車前草和荊芥在簡易庫與冷藏庫中的貯藏期研究?

郝美玲，吳 翠，徐 博，徐 靚，李卓俊，巢志茂△

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗研究院，呼和浩特 010020；2.中國中醫(yī)科學院中藥研究所，北京 100700；3.國家中藥材產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系貯藏與包裝崗位，北京 100700)

中藥材講究貯藏的歷史悠久，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》便有對中藥材進行貯藏養(yǎng)護的記載。從漢代到清朝，醫(yī)家均重視中藥材的貯藏，且歷代相承與發(fā)展[1]。20世紀70年代開始，有學者對中藥材的貯藏進行科學研究，但是對于中藥材貯藏的研究遠滯后于中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，而貯藏過程影響中藥材質(zhì)量的研究則少見報道[2]。貯藏是中藥材質(zhì)量全過程控制系統(tǒng)的重要環(huán)節(jié)，貯藏條件是否適宜直接影響中藥材的質(zhì)量和療效[3]。中藥材貯藏不當，易出現(xiàn)霉變、色變、蟲蛀、酸敗等多種變質(zhì)現(xiàn)象，隨之而來的是化學成分的減少、增多或消失，最終影響藥材的質(zhì)量與臨床療效[4]。

已有學者對中藥材貯藏過程中理化性質(zhì)變化進行研究，隨著貯藏時間的延長，牛膝的色澤加深，5-羥甲基糠醛(5-HMF)的含量顯著升高，而有效成分β-蛻皮甾酮的含量顯著下降并低于藥典規(guī)定，從而提示牛膝的有效貯藏期為2年[5]；龍眼肉久貯則出現(xiàn)糖分析出、5-HMF含量升高的現(xiàn)象[6]；何首烏、白芷、三七等根類藥材的色澤有所加深，但是化學成分含量在33個月的貯藏后仍符合藥典的規(guī)定[7]。由此可見，觀察中藥材在貯藏過程中的外觀變化，測定其中化學成分含量的動態(tài)變化，對于控制中藥材的質(zhì)量，制定合理的中藥材貯藏時間具有重要的參考意義和實用價值。

車前草是車前科植物車前PlantagoasiaticaL.或平車前P.depressaWilld.的干燥全草，具有清熱利尿通淋、祛痰涼血解毒的功效[8]，以單味藥治療慢性乙型肝炎取得了很好的療效[9]，配伍其他利水滲濕藥，可以治療慢性腎炎[10]。荊芥為唇形科植物荊芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥地上部分，具有解表散風、透疹消瘡的功效[11]。對于慢性支氣管炎[12]、慢性肥厚性咽炎[13]具有顯著療效。

車前草和荊芥都是全草類中藥材，將其貯藏于簡易庫和冷藏庫，定期觀察色澤等外觀性狀，測定其中指標性成分的含量，分析理化性質(zhì)隨貯藏時間延長的動態(tài)變化，為二者貯藏條件的改善，為貯藏期的制定提供實驗與科學依據(jù)，并為全草類中藥材的貯藏技術(shù)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑

胡薄荷酮(批號111706-201205，純度99.8%)、大車前苷(批號111914-201102，純度90.2%)均購自中國食品藥品檢定研究院。水為娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)，乙和甲醇為色譜純(Thermo Fisher Scientific公司)。

1.2 主要儀器

Waters E 2695 超高效液相色譜儀(配備2998二極管陣列檢測器)(美國Waters公司)；XS105 Dual Range型電子分析天平(感量0.01 mg，Mettler Toledo儀器系統(tǒng)有限公司)；Ohaus CP224C型電子天平(感量0.1 mg)(奧豪斯(上海)儀器有限公司)；單道可調(diào)量程移液器(艾本德(上海)國際貿(mào)易有限公司)；KH7200E型超聲波清洗器(250 W，50 kHz，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)；DHG-9063 A電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)；DFD-700型號水浴鍋(河南省泰斯特儀器有限公司)；比澤爾5P系統(tǒng)壓縮機(比澤爾制冷技術(shù)(中國)有限公司)；高翔DL60冷風機(浙江高翔工貿(mào)有限公司)。

1.3 貯藏庫的建立

根據(jù)實驗需要分別建立了簡易和冷藏倉庫，簡易庫為中國中醫(yī)科學院中藥研究所1016實驗室隔開的小倉庫，未調(diào)節(jié)溫濕度。冷藏庫則有冷風機控制系統(tǒng)，采用密封保存控制藥材包裝中的濕度，為恒溫恒濕庫。每天上午10點記錄溫濕度，以每月溫度、濕度的最高值、平均值、最低值繪制成圖(結(jié)果見圖1)。

這個我往日可冇想到。一下作了難，不曉得說么事好。喑了好半天，我決絕地說：“不會講中國話也不怕，就是個啞巴也認娘的！”

