羅氏Cobas8000全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)心肌酶譜的性能評(píng)價(jià)*

趙有利,姜雯雯,李 飛,馮 妍,高 山,劉玉梅△

(1.蘭州大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，甘肅蘭州 730030；2.蘭州市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅蘭州 730046)

急性心肌梗死(AMI)是一種發(fā)病急驟，病情進(jìn)展迅速、并發(fā)癥多、死亡風(fēng)險(xiǎn)較高的一類心臟疾病，若在發(fā)病初期得不到正確、有效的治療，極易危及患者生命[1]，故及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷是AMI救治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是提高治療成功率的重要指標(biāo)。目前臨床用于AMI早期診斷的標(biāo)志物主要包括肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌鈣蛋白(cTn)等，但單獨(dú)指標(biāo)在疾病的早期診斷中具有一定的不足之處。為更為準(zhǔn)確地早期診斷AMI，建議聯(lián)合檢測(cè)標(biāo)志物。近些年來，臨床上將急診心肌酶譜與cTn檢測(cè)作為診斷AMI及AMI治療預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)[2-3]，CK-MB是評(píng)價(jià)心肌有無壞死的較敏感、較理想的指標(biāo)，加之肌酸激酶(CK)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)等聯(lián)合檢測(cè)，結(jié)合患者胸痛等臨床癥狀及cTn檢測(cè)、心電圖檢查等綜合考慮可對(duì)AMI病情做出全面、準(zhǔn)確的診斷[2]。除在AMI診斷及治療中的應(yīng)用之外，近年來心肌酶譜在甲狀腺功能[4-5]，有機(jī)磷農(nóng)藥中毒[6]、急性腦血管病[7]、重癥肺炎[8]、哮喘[9]、心肌受累的手足口病[10-11]、冠心病[12]、病毒性心肌炎[13]、精神障礙及精神分裂癥[14-15]等疾病的診斷中也起到極為重要的作用。心肌酶譜作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目在臨床廣泛應(yīng)用，但相關(guān)的性能評(píng)價(jià)研究鮮有報(bào)道。為了保證臨床檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)、可靠、準(zhǔn)確，本實(shí)驗(yàn)將以ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》為準(zhǔn)則[16]，檢驗(yàn)流程參考CLSI/NCCLS指南文件，并根據(jù)工作實(shí)際情況和臨床需要設(shè)計(jì)驗(yàn)證方案，對(duì)羅氏Cobas8000分析儀檢測(cè)四項(xiàng)心肌酶譜的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)，并且與Vitro5600進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)比對(duì)。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 血液標(biāo)本來源于2018年3-4月蘭州大學(xué)第二醫(yī)院門診、住院患者，且所有標(biāo)本無溶血、黃疸、脂血等異常情況。

1.2儀器與試劑 羅氏公司Cobas8000型全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品；強(qiáng)生公司Vitro5600型干化學(xué)分析儀及其配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品。

1.3方法

1.3.1準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 試驗(yàn)期間保證生化分析儀運(yùn)轉(zhuǎn)正常，當(dāng)日室內(nèi)質(zhì)控在控。參考EP15-A2標(biāo)準(zhǔn)[17]，檢測(cè)國家臨床檢驗(yàn)中心2018年第一次室間質(zhì)控物，從而評(píng)估目標(biāo)數(shù)值與靶值之間的偏離程度，完成準(zhǔn)確性的驗(yàn)證。每個(gè)水平標(biāo)本檢測(cè)2次，記錄結(jié)果并取平均值，進(jìn)而計(jì)算各項(xiàng)指標(biāo)的偏倚程度，判斷其能否滿足臨床需求。若目標(biāo)數(shù)值在合理偏倚范圍內(nèi)，則可判斷檢測(cè)準(zhǔn)確度良好。

