飼料中沙門氏菌的測定方法

岳良偉

摘要：飼料沙門氏菌的測定原理、測定方法，并用此法測定飼料原料、飼料產(chǎn)品中沙門氏菌，對測定結(jié)果進行分析。

關(guān)鍵詞：飼料 沙門氏菌

中圖分類號：S816

1.原理

目前飼料安全檢測中對飼料中有害微生物的控制主要是監(jiān)測飼料中沙門氏菌。樣品中可能存在少量的沙門氏菌但卻含有大量腸桿菌科的其他菌，因此選擇性增菌是必須的，而且為了激活受傷的沙門氏菌，常進行預(yù)增菌。增菌使沙門氏菌抗原濃度增加，更有利于檢驗結(jié)果的呈現(xiàn)。

沙門氏菌快速檢測試劑盒是專門用來檢測飼料中沙門氏菌抗原的。沙門氏菌特異性抗體是快速定性檢測的基礎(chǔ)，經(jīng)過增菌（選用營養(yǎng)肉湯進行預(yù)增菌，使“致傷”、冷凍的沙門氏菌復(fù)蘇）和選擇性增菌（使用選擇性培養(yǎng)基RV進行增菌，使沙門氏菌大量繁殖，同時抑制其它雜菌生長）的陽性樣品與染色劑標記的抗體結(jié)合形成抗原-抗體復(fù)合物，其沿著膜移動，被固定的抗體將使復(fù)合物著色，在樣品區(qū)（S區(qū)）形成一條色帶。內(nèi)置質(zhì)控色帶（C區(qū)）是為了確認實驗是否進行的正確。

2.檢驗方法

（1）儀器設(shè)備

小型粉碎機

電子天平（0.01g）

無菌瓶或無菌袋

沙門氏菌快速檢測試劑盒

沙門氏菌增菌培養(yǎng)基 （BP）

沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)基（RV）

細菌培養(yǎng)箱

超純水器

200?L的移液器

200?L的吸頭

高壓滅菌鍋

水浴鍋 36℃±1℃

量筒

（2）化學(xué)試劑與溶液配制

A、沙門氏菌增菌培養(yǎng)基（BP）的制備：

稱取20g緩沖蛋白胨水于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，定量分裝， 121℃高壓滅菌15分鐘。

B、沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)基（RV）的制備：

稱取20g亞硒酸鹽胱氨酸于1L滅菌水中，加熱煮沸至完全溶解，定量分裝。該培養(yǎng)基在配制當日使用。

（3）測定方法

A、采樣：采集具有代表性的飼料樣品，至少2kg，四分法縮分至250g，用小型粉碎機磨碎，過40目篩，裝入密閉容器中，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

B、樣品質(zhì)量與沙門氏菌增菌培養(yǎng)基（BP）體積按1：9比例混合，例如，10g飼料樣品加入90mL沙門氏菌增菌培養(yǎng)基。

C、混合物（樣品/BP）在36℃±1℃培養(yǎng)16～20小時。培養(yǎng)過程中無菌瓶或無菌袋的瓶口或袋口不要封死。

D、加入與BP體積相同并且預(yù)先加溫至36℃±1℃的沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)基（RV）至上述培養(yǎng)混合物中，在36℃±1℃培養(yǎng)16～24小時。培養(yǎng)過程中無菌瓶或無菌袋的瓶口或袋口不要封死。

E、將經(jīng)過增菌和選擇性增菌后的培養(yǎng)混合物冷卻至室溫，用移液器移取120?L（約自由滴落5滴）培養(yǎng)混合物到沙門氏菌快速檢測試劑盒的樣品孔中。

沙門氏菌快速檢測試劑盒

F、在10～15分鐘內(nèi)，不超過30分鐘看結(jié)果。低陽性結(jié)果要延遲到15分鐘，一些陽性結(jié)果30秒就可以得到，這主要取決于樣品中抗原的濃度。

（4）結(jié)果

陰性結(jié)果：只在C區(qū)（質(zhì)控區(qū)）出現(xiàn)色帶，為陰性結(jié)果。

陽性結(jié)果：出現(xiàn)兩條色帶為陽性結(jié)果，一條出現(xiàn)在S區(qū)（樣品區(qū)），一條出現(xiàn)在C區(qū)（質(zhì)控區(qū)），在S區(qū)出現(xiàn)任何色帶都認為是陽性結(jié)果，色帶之間可以有深淺的差異。

無效結(jié)果：如果C區(qū)（質(zhì)控區(qū)）沒有色帶出現(xiàn)，即使在S區(qū)（樣品區(qū)）有，結(jié)果也是無效的；若S區(qū)（樣品區(qū)）沒有色帶出現(xiàn)，重復(fù)往該試驗中加入50?L樣品混合物，并且等待4分鐘，若還沒有色帶出現(xiàn)，該試驗結(jié)果是無效的，需要更換檢測盒重新檢測；如果色帶出現(xiàn)在30分鐘之后，該試驗也將不能做出鑒別，視為無效試驗。

（5）注意事項

A、每一個檢測都有質(zhì)控步驟，即在每一個檢測盒上有一個C區(qū)（質(zhì)控區(qū)），只有正確的操作步驟和良好性能的檢測盒才能是C區(qū)（質(zhì)控區(qū)）出現(xiàn)色帶。

B、為保障實驗室人員安全，只有具備適當設(shè)備的實驗室才能承擔沙門氏菌檢驗，應(yīng)小心處理所有培養(yǎng)材料的廢棄物。endprint