圖1 簡易庫和冷藏庫的溫度、濕度變化比較

1.4 藥材

車前草、荊芥購于河北省安國藥材市場，經(jīng)中國中醫(yī)科學院中藥研究所巢志茂研究員鑒定車前草為平車前PlantagodepressaWilld.的干燥全草，荊芥為唇形科植物荊芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥地上部分，系當年收獲的藥材切制品。

預留出適量車前草和荊芥作為0月的樣品，隨后將二者分裝于透氣的編織袋中，直接放置于簡易庫中；另在透氣的編織袋外套上密閉的13絲聚乙烯(PE)樹脂袋，放置于冷藏庫中貯藏。從貯藏日起第3、9、15、21、27個月時，從庫中分期分批地取出一些樣品，立即進行測定。

1.5 性狀觀察

1.5.1 色澤觀察 將從簡易庫和冷藏庫中取出的適量樣品，平鋪于白色A4紙上，在日光下觀察樣品的色澤并記錄結(jié)果(見表1和表2)。

1.5.2 其他外觀 取出樣品時，觀察是否出現(xiàn)質(zhì)地黏連、蟲蛀、霉變、酸敗等外觀現(xiàn)象。

1.6 水分測定

1.6.1 烘干法 表1示，取車前草樣品適量，粉碎，過二號篩，按2015版《中國藥典》通則0832水分測定項下規(guī)定的第二法即烘干法[14]進行測定。

1.6.2 甲苯法 表2示，取薄荷樣品適量，粉碎過二號篩，按2015版《中國藥典》通則0832水分測定項下規(guī)定的第四法即甲苯法[15]進行測定。

1.7 車前草中大車前苷的含量測定

按2015版《中國藥典》車前草項下大車前苷的含量測定方法[8]進行。

1.7.1 色譜條件 Hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%甲酸溶液(17:83)為流動相，檢測波長為330 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進樣量為10 μL。

1.7.2 對照品溶液的制備 精密稱定大車前苷對照品10.62 mg，置于10 mL棕色量瓶中，加60%甲醇溶解并加到刻度線，制得濃度為1.062 mg·mL-1的對照品溶液，將此溶液稀釋10倍，得濃度為0.1062 mg·mL-1的對照品溶液，備用。

1.7.3 供試品溶液的制備 取樣品粉碎，過二號篩取粉末1 g，精密稱定置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，取出放冷再次稱定重量，用60%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻、濾過，取續(xù)濾液，過0.22 μm的微孔濾膜即得(對照品與供試品的HPLC色譜圖見圖2)。

注：A.對照品；B.供試品；1.大車前苷圖2 對照品和車前草供試品HPLC圖

1.7.4 含量測定 表1示，按“1.7.3”項下方法制備供試品溶液，按“1.7.1”項下色譜條件測定，采用外標一點法計算干品中含量。

表1 簡易庫與冷藏庫貯藏車前草理化指標比較

1.8 荊芥中揮發(fā)油的含量測定

按照2015版《中國藥典》通則2204揮發(fā)油測定法[14]項下規(guī)定進行測定。

1.8.1 方法 取樣品粉碎，過二號篩取粉末100 g，置于500 mL平底燒瓶中，加蒸餾水300 mL，再加入玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時為止。置電熱套中緩緩加熱至沸，并保持微沸約5 h，至測定器中油量不再增加停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達刻度0線上面5 mm處為止。放置1.5 h，開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量。

1.8.2 結(jié)果 表2示，計算供試品中揮發(fā)油的含量(mL·100 g-1)。

1.9 荊芥中胡薄荷酮的含量測定

按2015版《中國藥典》荊芥項下胡薄荷酮的含量測定方法[11]進行。

1.9.1 色譜條件 Hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水(80:20)為流動相，檢測波長為252 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃，進樣量為10 μL。

1.9.2 對照品溶液的制備 精密稱定胡薄荷酮9.56 mg，置于1000 mL棕色量瓶中，加適量甲醇溶解，并加至刻度線，制得濃度為9.560 μg·mL-1的對照品溶液。

1.9.3 供試品溶液的制備 取樣品適量，粉碎過二號篩取粉末約0.5 g，精密稱定置具塞錐形瓶中，加甲醇10 mL，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)20 min，濾過，濾渣和濾紙再加甲醇10 mL，同法超聲處理1次，濾過加甲醇適量洗滌2次，合并濾液和洗液轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度搖勻即得(對照品和供試品的HPLC色譜圖見圖3)。

注：A.對照品；B.供試品；1.胡薄荷酮圖3 對照品和荊芥供試品HPLC圖

1.9.4 含量測定 表2示，按“1.9.3”項下方法制備供試品溶液，按“1.9.1”項下色譜條件測定，采用外標一點法計算干品中含量。

表2 簡易庫與冷藏庫貯藏荊芥理化指標比較

2 結(jié)果

2.1 貯藏庫的溫濕度

圖1示，冷藏庫保持3.5～5.0 ℃的恒溫，65%～75%相對濕度的恒濕環(huán)境。簡易庫在27個月中，經(jīng)歷了3個夏天、2個冬天的過程。溫度值最低為15 ℃，最高為42 ℃；濕度值最高為74%RH，最低為30%RH。