1.3.2精密度評(píng)價(jià) 實(shí)驗(yàn)過程中所選用的試劑批次和質(zhì)控品均一致，且當(dāng)日檢測(cè)質(zhì)控在控。標(biāo)本檢測(cè)時(shí)需參考EP15-A2標(biāo)準(zhǔn)[17]，并設(shè)立高低2個(gè)濃度，實(shí)驗(yàn)周期為5 d，每天檢測(cè)一批次標(biāo)本，每個(gè)批次同一水平重復(fù)檢測(cè)3次后取平均值，并計(jì)算同批次標(biāo)本數(shù)值的變異系數(shù)，以及不同批次之間的變異系數(shù)。同一批次不同標(biāo)本之間的精密度將質(zhì)量目標(biāo)設(shè)定為允許總誤差的1/4以內(nèi)，不同批次之間的精密度將質(zhì)量目標(biāo)設(shè)定為允許總誤差的1/3以內(nèi)。

1.3.3線性范圍評(píng)價(jià) 參考CLSI EP6-A2線性評(píng)價(jià)方法[18]，選取1份低濃度(L)標(biāo)本和1份高濃度(H)標(biāo)本，分別按照儀器所規(guī)定的線性范圍配制成不同系列濃度的血清，即H與L按不同比例配合，如：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H。每個(gè)標(biāo)本均需重復(fù)測(cè)定2次，并準(zhǔn)確記錄數(shù)據(jù)，隨后將預(yù)期值設(shè)為X，將實(shí)際值設(shè)為Y，并采用多項(xiàng)式回歸方式進(jìn)行擬合，具體方程為：Y=bX+a，若相關(guān)系數(shù)(r2)不低于0.975，b值落在了0.97～1.03這一區(qū)間內(nèi)，a與0差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果為可接受，若b<0.95則提示b和1之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3.4參考區(qū)間評(píng)價(jià) 根據(jù)NCCLSC 28-A2推薦方法[19]，選取40例健康體檢者的血樣，男女比例為1∶1。按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)要求在Cobas8000分析儀上進(jìn)行心肌酶譜4項(xiàng)的標(biāo)本檢測(cè)，分組統(tǒng)計(jì)結(jié)果中若超過18例檢測(cè)結(jié)果在廠商參考區(qū)間內(nèi)，則提示該區(qū)間可用于本實(shí)驗(yàn)室。

1.3.5稀釋倍數(shù)驗(yàn)證 取1份高濃度標(biāo)本，一管未稀釋不做任何處理，一管進(jìn)行最大倍數(shù)的稀釋，隨后分別測(cè)定兩管標(biāo)本的實(shí)際數(shù)值，同一水平重復(fù)測(cè)定3次后取均值，并計(jì)算檢測(cè)結(jié)果和理論結(jié)果的偏差值，以1/2 CLIA′88總允許誤差范圍為判斷限。

1.3.6與干化學(xué)法比對(duì)試驗(yàn) 以Vitro5600型分析儀作為參考系統(tǒng)，Cobas8000型全自動(dòng)生化分析儀作為對(duì)比系統(tǒng)，參考EP9-A2的方法[20]，20份比對(duì)血清標(biāo)本分別用速率法與干化學(xué)法進(jìn)行測(cè)定，記錄結(jié)果，并計(jì)算預(yù)期偏倚及其置信區(qū)間，若實(shí)際誤差不足允許誤差的1/2，則結(jié)果為可接受，按照上述方法計(jì)算每個(gè)項(xiàng)目的偏倚是否能夠被接受。

2 結(jié) 果

2.1準(zhǔn)確度測(cè)定 因CK-MB未參加國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心質(zhì)評(píng)，只檢測(cè)AST、LDH、CK的臨床檢驗(yàn)中心2018年第1次質(zhì)評(píng)樣品，并將各項(xiàng)檢測(cè)均值與質(zhì)評(píng)靶值進(jìn)行對(duì)比計(jì)算偏倚大小。結(jié)果顯示，各項(xiàng)目各濃度水平的偏倚值均小于允許偏倚，通過驗(yàn)證。見表1。

