯著意義（P>0.05）。表明攝食南極磷蝦油或魚油顯著提高了PUFA尤其是DHA、EPA的含量，降低了SFA的含量。見表4。

[HJ1.7mm]

2.5攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠肝臟脂肪酸組成的影響

與對(duì)照組相比較，南極磷蝦油組和魚油組大鼠肝臟中EPA的含量分別升高了591.43%、548.57%（F=25.736，P<0.05），DHA的含量分別升高了48.12%、42.26%（F=5.122，P<0.05），AA含量分別下降了45.77%、33.63%（F=8.806，P<0.05）。

與大豆油組相比，南極磷蝦油組和魚油組大鼠肝臟中EPA+DHA含量分別升高了90.10%、77.73%（F=18.749，P<0.05）;南極磷蝦油組EPA+DHA含量較魚油組升高了6.96%，但兩組差異無顯著性（P>0.05）。大豆油組與對(duì)照組比較，各脂肪酸含量差異均無顯著性（P>0.05）。表明攝食南極磷蝦油或魚油顯著提高了n-3PUFA含量，降低了AA的含量。見表5。

3討論

南極磷蝦油富含磷脂、蝦青素、EPA和DHA等n-3PUFA。本文對(duì)攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠脂質(zhì)代謝的影響進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，用南極磷蝦油、TG型魚油及大豆油喂養(yǎng)30d，各實(shí)驗(yàn)組大鼠體質(zhì)量增長量及臟器指數(shù)與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示攝食南極磷蝦油對(duì)正常飲食大鼠的生長發(fā)育無明顯影響。

有研究表明，攝食富含n-3PUFA的魚油可以明顯降低血脂水平[15-16]。李金章[17]研究攝食不同形式魚油對(duì)動(dòng)物血脂的影響，結(jié)果顯示，磷脂型魚油降血脂效果要優(yōu)于TG型魚油。而南極磷蝦油中部分PUFA以磷脂的形式存在。王亞恩等[18]研究結(jié)果表明，南極磷蝦油和深海魚油均能顯著降低高脂血癥大鼠血清中的TC、TG水平，低劑量南極磷蝦油的降血脂作用與深海魚油相差不大。本實(shí)驗(yàn)中南極磷蝦油呈現(xiàn)出降血脂的趨勢，但南極磷蝦油組血脂水平與對(duì)照組比較差異無顯著性，與上述研究結(jié)果不同，推測與實(shí)驗(yàn)采用的動(dòng)物模型有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)是對(duì)正常飲食大鼠的干預(yù)研究，而王亞恩等[18]是選取高脂血癥大鼠作為研究對(duì)象。

本文對(duì)大鼠血清脂肪酸組成分析結(jié)果表明，正常飲食條件下攝入南極磷蝦油或魚油均可以明顯提高大鼠血清中EPA、DHA含量，南極磷蝦油的效果優(yōu)于魚油及大豆油。有研究結(jié)果表明，南極磷蝦油中的ω-3脂肪酸比魚油更易被人體吸收，具有較高的生物利用率[19-20]。南極磷蝦油組與魚油組大鼠血清脂肪酸組成存在差別，原因可能是南極磷蝦油中的EPA、DHA等n-3PUFA更多以磷脂的形式存在。MAKI等[20]研究表明，與魚油相比，富含磷脂型n-3PUFA的磷蝦油能夠更好地提高肥胖病人血中n-3PUFA的水平。ANGERER等[21]對(duì)223例冠心病病人的跟蹤研究結(jié)果顯示，冠狀動(dòng)脈病變的程度與DHA在脂肪組織中的濃度以及體質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，日本普通農(nóng)村居民的平均動(dòng)脈粥樣硬化斑塊數(shù)是漁民的5～8倍，頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊數(shù)與攝入EPA、DHA等n-3PUFA的量呈負(fù)相關(guān)[15]。因此可以推測，南極磷蝦油調(diào)節(jié)血脂、降低動(dòng)脈粥樣硬化疾病發(fā)病率的生理功能與其提高血清EPA、DHA含量的作用密切相關(guān)。

