滇桂艾納香乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究

陳美安，姜建萍，馬雯芳

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530001)

滇桂艾納香為菊科艾納香屬植物滇桂艾納香Blumeariparia(Bl.) DC.的干燥全草，又名白花九里明、管芽、假東風(fēng)草，主要產(chǎn)于我國(guó)云南東南部和廣西西南部，在印度、緬甸、泰國(guó)、馬來西亞、中南半島、菲律賓、印度尼西亞、巴布亞新幾內(nèi)亞和所羅門群島也有分布。壯醫(yī)認(rèn)為其味微苦淡、性微溫，具有活血調(diào)經(jīng)、祛風(fēng)除濕、止血、利水等作用，用于經(jīng)期提前、產(chǎn)后流血不止、產(chǎn)后浮腫、不孕癥、陰瘡、風(fēng)濕骨痛等征[1-3]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)滇桂艾納香化學(xué)成分及藥理作用的研究報(bào)道較少?，F(xiàn)代藥理研究表明滇桂艾納香具有止血、縮宮、抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝、保護(hù)胃黏膜及抗菌等多種藥理作用[4]，從該藥材中分離得到的化學(xué)成分包括苷類、糖類、黃酮類、酚酸類、香豆素、甾體類和揮發(fā)油等，其中主要以黃酮類、酚酸類及揮發(fā)性成分為主[5-14]。滇桂艾納香作為廣西民間常用壯藥，其中藥復(fù)方制劑在臨床上主要作為婦科藥被廣泛使用，如婦血康顆粒、滇桂艾納香膠囊和伊血安顆粒等，常用于治療產(chǎn)后出血、瘀血阻滯所致的月經(jīng)量多、經(jīng)期延長(zhǎng)等婦科癥，且均具有較好的治療效果。另外，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[15-16]，滇桂艾納香藥材具有止血及縮宮活性，并通過活性篩選明確了其乙酸乙酯提取物是止血、縮宮活性的主要有效部位，但有效成分及作用機(jī)制尚不明確，而且很多具有生物活性的成分尚未被挖掘出來。

為了進(jìn)一步研究滇桂艾納香生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文采用反復(fù)硅膠色譜法和重結(jié)晶法對(duì)滇桂艾納香乙酸乙酯部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，分離得到11個(gè)化合物，通過理化方法和波譜數(shù)據(jù)對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，分別為：木栓酮(1)、木栓醇(2)、β-谷甾醇(3)、5-羥基-7,3′,4′-三甲氧基黃酮(4)、山奈酚(5)、木犀草素(6)、鄰苯二甲酸二丁酯(7)、原兒茶醛(8)、原兒茶酸(9)、咖啡酸(10)、水楊酸(11)。其中，化合物1、2、4、7首次從該植物中分離得到，為擴(kuò)大及充分開發(fā)利用其藥用資源提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥物與試劑

新鮮滇桂艾納香藥材采自廣西百色，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室朱意麟實(shí)驗(yàn)師鑒定為菊科艾納香屬植物滇桂艾納香Blumeariparia(Bl.) DC.的干燥全草，除雜，陰干，粉碎成粗粉，備用。

柱層析用硅膠(75～150 μm、48～75 μm，青島海洋化工廠)；薄層層析用硅膠G(青島海洋化工廠)；除體積分?jǐn)?shù)95%食用級(jí)酒精和純水外，其余試劑均為分析純，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 主要儀器

雙聚焦磁質(zhì)譜儀(ZAB-HS，英國(guó)VG公司)；Bruker Dre-500 MHz，Bruker AV-400 MHz核磁共振儀(瑞士Bruker)；YRT-3型熔點(diǎn)儀(天津大學(xué)精密儀器廠)；AJ150電子分析天平(瑞士梅特勒)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科技公貿(mào)有限公司)；優(yōu)普純水儀(四川優(yōu)普超純科技有限公司)。

2 提取與分離

取滇桂艾納香干燥藥材粗粉8.9 kg，用適量體積分?jǐn)?shù)70%乙醇浸泡3 d后，以10倍量體積分?jǐn)?shù)70%乙醇滲漉提取，收集滲濾液，減壓回收溶劑，得乙醇總提取物1 173.9 g。將乙醇總提取物溶解，分散于硅膠中，依次用石油醚(60～90 ℃)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇回流提取，回收溶劑，分別得石油醚浸膏(18.62 g)、氯仿浸膏(23.94 g)、乙酸乙酯浸膏(22.34 g)和正丁醇浸膏(154.92 g)。