表1 檢測(cè)質(zhì)評(píng)標(biāo)本正確度驗(yàn)證

2.2精密度實(shí)驗(yàn) 不同濃度的心肌酶譜所對(duì)應(yīng)的精密度數(shù)值見表2。驗(yàn)證結(jié)果顯示高濃度標(biāo)本和低濃度標(biāo)本的批內(nèi)CV%均小于1/4CLIA′88，批間CV%均小于1/3CLIA′88，顯示該方法的精密度符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。

表2 Cobas8000生化分析儀批內(nèi)、批間精密度驗(yàn)證結(jié)果(%)

2.3線性范圍驗(yàn)證 心肌酶譜中的各項(xiàng)指標(biāo)(AST、LDH、CK、CK-MB)的相關(guān)系數(shù)(r2)值均落在0.975 1～0.999 7這一區(qū)間，即r2均大于等于0.975，而b值均落在0.972 8～1.017 6這一區(qū)間內(nèi)，提示線性驗(yàn)證結(jié)果為可接受。見表3。

表3 心肌酶譜四項(xiàng)線性范圍及驗(yàn)證值

2.4參考區(qū)間驗(yàn)證 檢測(cè)40例健康體檢者的血液標(biāo)本后發(fā)現(xiàn)所有受檢者的心肌酶譜(AST、LDH、CK、CK-MB)參考區(qū)間符合率≥95%，這表明參考區(qū)間符合要求。見表4。

表4 參考范圍評(píng)價(jià)結(jié)果表

2.5稀釋倍數(shù)驗(yàn)證 AST、LDH、CK、CK-MB的相對(duì)偏差均小于允許總誤差的1/2,見表5。

表5 稀釋倍數(shù)驗(yàn)證

表6 Cobas8000 與 Vitro5600型分析儀比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果

2.6方法學(xué)比對(duì) 以Vitro5600型分析儀作為參考系統(tǒng)，Cobas8000型全自動(dòng)生化分析儀作為對(duì)比系統(tǒng)，結(jié)果顯示兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定的4個(gè)項(xiàng)目結(jié)果較為理想，可比性較好，均r2≥0.975，兩種方法在醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚小于CLIA′88允許誤差的1/2，準(zhǔn)確性可接受。見表6。

3 討 論

心肌酶譜是分布在心肌細(xì)胞中的具有催化心肌細(xì)胞代謝及心肌細(xì)胞電生理活動(dòng)調(diào)節(jié)功能的一類蛋白質(zhì)，臨床上常用心肌酶譜聯(lián)合cTn檢測(cè)、心電圖檢查及患者胸痛等癥狀綜合考慮對(duì)AMI病情做出全面、準(zhǔn)確診斷。除在AMI診斷及治療中的應(yīng)用之外，近年來心肌酶譜在其他疾病的發(fā)生發(fā)展中也起到極為重要的作用，有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。心肌酶譜作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目在臨床廣泛應(yīng)用，但相關(guān)的性能評(píng)價(jià)研究屈指可數(shù)。根據(jù)醫(yī)院《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》的要求[21-22]，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的主要性能進(jìn)行驗(yàn)證，本試驗(yàn)主要針對(duì)羅氏Cobas8000型分析儀檢測(cè)的CK、CK-MB、AST、LDH4項(xiàng)心肌酶譜進(jìn)行性能驗(yàn)證，主要對(duì)項(xiàng)目的準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、生物參考區(qū)間和最大稀釋倍數(shù)5項(xiàng)分析性能進(jìn)行了一定的探討。

正確度是指靶值與實(shí)際檢測(cè)值之間的一致性，二者之間的差異被稱之為“偏倚”，這一指標(biāo)亦可以用于系統(tǒng)誤差的衡量。本試驗(yàn)按照CLSI EP15-A2文件執(zhí)行正確度驗(yàn)證，采用國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心2018年第一次質(zhì)評(píng)標(biāo)本作為參考物質(zhì)。表1結(jié)果顯示4個(gè)項(xiàng)目偏倚均小于CLIA′88允許總誤差的1/2，正確度性能符合良好。同時(shí)通過與Vitro5600型分析儀的比對(duì)，表6結(jié)果顯示，4個(gè)項(xiàng)目均r2≥0.975，這提示Cobas8000與Vitro5600分析儀檢測(cè)結(jié)果較為相近，相關(guān)性良好，通過線性回歸方程計(jì)算出的偏倚數(shù)值、置信區(qū)間準(zhǔn)確性較高，急診與非急診心肌酶譜結(jié)果均可被臨床接受。