本文對(duì)大鼠肝臟脂肪酸組成分析結(jié)果表明，正常飲食條件下攝入南極磷蝦油或魚油均可以明顯提高大鼠肝臟中EPA、DHA含量，南極磷蝦油的效果要優(yōu)于魚油及大豆油。李金章[17]研究了不同類型魚油對(duì)小鼠肝臟脂肪酸組成的影響，結(jié)果顯示，攝入不同類型魚油均可以使小鼠肝臟AA的含量顯著降低，DHA的含量顯著升高，且磷脂型魚油效果優(yōu)于TG型魚油。不同類型的魚油對(duì)組織內(nèi)DHA含量的影響不同，可能與消化吸收過程的差異密切相關(guān)。LENA等[22]研究了磷蝦油及魚油對(duì)小鼠肝臟基因表達(dá)的影響，結(jié)果顯示，與魚油相比，磷蝦油可以更優(yōu)地調(diào)節(jié)小鼠肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)。由此推測，南極磷蝦油對(duì)大鼠肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)酶活力以及基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，與其改善大鼠肝臟EPA和DHA的水平密切相關(guān)。

邱阿敏等[23]通過大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)對(duì)南極磷蝦油及砷甜菜堿進(jìn)行安全性觀察，結(jié)果顯示，南極磷蝦油組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）及谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肝臟病理組織學(xué)觀察均未見明顯異常。王軍仁等[24]研究了南極磷蝦油對(duì)小鼠乙醇性脂肪肝模型的作用，結(jié)果顯示，南極磷蝦油組與自然恢復(fù)組相比ALT、AST活性降低。趙靜等[25]報(bào)道，南極磷蝦磷脂能提高衰老小鼠體內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、過氧化氫酶（CAT）等抗氧化酶活性，同時(shí)降低丙二醛（MDA）水平。王亞恩等[18]研究表明，南極磷蝦油抵抗動(dòng)脈粥樣硬化作用要優(yōu)于魚油，能提高大鼠血清SOD和GSH-PX活性，降低MDA含量。故攝食南極磷蝦油可明顯提高大鼠血清及肝臟中EPA、DHA含量，提高機(jī)體抗氧化應(yīng)激能力，而對(duì)大鼠肝的結(jié)構(gòu)和功能無明顯影響。

綜上所述，攝入南極磷蝦油及TG型魚油30d后，大鼠血清和肝臟中的n-3PUFA，尤其是EPA和DHA含量顯著升高，且南極磷蝦油的作用效果優(yōu)于魚油。南極磷蝦油對(duì)大鼠脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于魚油，可能與其更好的生物利用度及對(duì)機(jī)體脂肪酸組成更優(yōu)的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]劉麗，劉承初，趙勇，等.南極磷蝦的營養(yǎng)保健功效以及食用安全性評(píng)價(jià)[J].食品科學(xué)，2010，31（17）：443-447.

[2]馮迪娜，袁玥，朱曉麗.南極磷蝦油生理功能的研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2015，36（7）：115-117.

[3]孫昌華，祝清芬，王娜，等.南極磷蝦油輔助降血脂預(yù)防作用與治療作用的比較[J].中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2018，26（4）：480-488.

[4]賀瑞坤，羅海吉.南極磷蝦油對(duì)人類健康的作用[J].食品研究與開發(fā)，2013，34（20）：130-133.

[5]鄭琳，劉瀟陽，周新，等.南極磷蝦油對(duì)負(fù)重游泳小鼠的抗疲勞作用[J].大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，34（2）：108-110.

[6]劉云，王亞恩，李立德，等.南極磷蝦油改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力研究[J].食品科學(xué)，2011，32（15）：273-276.

[7]劉建君，馮迪娜，蘇學(xué)鋒，等.天然抗氧化劑對(duì)南極磷蝦油抗氧化效果的研究[J].食品研究與開發(fā)，2014，35（15）：22-23.

