豬病診斷和防治中PCR技術(shù)的應(yīng)用研究

王慶偉 王得明

在我國牲畜飼養(yǎng)中，豬的飼養(yǎng)占據(jù)非常大的比重，豬肉也是人們生活中常見的食用肉類。但是，由于飼養(yǎng)方式不科學(xué)等原因，在豬的飼養(yǎng)中豬病的發(fā)生率越來越大，對養(yǎng)豬業(yè)和人們的食品安全造成了非常不利的影響。而且流行性豬病大多都是典型的、多種病毒混合感染的，從癥狀上看，沒有明顯的特征，這就給豬病的防治工作帶來了很大的困難，而PCR技術(shù)的應(yīng)用則為豬病的診斷和防治工作提供更多的防治措施。

1 PCR技術(shù)概述

PCR技術(shù)在豬病的診斷和防治工作中具有非常廣泛的應(yīng)用。PCR技術(shù)在豬病診斷和防治工作的過程中，逐漸表現(xiàn)出特異性較高、操作簡單和擴(kuò)增速度快的優(yōu)勢。PCR技術(shù)在豬病的診斷和防治工作中可以使目的基因在短時間內(nèi)進(jìn)行快速的增擴(kuò)，這樣能夠快速的對微量基因進(jìn)行檢測。PCR技術(shù)在豬病診斷和防治工作的應(yīng)用中，也在不斷的創(chuàng)新和完善，根據(jù)豬病發(fā)展的現(xiàn)狀和PCR技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀，PCR技術(shù)逐漸發(fā)展出很多新的技術(shù)，這些由PCR技術(shù)發(fā)展而來的新技術(shù)在豬病診斷和防治工作中發(fā)揮著非常重要的作用。

2 PCR技術(shù)在豬病診斷和防治中的應(yīng)用

2.1 PCR技術(shù)在豬圓環(huán)病毒2型的診斷和防治中的應(yīng)用

PCR技術(shù)在豬圓環(huán)病毒2型的診斷和防治工作中，通過在基因庫中豬圓環(huán)病毒的基因序列ORF2進(jìn)行擴(kuò)增引物的設(shè)計，將豬圓環(huán)病毒2型的臨床分離基因作為模板基因，再對反應(yīng)的條件進(jìn)行篩選，形成了一種能夠有效監(jiān)測豬圓環(huán)病毒2型的PCR方法。這種PCR方法具有很強(qiáng)的特異性，通過這種PCR方法對豬圓環(huán)病毒2型進(jìn)行檢測和基因擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)目的基因的片段長度為559bp （堿基），而通過這種PCR方法在相同的條件下對其它豬病感染病毒進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)結(jié)果為陰性。PCR技術(shù)在豬圓環(huán)病毒2型的診斷和防治中具有非常大的應(yīng)用價值，能夠?qū)ωi病的診斷和防治工作提供有效的措施和方法。

2.2 PCR技術(shù)在豬瘟病毒診斷和防治中的應(yīng)用

豬瘟病毒是引起豬病的常見的病毒類型，豬瘟病毒引起的豬病非常嚴(yán)重，影響范圍非常廣，對我國養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。我國在豬瘟病毒的防治中采取了很多方法和措施，但是，效果不夠明顯，豬瘟病毒依然經(jīng)常出現(xiàn)并迅速的傳播和蔓延。當(dāng)前，很多相關(guān)的專業(yè)研究人員思考從引物的設(shè)計上尋找方法，通過引物設(shè)計建立用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)來對豬瘟病毒進(jìn)行檢測。這種方法能夠?qū)ωi瘟病毒進(jìn)行核酸序列的擴(kuò)增，這種核酸序列的擴(kuò)增表現(xiàn)出明顯的特異性，能夠?qū)崿F(xiàn)病毒區(qū)分，從而解決了人們一直以來比較困擾的問題。經(jīng)過多次的實驗表明這種方法特異性強(qiáng)、可靠性高，在豬瘟病毒的診斷上能夠提供很好的方法。

2.3 PCR技術(shù)在母豬繁殖障礙與呼吸綜合征診斷和防治中的應(yīng)用

母豬繁殖障礙與呼吸綜合征主要在母豬和幼豬中發(fā)病。通常表現(xiàn)為，母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)出木乃伊胎和弱仔，幼豬出現(xiàn)呼吸道癥狀，幼豬的死亡率很高。這種豬病的發(fā)生非常普遍，在我國這種豬病已成為二類傳染病，對母豬的正常繁殖和幼豬的正常生長都有非常嚴(yán)重的惡劣影響，對我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在對這種豬病進(jìn)行診斷時要迅速診斷，如果使用常規(guī)的診斷方法就會因為繁瑣的診斷操作增加診斷的時間，從而將這種豬病與豬瘟、細(xì)小病毒等混淆，診斷結(jié)果就會出錯。我國科研人員建立了利用反式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法來對這種豬病進(jìn)行檢測。在不斷的探索中逐漸建立了檢測這種豬病的PCR方法。同時，也探索出了一些在使用這種PCR方法進(jìn)行豬病檢測的注意事項。一方面，在陳舊的樣品中提取的RNA很容易出現(xiàn)降解反應(yīng)，在電泳實驗中，新鮮的樣品會出現(xiàn)3條明顯的RNA，而且這3條RNA的外形也是比較完整的。另一方面，提取RNA之后，進(jìn)行cDHA的反轉(zhuǎn)錄，在一定環(huán)境下經(jīng)過一定的時間，RNA就會出現(xiàn)降解反應(yīng)。

2.4 PCR技術(shù)在混合感染病毒診斷和防治中的應(yīng)用

PCR技術(shù)在混合感染病毒診斷和防治中的應(yīng)用主要是應(yīng)用多重PCR技術(shù)，這種多重PCR技術(shù)能夠?qū)?種以上的病毒引物加入到統(tǒng)一反應(yīng)體系中，將這種多重PCR技術(shù)與常規(guī)PCR技術(shù)一起應(yīng)用到病毒的檢測中，能夠快速、準(zhǔn)確的檢測2種或者3種以上的病原菌，同時，多重PCR技術(shù)具有高敏感度的特點，這些優(yōu)點在常規(guī)的PCR技術(shù)中所沒有。混合感染病毒在豬病中非常普遍，如果獸醫(yī)僅憑借自身的診斷經(jīng)驗進(jìn)行診斷會出現(xiàn)很多的錯誤，從而錯過最佳診斷的時間。所以，有必要在混合感染病毒的診斷中推廣多重PCR技術(shù)。

豬病是對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失的主要原因，當(dāng)前，我國豬病的發(fā)生率越來越高，在養(yǎng)豬業(yè)中對豬病進(jìn)行診斷和防治是十分必要的。而常規(guī)的豬病診斷和防治技術(shù)在豬病診斷和防治中效果不夠明顯，而PCR技術(shù)能夠在豬病的診斷和防治工作中發(fā)揮重要的作用，所以，對PCR技術(shù)進(jìn)行研究是十分必要的。