取乙酸乙酯浸膏20.56 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇(100∶0 → 100∶1 → 80∶1 → 40∶1 → 25∶1 → 20∶1 → 15∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 2∶1 → 1∶1 → 0∶100，體積比，全文同)梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識(shí)，合并相似的組分，得8個(gè)組分Fr.1～Fr.8。Fr.1經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0 → 0∶100)梯度洗脫，得4個(gè)組分Fr.1-1～Fr.1-4；Fr.1-1經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-乙酸乙酯(5∶1 → 1∶10)梯度洗脫，得化合物7(20.2 mg)；Fr.1-3經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-乙酸乙酯(50∶1 → 1∶1)梯度洗脫，石油醚-乙酸乙酯(2∶1)重結(jié)晶得化合物1(13.5 mg)，氯仿-丙酮(1∶1)重結(jié)晶得化合物2(17.1 mg)；Fr.1-4經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮(50∶1 → 1∶2)梯度洗脫，丙酮重結(jié)晶得化合物3(9.6 mg)。Fr.3經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮(80∶1 → 0∶100)梯度洗脫，丙酮重結(jié)晶得化合物4(7.0 mg)。Fr.5經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(10∶1 → 1∶10)梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶得化合物5(11.5 mg)。Fr.6經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(100∶0 → 0∶100)和丙酮-甲醇(50∶1 → 0∶100)梯度洗脫，得3個(gè)組分Fr.6-1～Fr.6-3；Fr.6-1經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(30∶1 → 1∶50)梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶得化合物6(18.7 mg)；Fr.6-2經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-丙酮(20∶1 → 1∶20)梯度洗脫，氯仿-甲醇(1∶1)重結(jié)晶得化合物8(9.5 mg)；Fr.6-3經(jīng)硅膠柱層析分離，以氯仿-甲醇(10∶0 → 1∶10)梯度洗脫，丙酮重結(jié)晶得化合物9(7.4 mg)，乙酸乙酯重結(jié)晶得化合物10(18.1 mg)，丙酮-水(1∶3)重結(jié)晶得化合物11(8.2 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶(乙酸乙酯)，m.p. 260～262 ℃。EI-MS(m/z)：426 [M]+，分子式C30H50O。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 1.18(3H, s, H-28), 1.05(3H, s, H-30), 1.01(3H, s, H-29), 1.00(3H, s, H-27), 0.95(3H, s, H-26), 0.88(3H, s, H-25), 0.87(3H, s, H-23), 0.72(3H, s, H-24)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 22.3(C-1), 41.5(C-2), 213.3(C-3), 58.2(C-4), 42.1(C-5), 41.2(C-6), 18.2(C-7), 53.0(C-8), 37.4(C-9), 59.4(C-10), 35.3(C-11), 30.5(C-12), 39.6(C-13), 38.2(C-14), 32.3(C-15), 35.9(C-16), 30.0(C-17), 42.7(C-18), 35.6(C-19), 28.1(C-20), 32.7(C-21), 39.2(C-22), 6.8(C-23), 14.6(C-24), 17.9(C-25), 20.2(C-26), 18.6(C-27), 32.1(C-28), 35.0(C-29), 31.7(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17-18]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為木栓酮。

化合物2：白色鱗片狀結(jié)晶(乙酸乙酯)，m.p. 285～287 ℃。EI-MS(m/z)：428[M]+，分子式C30H52O。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 3.67(1H, s, H-3), 1.17(3H, s, H-28), 1.05(3H, s, H-27), 1.00(3H, s, H-29), 0.95(3H, s, H-30), 0.94(3H, s, H-24), 0.90(3H, s, H-23), 0.86(3H, s, H-25)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 15.7(C-1), 35.9 (C-2), 72.5(C-3), 49.0(C-4), 39.5(C-5), 41.6(C-6), 17.4(C-7), 53.0(C-8), 37.0(C-9), 61.2(C-10), 35.2(C-11), 30.5(C-12), 37.7(C-13), 38.2(C-14), 32.0(C-15), 35.4(C-16), 29.9(C-17), 42.7(C-18), 35.4(C-19), 28.0(C-20), 32.6(C-21), 39.1(C-22), 11.4(C-23), 16.2(C-24), 18.1(C-25), 18.5(C-26), 20.0(C-27), 32.0(C-28), 31.6(C-29), 34.9(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為木栓醇。

化合物3：無色針狀結(jié)晶(氯仿)，m.p. 137～139 ℃。Liebermann-Burchard呈陽(yáng)性，氯仿-濃硫酸反應(yīng)呈陽(yáng)性，α-萘酚-濃硫酸反應(yīng)呈陰性，推測(cè)為甾醇類化合物，與β-谷甾醇對(duì)照品共薄層色譜，在3種不同的展開溶劑系統(tǒng)中，兩者Rf值及顯色行為一致，與對(duì)照品混合后熔點(diǎn)不下降，并與文獻(xiàn)[19]報(bào)道一致，故鑒定化合物3為β-谷甾醇。