[8]XIONGQi，RUQin，TIANXiang，etal.KrilloilprotectsPC12cellsagainstmethamphetamine-inducedneurotoxicitybyupdatesinhibitingapoptoticresponseandoxidativestress[J].NutritionResearch，2018，58：84-94.

[9]張?zhí)烀瘢鶎W(xué)平，榮曉花.魚油多不飽和脂肪酸的制備方法[J].中國海洋藥物，2005，24（1）：43-45.

[10]王亞恩.南極磷蝦油降血脂、抗氧化力及其改善記憶力功能實(shí)驗(yàn)研究[D].青島：中國海洋大學(xué)，2011.

[11]DINGNing，XUEYong，TANGXiao，etal.Short-termeffectsofdifferentfishoilformulationsontissueabsorptionofdocosahexaenoicacidinmicefedhigh-andlow-fatdiets[J].JournalofOleoScience，2013，62（11）：883-891.

[12]BLIGHEG，DYERWJ.Arapidmethodoftotallipidextractionandpurification[J].CanadianJournalofBiochemistryandPhysiology，1959，37（8）：911-917.

[13]FOLCHJ，LEESM，SLOANESTANLEYGH.Asimplemethodfortheisolationandpurificationoftotallipidesfromanimaltissues[J].TheJournalofBiologicalChemistry，1957，226（1）：497-509.

[14]樓喬明，王玉明，劉小芳，等.南極磷蝦脂肪酸組成及多不飽和脂肪酸質(zhì)譜特征分析[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2011，18（4）：929-935.

[15]YAMADAT，STRONGJP，LSHIIT，etal.Atherosclerosisandomega-3fattyacidsinthepopulationsofafishingvillageandafarmingvillageinJapan[J].Atherosclerosis，2000，153（2）：469-481.

[16]LIDongmei，ZHOUDayong，ZHUBeiwei，etal.Effectsofkrilloilintakeonplasmacholesterolandglucoselevelsinratsfedahigh-cholesteroldiet[J].JournaloftheScienceofFoodandAgriculture，2013，93（11）：2669-2675.

[17]李金章.甘油酯型魚油的制備及活性研究[D].青島：中國海洋大學(xué)，2011.

[18]王亞恩，姜國良，徐愷，等.南極磷蝦油對(duì)高脂血癥大鼠血脂和抗氧化力的影響[J].中國海洋藥物，2011，20（3）：56-59.

[19]ULVENSM，KIRKHUSB，LAMGLAITA，etal.MetaboliceffectsofkrilloilareessentiallysimilartothoseoffishoilbutatlowerdoseofEPAandDHA，inhealthyvolunteers[J].Li-

pids，2011，46（1）：37-46.

[20]MAKIKC，REEVESMS，F(xiàn)ARMERM，etal.Krilloilsupplementationincreasesplasmaconcentrationsofeicosapentaenoicanddocosahexaenoicacidsinoverweightandobesemenandwomen[J].NutritionResearch，2009，29（9）：609-615.

[21]ANGERERP，KOTHNYW，STORKS，etal.Effectofdi-

supplementationwithomega-3fattyacidsonprogressionof

atherosclerosisincarotidarteries[J].CardiovascularResearch，2002，54（1）：183-190.

[22]LENAB，KJETILB，KARINW，etal.Differentialeffectsofkrilloilandfishoilonthehepatictranscriptomeinmice[J].FrontiersinGenetics，2011，2（45）：1-8.

[23]邱阿敏，劉小芳，張學(xué)超，等.南極磷蝦油及砷甜菜堿大鼠喂養(yǎng)試驗(yàn)安全性觀察[J].青島大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2018，54（1）：70-77.

[24]王軍仁，趙傳凱，吳志強(qiáng).南極磷蝦油對(duì)小鼠酒精性脂肪肝模型作用的研究[J].食品工業(yè)科技，2012，33（24）：399-402.

[25]趙靜.南極磷蝦磷脂提取純化及抗衰老實(shí)驗(yàn)研究[D].青島：中國海洋大學(xué)，2012.

（本文編輯 馬偉平）