神經(jīng)梅毒患者血清和腦脊液中的CXCL13和TH1TH2細(xì)胞因子的臨床意義

喬雨林 向文強 王磊

梅毒是一種由梅毒螺旋體感染引起的慢性、系統(tǒng)性、全身性的傳播疾病，主要通過性接觸直接傳播，部分為間接接觸傳染、輸血、哺乳及胎盤也可傳播。2007年，世界衛(wèi)生組織估計全世界每年有1 200萬新的梅毒螺旋體感染發(fā)生率[1]。神經(jīng)梅毒是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，由于梅毒螺旋體侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致腦膜、腦和脊髓受累。梅毒的任何疾病階段都可能發(fā)生梅毒侵襲中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致一些患者出現(xiàn)神經(jīng)梅毒。10%～25%未經(jīng)治療的梅毒患者會發(fā)展為神經(jīng)性梅毒[2]。神經(jīng)梅毒的臨床表現(xiàn)多種多樣，通常無特異性，常導(dǎo)致誤診和漏診[2,3]。神經(jīng)性梅毒治療晚期神經(jīng)性梅毒的療效非常差。然而，常規(guī)治療有可能在早期治愈梅毒。因此，臨床醫(yī)師應(yīng)重視神經(jīng)梅毒的診斷、治療和預(yù)后，并嘗試在早期診斷和治療梅毒，以改善其預(yù)后。神經(jīng)性梅毒的發(fā)病機制尚不清楚，免疫反應(yīng)(尤其是細(xì)胞免疫)一直是神經(jīng)性梅毒發(fā)病機制研究的熱點。有研究指出，對梅毒螺旋體的免疫應(yīng)答在梅毒螺旋體感染后梅毒的發(fā)生和恢復(fù)中起著重要作用[4]。T細(xì)胞分泌的趨化因子和細(xì)胞因子具有特異的免疫調(diào)節(jié)和殺傷活性，在抗梅毒螺旋體感染中起著關(guān)鍵作用。目前細(xì)胞因子在早期診斷方面仍存在爭議。本研究以神經(jīng)梅毒患者為研究對象，并根據(jù)其癥狀對其進(jìn)行進(jìn)一步劃分，旨在探討神經(jīng)梅毒患者血清和腦脊液中的CXCL13和TH1TH2細(xì)胞因子的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年3～9月我院收治的30例無癥狀神經(jīng)梅毒患者、30例輕癱性神經(jīng)梅毒患者為研究對象，并選取同期入院體檢的30例健康人群作為對照。3組患者年齡、性別比、體重等基線資料差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 3組受試者基線資料比較 n=30

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的初診神經(jīng)梅毒患者；②既往無診斷及治療史；③無皮疹史；④臨床資料完整；⑤同意并配合本次研究。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕、產(chǎn)婦；②合并其他免疫疾病患者；③感染其他性病患者；④合并惡性腫瘤患者；⑤研究過程存在不潔性生活史者；⑥臨床資料不全者。

1.3 研究方法

1.3.1 血液、腦脊液樣本收集：無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組受試者取血液、腦脊液樣本，健康對照組僅取血液樣本。血液樣本搜集：于清晨取受試者空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血2 ml，在3 000 r/min下離心5 min，收集血清，保存于4℃的冰箱中待測。腦脊液樣本搜集：患者取側(cè)臥位，背部與床面保持垂直，雙手緊抱雙膝，貼近腹部保證脊柱盡量后凸，穿刺點取兩側(cè)骼嵴連線中點處；對皮膚進(jìn)行常規(guī)消毒，將穿刺包打開，戴無菌手套后鋪洞巾，用2%的利多卡因(辰欣藥業(yè)股份有限公司)進(jìn)行逐層浸潤麻醉；以左手固定皮膚，以右手持穿刺針垂直背部緩慢刺入4～6 cm，感到落空感后緩慢抽出針芯；觀察到腦脊液流后連接測壓管，記錄壓力；撤去測壓管，收集3～5 ml，插入針芯將穿刺針緩慢拔出，針眼處覆蓋消毒紗布。

1.3.2 細(xì)胞因子CXCL13、TH1、TH2水平測定：采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血液、腦脊液樣本中細(xì)胞因子CXCL13、TH1、TH2表達(dá)水平，ELISA試劑盒購自上海啟明生物科技有限公司(中國上海)。根據(jù)說明書要求檢測所有細(xì)胞因子，測定450 nm波長處吸光度值，細(xì)胞因子含量按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算。

2 結(jié)果

2.1 3組患者血清中細(xì)胞因子CXCL13水平比較 無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清CXCL13水平高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清CXCL13水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