精密度是評(píng)價(jià)檢測(cè)值穩(wěn)定性的重要指標(biāo)之一，亦可用于反映系統(tǒng)隨機(jī)誤差。精密度的檢測(cè)是性能分析和評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)和前提，本試驗(yàn)的精密度檢測(cè)主要參照EP15-A2文件。表2結(jié)果顯示，檢測(cè)系統(tǒng)CK、CK-MB、AST、LDH 4個(gè)項(xiàng)目的批內(nèi)精密度和批間精密度均小于廠家聲明的精密度，批內(nèi)CV均小于1/4 CLIA′88，批間CV均小于1/3 CLIA′88。試驗(yàn)重復(fù)性好、隨機(jī)誤差小，具有良好的精密度，滿足性能評(píng)價(jià)要求。

線性范圍即標(biāo)本在未經(jīng)濃縮、稀釋等預(yù)處理的情況下可被直接測(cè)定出檢測(cè)物的范圍[23]，用于反映方法學(xué)性能的評(píng)價(jià)。本試驗(yàn)在驗(yàn)證試劑線性范圍時(shí)主要參考EP6-A2文件，共分析6個(gè)不同系列濃度的標(biāo)本。在線性驗(yàn)證時(shí)，受臨床實(shí)際情況限制，很難取得線性范圍上限的標(biāo)本，尤其是CK-MB高值標(biāo)本，本試驗(yàn)選擇了相對(duì)較高水平的標(biāo)本進(jìn)行了性能驗(yàn)證。表3結(jié)果顯示 AST、LDH、CK、CK-MB的r2分別為0.998 7、0.994 9、0.999 7、0.999 4，均大于0.95，線性驗(yàn)證符合要求。實(shí)際工作中常會(huì)遇到結(jié)果超過檢測(cè)項(xiàng)目線性范圍的情況，需稀釋標(biāo)本得出檢測(cè)結(jié)果，因此有必要進(jìn)行最大稀釋度的驗(yàn)證。本試驗(yàn)通過選擇接近線性范圍上限的高值標(biāo)本作最大稀釋度驗(yàn)證，以CLIA′88允許誤差的1/2為判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示四項(xiàng)在該范圍內(nèi)的標(biāo)本稀釋檢驗(yàn)結(jié)果可靠，符合臨床要求。

生物參考區(qū)間即參考值范圍，是95%“正?！敝笜?biāo)值范圍，實(shí)驗(yàn)室需保證所提供的生物參考區(qū)間正確適用。本試驗(yàn)在驗(yàn)證生物參考區(qū)間時(shí)主要參考C28-A2文件，并在項(xiàng)目檢測(cè)時(shí)將健康體檢者分為男女兩組，每組各20例進(jìn)行心肌酶譜生物參考區(qū)間的驗(yàn)證，結(jié)果表明僅有1例LDH不在廠商提供的生物參考區(qū)間內(nèi)，其余各項(xiàng)指標(biāo)的驗(yàn)證符合率及項(xiàng)目分組參考區(qū)間符合率均≥95%，結(jié)果可接受，可用于本實(shí)驗(yàn)室。

4 結(jié) 論

羅氏Cobas8000型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)心肌酶譜AST、LDH、CK、CK-MB 4個(gè)項(xiàng)目的正確度、精密度、線性范圍、生物參考區(qū)間、最大稀釋倍數(shù)及與強(qiáng)生Vitro5600型分析儀方法學(xué)比較等指標(biāo)均能達(dá)到衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的要求，能夠滿足醫(yī)院臨床檢測(cè)需求，可為臨床日常檢測(cè)、診療、科研數(shù)據(jù)分析提供準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)。