2.2 性狀與水分

表1示，對于車前草，不論在簡易庫還是冷藏庫，整個貯藏過程中色澤始終為灰綠色，沒有觀察到明顯的變化。簡易庫中的車前草在21個月時開始出現(xiàn)輕度易碎現(xiàn)象，而冷藏庫中未出現(xiàn)易碎現(xiàn)象。在27個月的貯藏過程中，除易碎情況發(fā)生外，未見其他任何的外觀改變。水分含量出現(xiàn)了一定的波動，冷藏庫中藥材的水分含量比同期簡易庫中藥材的水分要高。冷藏庫到第27個月時，水分含量達到13.17%，超出藥典“不得高于13.0%”的規(guī)定，而在簡易庫或其他時間段的冷藏庫中，貯藏都處于正常范圍，提示車前草在冷藏庫的貯藏時間不宜過長。

表2示，對于荊芥在兩庫中色澤始終為淡黃綠色，在貯藏過程中也未見明顯變化。在27個月的貯藏過程中，未見任何外觀性狀的改變。冷藏庫貯藏后水分含量也比貯藏于簡易庫的含量要高，均符合藥典“不得高于12.0%”規(guī)定，但在第27個月時的水分含量較之前出現(xiàn)了較大升高現(xiàn)象。

2.3 有效成分的含量

表1示，對于車前草來說，無論是簡易庫還是冷藏庫，貯藏后大車前苷的含量，從0月起始的0.091%，到9月份最低的0.076%和15月份最高的0.096%，基本維持在一定的含量區(qū)間范圍內(nèi)，整體保持穩(wěn)定。

表2示，對于荊芥揮發(fā)油的含量來說，經(jīng)簡易庫和冷藏庫貯藏后均能維持在0.3%以上，未見隨貯藏時間的延長出現(xiàn)明顯的變化，更未出現(xiàn)揮發(fā)性成分揮散的現(xiàn)象。對于荊芥中胡薄荷酮的含量來說，在冷藏庫中的含量介于0.065%至0.076%的范圍內(nèi)，始終高于中國藥典“不得低于0.02%”的規(guī)定。同樣在簡易庫貯藏27個月，也能保持在這樣的規(guī)定值范圍內(nèi)。不過第27個月時的含量，從0月原始的0.066%下降至0.026%，且比第21個月份時的含量也下降明顯。

3 討論

在貯藏環(huán)節(jié)，影響中藥材質(zhì)量的因素主要是溫度和濕度[16]。通過嚴格控制溫濕度的冷藏庫和不控制溫濕度的簡易庫比較，對于車前草和荊芥均未見明顯的區(qū)別，所以對于沒有特別要求的全草類藥材來說，貯藏于簡易庫中的成本更低。

對于車前草來說，冷藏庫中貯藏27個月時水分含量出現(xiàn)超標現(xiàn)象，在簡易庫貯藏21個月起出現(xiàn)輕度的易碎現(xiàn)象，說明車前草無論是置于冷藏庫還是簡易庫，都不適合較長的時間，建議貯藏期不超過2年。

對于荊芥來說，冷藏庫中貯藏27個月時水分含量也出現(xiàn)一定程度的升高現(xiàn)象，在簡易庫貯藏27個月時出現(xiàn)胡薄荷酮含量明顯下降的現(xiàn)象，說明對于荊芥無論是置于冷藏庫還是簡易庫，也不適合較長的時間，同樣建議貯藏期不超過2年。

從有效成分含量角度講，大車前苷是車前草的有效成分之一，具有抗炎[17]、抑制食管鱗狀細胞癌的作用[18]。胡薄荷酮是荊芥發(fā)揮抗炎[19]、抗組胺作用[20]的物質(zhì)基礎，揮發(fā)油則是評價荊芥質(zhì)量優(yōu)劣的重要指標。在整個27個月的貯藏過程中，不論是簡易庫還是冷藏庫，這些有效成分的含量均未見明顯的下降，保持基本的穩(wěn)定。

對于藥材在冷藏庫中水分含量上升的現(xiàn)象，是因為冷藏庫的濕度大，長期維持在70%RH左右的濕度中，這就需要強調(diào)包裝材料的重要性，需要提高包裝袋的密閉性。簡易庫中的包裝材料是透氣的編織袋，由于濕度或高或低，整體濕度較低，最為干燥的時候達到30%RH，這種較長時間的低濕度環(huán)境，應該是造成車前草在第21個月后出現(xiàn)輕度易碎現(xiàn)象的主要原因。所以在簡易庫中貯藏時，如果準備貯藏足夠長的時間，也應該采用密閉性較好的包裝材料。