組別CXCL13健康對照組 30.18±4.33無癥狀神經(jīng)梅毒組140.23±22.31?輕癱性神經(jīng)梅毒組141.12±23.06?F值22.175P值<0.05

注：與健康對照組比較，*P<0.05

2.2 3組患者血清中細(xì)胞因子TH1水平比較 無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組患者血清TH1水平低于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組患者血清TH1水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

組別TH1健康對照組 0.254±0.030無癥狀神經(jīng)梅毒組0.225±0.026?輕癱性神經(jīng)梅毒組0.225±0.024?F值5.117P值<0.05

注：與健康對照組比較，*P<0.05

2.3 3組患者血清中細(xì)胞因子TH2水平比較 無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清TH2水平高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清TH2水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

2.4 梅毒患者腦脊液中細(xì)胞因子CXCL13水平比較 輕癱性神經(jīng)梅毒組受試者腦脊液中CXCL13水平高于無癥狀神經(jīng)梅毒組(P<0.05)。見表5。

組別TH2健康對照組 0.220±0.019無癥狀神經(jīng)梅毒組0.242±0.022?輕癱性神經(jīng)梅毒組0.240±0.021?F值4.126P值<0.05

注：與健康對照組比較，*P<0.05

組別CXCL13無癥狀神經(jīng)梅毒組154.60±25.29輕癱性神經(jīng)梅毒組248.31±30.06t值10.263P值<0.05

2.5 梅毒患者腦脊液中細(xì)胞因子TH1、TH2水平比較 輕癱性神經(jīng)梅毒組受試者腦脊液中TH1水平低于無癥狀神經(jīng)梅毒組、TH2水平高于無癥狀神經(jīng)梅毒組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表6。

組別TH1TH2無癥狀神經(jīng)梅毒組0.233±0.0280.230±0.022輕癱性神經(jīng)梅毒組0.208±0.0270.257±0.023t值5.3695.689P值<0.05<0.05

3 討論

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種性傳播疾病，可造成多器官的損害。梅毒最早出現(xiàn)在15世紀(jì)末的歐洲，人們普遍認(rèn)為它是由哥倫布的船員從新大陸運過來的。最初，梅毒被描述為一種臨床實體，當(dāng)時一種通常被稱為“大痘”或“邪惡痘”的疾病在歐洲得到承認(rèn)，它的早期病死率高達(dá)25%[2]。然而，梅毒的流行病學(xué)是復(fù)雜的，該病的發(fā)病率受公共衛(wèi)生政策以及社會、經(jīng)濟和政治因素的影響。1999年，北美新增約107 000例，西歐新增136 000例，撒哈拉以南非洲新增380萬例，南亞新增400萬例，拉丁美洲新增290萬例(世界衛(wèi)生組織，2001年)[3]。青霉素的現(xiàn)成性和機體對這種抗生素的敏感性相結(jié)合，使得美國梅毒的年發(fā)病率下降了36倍，從1943年的72例/10萬降至2000年的2.1例/10萬；然而，2008年的梅毒發(fā)病率上升了114%，達(dá)到4.5例/10萬。梅毒的發(fā)病率隨時間發(fā)生變化，約每10年出現(xiàn)一次局部峰值[2]。20世紀(jì)70年代，同性戀和雙性戀男性的風(fēng)險明顯增加；然而，隨著艾滋病時代的到來，他們采用安全的性技術(shù)，導(dǎo)致了這一風(fēng)險組梅毒發(fā)病率的顯著下降。根據(jù)癥狀，神經(jīng)梅毒分為無癥狀和有癥狀，根據(jù)受累組織可分為早期和晚期，早期神經(jīng)性梅毒是指梅毒螺旋體只涉及腦膜和相關(guān)血管，而晚期神經(jīng)性梅毒涉及腦實質(zhì)和脊髓，本研究以無癥狀神經(jīng)梅毒、輕癱性神經(jīng)梅毒患者為研究對象。