化合物4：黃色粉末狀結(jié)晶(氯仿)，m.p. 189～191 ℃。EI-MS(m/z)：328 [M]+，分子式C18H16O6。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 12.79(1H, s, 5-OH), 7.52(1H, dd,J=8.2, 2.0 Hz, H-6′), 7.34(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.98(1H, d,J=8.2 Hz, H-5′), 6.60(1H, s, H-3), 6.48(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.37(1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 3.99(3H, s, 7-OCH3), 3.96(3H, s, 4′-OCH3), 3.90(3H, s, 3′-OCH3)。13C-NMR(125 MHz, CDCl3): 165.8(C-2), 104.8(C-3), 182.7(C-4), 162.2(C-5), 98.3(C-6), 164.2(C-7), 93.0(C-8), 157.8(C-9), 105.7(C-10) ,124.0(C-1′) ,109.2(C-2′) ,152.6(C-3′), 149.5(C-4′), 111.5(C-5′), 120.3(C-6′), 56.2(7-OCH3), 56.5(4′-OCH3), 56.6(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為5-羥基-7, 3′, 4′-三甲氧基黃酮。

化合物5：黃色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 275～276 ℃。EI-MS(m/z)：286 [M]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.46(1H, s, 5-OH), 10.86(1H, s, 7-OH), 10.15(1H, s, 4′-OH), 9.41(1H, s, 3-OH), 8.01(2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.90(2H, d,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.43(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.17(1H, d,J=2.0 Hz, H-6)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 148.0(C-2), 137.1(C-3), 177.3(C-4), 162.5(C-5), 99.2(C-6), 165.5(C-7), 94.4(C-8), 158.2(C-9), 104.5(C-10), 123.7(C-1′), 130.6(C-2′, 6′ ), 116.3(C-3′, 5′), 160.5(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為山奈酚。

化合物6：黃色粉末狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 328～330 ℃。EI-MS(m/z)：286 [M]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.98(1H, s, 5-OH), 10.83(1H, s, 7-OH), 9.93(1H, s, 4′-OH), 9.43(1H, s, 3′-OH), 7.43(1H, d,J=8.1 Hz, H-6′), 7.40(1H, brs, H-2′), 6.89(1H, d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.68(1H, s, H-3), 6.44(1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 6.19(1H, d,J=2.1 Hz, H-6)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)： 163.9(C-2), 102.9(C-3), 181.7(C-4), 161.5(C-5), 98.8(C-6), 164.2(C-7), 93.9(C-8), 157.3(C-9), 103.7(C-10), 121.5(C-1′), 113.3(C-2′), 145.7(C-3′), 149.7(C-4′), 116.0(C-5′), 119.0(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為木犀草素。

化合物7：淡黃色油狀物(氯仿)。EI-MS(m/z)：278[M]+，分子式C16H22O4。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)：7.71(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-3, 6), 7.53(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-4, 5), 4.30(4H, t,J=6.4 Hz, H-8, 8′), 1.72(4H, m, H-9, 9′), 1.46(4H, m, H-10, 10′), 0.96(6H, t,J=7.2 Hz, H-11, 11′)。13C-NMR(125 MHz, CDCl3): 131.0(C-1, 2), 128.8(C-3, 6), 132.2(C-4, 5), 167.7(C-7′, 7″), 65.6(C-8′, 8″), 30.6(C-9′, 9″), 19.1(C-10′, 10″), 13.7(C-5′, 5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物8：無色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 151～152 ℃。EI-MS(m/z)：138[M]+，分子式C7H6O3。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 10.13(1H, s, 7-CHO), 9.70(1H, brs, 3-OH), 9.57(1H, brs, 4-OH), 7.27(1H, dd,J= 8.0, 1.6 Hz, H-6), 7.23(1H, d,J=1.6 Hz, H-2), 6.91(1H, d,J= 8.0 Hz, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 128.8(C-1), 114.3(C-2), 146.0(C-3), 152.3(C-4), 115.5(C-5), 124.5(C-6), 191.0(—CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物8為原兒茶醛。

