Vimentin在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與臨床預(yù)后的關(guān)系

原慶會(huì) 何偉

肝細(xì)胞癌是我國常見的惡性腫瘤之一，居全球范圍內(nèi)的腫瘤相關(guān)致死性疾病第3位[1-2]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，波形蛋白(Vimentin)與子宮內(nèi)膜腺癌、三陰型乳腺癌(Trinegative breast cancer，TNBC)等惡性腫瘤病情進(jìn)展相關(guān)[3-5]，但其與肝細(xì)胞癌臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系的研究較少。本研究就Vimentin在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與臨床預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行了探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

一、病例資料

經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取2011年1月—2014年10月我院確診并收治的88例肝細(xì)胞癌患者癌組織及癌旁正常組織作為研究組和對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌；②病例資料詳細(xì)；③入組前未進(jìn)行任何抗癌治療；④所有患者自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①依從性不好；②合并胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤；③發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。88例肝細(xì)胞癌患者中，男性65例，女性23例；年齡26～78歲，≥52歲患者53例，<52歲患者35例；腫瘤直徑≥5.0cm患者51例，腫瘤直徑<5.0cm患者37例；有肝硬化70例，無肝硬化18例；TNM分期：I、II期患者53例，III、IV期患者35例；肺功能分級(jí)：A、B級(jí)患者79例，C級(jí)患者9例。

二、主要試劑

兔抗人Vimentin多克隆抗體(杭州華安生物技術(shù)有限公司)；免疫組織化學(xué)SP試劑盒(深圳子科生物科技有限公司)；蘇木精染色液(南昌雨露實(shí)驗(yàn)器材有限公司)；生物素標(biāo)記過氧化物酶(甘肅益生祥生物技術(shù)有限公司)；中性樹膠(上海聯(lián)碩生物科技有限公司)；DAB顯色試劑盒(北京雅杰寶生物技術(shù)有限公司)；通用型二抗(河南沃瑞生物科技有限公司)。

三、研究方法

采用免疫組化染色法檢測研究組和對照組中Vimentin蛋白表達(dá)水平。操作如下：將研究組和對照組組織固定，脫水，石蠟包埋成塊。將組織切成4 μm的連續(xù)切片，依次脫蠟、抗原修復(fù)、過氧化物酶阻斷，癌組織和正常組織分別滴加第一抗體Vimentin(濃度1∶100)4℃孵育過夜，再滴加一滴通用型二抗，37℃孵育30 min，再經(jīng)PBS漂洗，經(jīng)顯色、復(fù)染、水洗藍(lán)化，透明，干燥，封片，顯微鏡下觀察Vimentin表達(dá)，然后根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占百分比對Vimentin表達(dá)進(jìn)行綜合評分[4]，兩項(xiàng)評分相乘為最終得分：陰性為0～1分(-)，弱陽性為2～4分(+)，陽性為5～7分(++)，強(qiáng)陽性為8分(+++)。最終得分≤4分為低表達(dá)，最終得分>4分為高表達(dá)。治療結(jié)束后隨訪3年，每3個(gè)月采用電話及門診復(fù)查相結(jié)合的方式隨訪1次。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究通過SPSS 23.0軟件采用卡方檢驗(yàn)比較研究組和對照組中Vimentin蛋白表達(dá)水平，采用卡方檢驗(yàn)比較不同臨床病理特征的肝細(xì)胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達(dá)水平，采用Kaplan-Meier法分析Vimentin蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、研究組和對照組中Vimentin蛋白表達(dá)水平

Vimentin蛋白呈棕黃色或棕褐色顆粒表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，Vimentin蛋白在研究組中陽性表達(dá)率顯著高于對照組(P<0.05)，見表1、圖1。

表1 研究組和對照組中Vimentin蛋白表達(dá)水平

二、不同臨床病理特征肝細(xì)胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達(dá)水平

性別、AFP 指標(biāo)、攜帶乙肝病毒程度、年齡、門靜脈侵犯、腫瘤直徑、肝功能分級(jí)、肝硬化程度不同的肝細(xì)胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達(dá)水平無顯著差別(P>0.05)；低分化肝細(xì)胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達(dá)水平明顯高于中高分化肝細(xì)胞癌患者(P<0.05)；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期肝細(xì)胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達(dá)水平明顯高于Ⅲ、Ⅳ期肝細(xì)胞癌患者(P<0.05)，見表2。

圖1 A為研究組中Vimentin蛋白的陽性表達(dá)；B為對照組中Vimentin蛋白的陰性表達(dá)

表2 不同臨床病理特征肝細(xì)胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達(dá)水平

三、Vimentin蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

Vimentin高表達(dá)患者的總體生存率明顯低于低表達(dá)患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Log-Rankχ2=43.089,P<0.001)(圖2)。

圖2 Vimentin高表達(dá)和低表達(dá)組生存曲線

討 論

近年來隨著早期診療技術(shù)的發(fā)展，肝細(xì)胞癌總體療效明顯提高，但肝細(xì)胞癌發(fā)病隱匿，術(shù)后易復(fù)發(fā)，患者5年生存率仍較低。因此研究肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的可靠評估指標(biāo)對提升患者預(yù)后尤為重要。

Vimentin是中間絲蛋白家族的成員之一，可參與腫瘤細(xì)胞增殖、遷移，同時(shí)還具有維持細(xì)胞完整性、抵御外界應(yīng)急損傷的作用[3]。李新軍等[6]研究發(fā)現(xiàn)Vimentin與TNBC臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)，并與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系密切，提示Vimentin與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化可能參與了TNBC進(jìn)展。周博鑫等[7]研究發(fā)現(xiàn)Vimentin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達(dá)明顯增高，其表達(dá)與臨床TNM分期有關(guān)，且在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌侵襲、轉(zhuǎn)移中扮演重要角色。趙靜等[8]發(fā)現(xiàn)Vimentin主要表達(dá)于間質(zhì)組織以及部分宮頸癌細(xì)胞中，且Vimentin表達(dá)與宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、局部侵襲以及腫瘤細(xì)胞分化程度有相關(guān)性，但Vimentin表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑以及臨床分期無相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，Vimentin蛋白在肝細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，提示Vimentin可能參與了肝細(xì)胞癌的發(fā)生。分析Vimentin表達(dá)與肝細(xì)胞癌各臨床病理特征參數(shù)的關(guān)系顯示腫瘤分化、TNM分期不同的患者肝細(xì)胞癌組織中Vimentin蛋白表達(dá)水平差別顯著，提示Vimentin在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤分化、TNM分期呈相關(guān)性。進(jìn)一步分析Vimentin表達(dá)水平與肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的關(guān)系顯示Vimentin高表達(dá)患者的總體生存率明顯低于低表達(dá)患者，提示Vimentin表達(dá)水平與肝細(xì)胞癌患者預(yù)后呈相關(guān)性，Vimentin檢測對肝細(xì)胞癌病情進(jìn)展有一定預(yù)測意義。

綜上所述，Vimentin在肝細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，Vimentin的表達(dá)水平與腫瘤分化、TNM分期及肝細(xì)胞癌預(yù)后呈相關(guān)性。但研究時(shí)間短，納入人數(shù)少，有待進(jìn)一步研究。