由于神經(jīng)梅毒的實驗室診斷困難，需要新的標(biāo)記物，CSF-B細(xì)胞趨化因子(c-x-c motif)配體13(cxcl13)作為一種標(biāo)記物被廣泛應(yīng)用。CXCL13是CXC趨化因子家族的成員，主要由次級淋巴組織、淋巴結(jié)和樹突細(xì)胞分泌，反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染后的免疫反應(yīng)[4]。CXCL13在富含B淋巴細(xì)胞的腦脊液中被證明是升高的。腦脊液CXCL13對神經(jīng)疏螺旋體病的敏感性高于已建立的診斷標(biāo)記物，如腦脊液多細(xì)胞增多癥和疏螺旋體特異性抗體[5]。梅毒性腦膜炎患者的腦脊液中也觀察到大量的B淋巴細(xì)胞[6]。CXCL13決定B細(xì)胞在淋巴組織中的歸巢和運動，在B細(xì)胞向腦脊液遷移中起著關(guān)鍵作用[7]。因此，研究腦脊液 CXCL13作為神經(jīng)梅毒的診斷標(biāo)志物是有必要的。研究表明，腦脊液Cxcl13濃度對HIV感染患者的神經(jīng)性梅毒的診斷特別有用，而這與腦脊液的多細(xì)胞增生和HIV疾病的標(biāo)志物無關(guān)[5]。趨化因子是一些細(xì)胞分泌的一組細(xì)胞因子。研究表明，腦脊液CXCL13濃度可能有助于診斷有癥狀/無癥狀的神經(jīng)梅毒，有效治療后腦脊液CXCL13含量降低，提示腦脊液CXCL13可用于臨床療效評價[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清CXCL13水平均高于健康對照組(P<0.05)；無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清CXCL13水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而輕癱性神經(jīng)梅毒組受試者腦脊液中CXCL13水平高于無癥狀神經(jīng)梅毒組(P<0.05)，提示神經(jīng)梅毒患者CXCL13水平升高，且這一現(xiàn)象在輕癱性神經(jīng)梅毒患者腦脊液中更為明顯。

神經(jīng)侵襲性、宿主細(xì)胞免疫性和HIV感染與神經(jīng)性梅毒的發(fā)生有關(guān)。在梅毒螺旋體感染后，對梅毒螺旋體的免疫反應(yīng)在神經(jīng)性梅毒的發(fā)生發(fā)展和恢復(fù)中起著重要作用，特別是對中樞神經(jīng)系統(tǒng)中梅毒螺旋體的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)[9,10]。在人體免疫系統(tǒng)中，T淋巴細(xì)胞主要負(fù)責(zé)殺滅梅毒螺旋體，保護(hù)人體免受感染。T淋巴細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞因子，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和殺傷作用，在抗梅毒螺旋體感染中起重要作用。研究表明，免疫細(xì)胞對梅毒螺旋體的反應(yīng)與TH1和TH1細(xì)胞因子有關(guān),TH1淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，并且它們的分泌可能由TH2淋巴細(xì)胞的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)[11]。Th1細(xì)胞因子包括IL-2、IL-12和IFN-γ，TH2細(xì)胞因子包括IL-6、IL-10等。在梅毒和其他細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)的疾病中，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在宿主防御感染因子中起著關(guān)鍵作用。在一個研究中，研究人員提出了TH1向TH2轉(zhuǎn)移的假設(shè)來解釋梅毒的進(jìn)展，他們推測，進(jìn)入人體后的梅毒螺旋體可能誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)(TH1樣反應(yīng))，可能殺死大量梅毒螺旋體，但隨后單核巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞被激活，產(chǎn)生大量抑制TH1反應(yīng)和選擇性激活TH2反應(yīng)的前列腺素[12]。TH2細(xì)胞因子的產(chǎn)生進(jìn)一步抑制了TH1反應(yīng)，導(dǎo)致TH1抑制的惡化[13]。本研究中，無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清TH1水平低于健康對照組(P<0.05)、血清TH2水平高于健康對照組(P<0.05)，無癥狀神經(jīng)梅毒組、輕癱性神經(jīng)梅毒組血清TH1、TH2水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，輕癱性神經(jīng)梅毒組腦脊液中TH1水平低于無癥狀神經(jīng)梅毒組、TH2水平高于無癥狀神經(jīng)梅毒組(P<0.05)，表明神經(jīng)梅毒患者免疫功能異常，且Th2細(xì)胞因子是顯性的，神經(jīng)性梅毒患者由于TH1/TH2免疫反應(yīng)失衡，抑制了梅毒螺旋體的清除，導(dǎo)致對梅毒螺旋體的長期耐受和梅毒螺旋體的潛伏期，相較于無癥狀神經(jīng)梅毒患者，輕癱性神經(jīng)梅毒患者免疫反應(yīng)失衡情況更為嚴(yán)重。

綜上所述，神經(jīng)梅毒患者血清及腦脊液中CXCL13、TH2水平升高，TH1水平降低，存在體液免疫反應(yīng)異常；相較于無癥狀神經(jīng)梅毒患者，輕癱性神經(jīng)梅毒患者腦脊液中這一趨勢更為明顯。