化合物9：無色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 199～200 ℃。EI-MS(m/z)：154[M]+，分子式C7H6O4。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.35(1H, s, 7-COOH), 9.70(1H, s, 3-OH), 9.32(1H, s, 4-OH), 7.34(1H, d,J= 1.9 Hz, H-2), 7.30(1H, dd,J=8.2, 1.9 Hz, H-6), 6.80(1H, d,J= 8.2 Hz, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 121.8 (C-1), 116.6(C-2), 145.0(C-3), 150.1(C-4), 115.2(C-5), 122.0(C-6), 167.4(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物9為原兒茶酸。

化合物10：黃色粉末狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 208～210 ℃。EI-MS(m/z)：180[M]+，分子式C9H8O4。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.09(1H, s, 8-COOH), 9.39(1H, s, 4-OH), 9.19(1H, s, 3-OH), 7.40(1H, d,J=16.2 Hz, H-7), 7.01(1H, brs, H-2), 6.96(1H, d,J=7.8 Hz, H-6), 6.75(1H, d,J=7.8 Hz, H-5), 6.16(1H, d,J=16.2 Hz, H-8)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)：128.0(C-1), 115.0(C-2), 146.7(C-3), 149.2(C-4), 116.7(C-5), 122.0(C-6), 146.1(C-7), 116.4(C-8), 171.8(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物10為咖啡酸。

化合物11：無色針狀結(jié)晶(甲醇)，m.p. 158～160 ℃。EI-MS(m/z)：138[M]+，分子式C7H6O3。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 13.78(1H, s, 6-COOH), 11.42(1H, s, 2-OH), 7.80(1H, dd,J=1.6, 7.8 Hz, H-6), 7.52(1H, m, H-4), 6.97(1H, d,J= 7.5 Hz, H-3), 6.90(1H, m, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 113.9(C-1), 163.2(C-2), 118.1(C-3), 136.6(C-4), 120.0(C-5), 131.5(C-6), 173.5(—COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物11為水楊酸。

4 結(jié)果與討論

本研究對(duì)滇桂艾納香乙酸乙酯部位進(jìn)行了化學(xué)成分分離純化，鑒定了11個(gè)化合物，分別為：木栓酮(1)、木栓醇(2)、β-谷甾醇(3)、5-羥基-7,3′,4′-三甲氧基黃酮(4)、山奈酚(5)、木犀草素(6)、鄰苯二甲酸二丁酯(7)、原兒茶醛(8)、原兒茶酸(9)、咖啡酸(10)、水楊酸(11)。其中，化合物1、2、4、7首次從該植物中分離得到。

滇桂艾納香具有較好的止血、活血化瘀及縮宮活性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[28-30]滇桂艾納香藥材可顯著縮短小鼠凝血時(shí)間、出血時(shí)間和血漿復(fù)鈣時(shí)間，可增強(qiáng)子宮收縮，促進(jìn)子宮內(nèi)膜螺旋動(dòng)脈閉合，且可促進(jìn)子宮內(nèi)膜修復(fù)，調(diào)節(jié)子宮局部活性物質(zhì)。其中，從滇桂艾納香藥材中分離得到的原兒茶酸可縮短凝血時(shí)間，并能增強(qiáng)子宮收縮頻率，其作用與劑量成正相關(guān)；咖啡酸也具有縮短凝血時(shí)間及出血時(shí)間的作用，能明顯增強(qiáng)子宮收縮。另外，原兒茶醛、原兒茶酸、咖啡酸、水楊酸等是許多傳統(tǒng)中藥及其復(fù)方制劑的有效成分，具有止血或活血或雙向平衡調(diào)節(jié)作用[31-32]。因此，可以推斷這些化合物可能是滇桂艾納香藥材止血、活血作用的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一，而原兒茶醛、原兒茶酸和咖啡酸等酚酸類成分一直被作為該藥材及其中藥復(fù)方的藥效指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[33-36]。但是，分離出來的有些化合物是否具有該藥材作為婦科常用藥的相關(guān)活性以及如何發(fā)揮這些作用的機(jī)制，這是下一步要開展的工作，是研究的重點(diǎn)。當(dāng)然，這些化合物大多都具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等活性，而且滇桂艾納香在某些藥理活性方面也顯示出較大的藥用潛力，其作用相關(guān)性亦需進(jìn)一步探究。

本研究結(jié)果分離得到的化合物較少，未發(fā)現(xiàn)新化合物或新活性成分，但也在一定程度上豐富了滇桂艾納香的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)今后滇桂艾納香的合理開發(fā)與利用具有重要的指導(dǎo)意義。在后期工作中，將根據(jù)這些化合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行相關(guān)藥理活性篩選及作用機(jī)制研究，力爭(zhēng)從該植物中發(fā)現(xiàn)更多具有藥效的化合物，以期闡明其作用與滇桂艾納香傳統(tǒng)功效的相關(guān)性。