基于TGF-β1/PI3K/Akt通路探討加味沙參麥冬湯對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠的影響

劉遠(yuǎn)婷, 李 慧, 丁甜甜, 趙 磊, 李國(guó)英

(新疆醫(yī)科大學(xué)第七附屬醫(yī)院, 1. 醫(yī)務(wù)科, 2. 中醫(yī)科, 4. 藥學(xué)部, 新疆 烏魯木齊, 830028;3. 新疆醫(yī)科大學(xué)校醫(yī)院, 新疆 烏魯木齊, 830011)

慢性萎縮性胃炎(CAG)是一種常見的消化系統(tǒng)疾病,病理特征是胃黏膜慢性炎癥、黏膜萎縮和腸化生改變[1]。CAG屬于癌前病變,如果治療不及時(shí)可演變?yōu)槲赴?。CAG病因復(fù)雜,目前認(rèn)為主要與幽門螺桿菌感染、攝入過多亞硝酸鹽類食物、飲酒、吸煙等有關(guān)。西醫(yī)主要以根治幽門螺桿菌、保護(hù)胃黏膜等對(duì)癥處理,但副作用大,效果差強(qiáng)人意。因此,尋找新的治療方法顯得尤為重要。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為CAG屬于“胃萎”“胃痞證”范疇,胃陰不足是主要病因,治療原則為滋陰健胃[2]。沙參麥冬湯出自《溫病條辨》,具有潤(rùn)肺止咳、滋陰養(yǎng)血、理氣化瘀的功效,不僅在治療小細(xì)胞肺癌、食管癌等腫瘤中效果明顯,在治療肺炎、胃炎方面也有一定的療效[3-5]。研究[6]發(fā)現(xiàn),沙參麥冬湯可促進(jìn)CAG大鼠胃黏膜胃腸激素的產(chǎn)生,逆轉(zhuǎn)胃黏膜萎縮,增加胃黏膜血流量。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)[7]已經(jīng)證實(shí)沙參麥冬湯可在一定程度上改善CAG,但具體機(jī)制尚不清楚。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)是一種多肽生長(zhǎng)因子,在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化,維持胃腸道環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用[8]。研究[9]表明, TGF-β1可阻止胃腺體的生長(zhǎng),促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化,最終導(dǎo)致CAG發(fā)生。此外,胃癌細(xì)胞高表達(dá)TGF-β1,TGF-β1表達(dá)水平與幽門螺桿菌誘導(dǎo)的慢性胃炎嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[10]。人磷脂酰肌醇三羥基激酶(PI3K)/Akt通路是TGF-β1的下游通路,在胃炎的發(fā)生發(fā)展過程中被激活。幽門螺桿菌可通過PI3K/Akt途徑負(fù)調(diào)控Sival蛋白破壞胃上皮細(xì)胞[11]。因此,本研究探討沙參麥冬湯對(duì)1-甲基-3-硝基-1-亞硝酸胍(MNNG)誘導(dǎo)的CAG大鼠的治療作用及其對(duì)TGF-β1/PI3K/Akt信號(hào)通路的影響,以期為沙參麥冬湯的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

60只8周齡的SPF雄性SD大鼠,體質(zhì)量150～170 g, 購(gòu)自上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物事業(yè)部,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物證書編號(hào)為20180006020302, 生產(chǎn)許可證號(hào): SCXK(京)2019-0010。飼養(yǎng)條件: 溫度為(25.0±0.5) ℃, 相對(duì)濕度為(55±5)%, 交替光照(12 h光照, 12 h暗照循環(huán)),安靜環(huán)境,自由獲取食物和水。動(dòng)物飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)SPF動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心[SYXK(閩)2019-0007], 本實(shí)驗(yàn)經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(FJTCMIACUCC2020075)。

1.2 藥物、試劑及儀器

加味沙參麥冬湯主要由北沙參12 g、玉竹9 g、麥門冬9 g、生扁豆9 g、天花粉9 g、桑葉6 g、生甘草3 g、白芍9 g和木瓜9 g組成。將藥材放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器有限公司)中,獲得了濃度為2 g/mL的藥物溶液,該溶液在90 ℃、0.07 MPa下濃縮,高壓滅菌后4 ℃冰箱儲(chǔ)存。試劑及儀器: 維酶素片(廣西大海陽(yáng)光藥業(yè)有限公司), MNNG(上海躍騰生物技術(shù)有限公司),蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(上海雙贏生物科技有限公司),大鼠白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒(上海紀(jì)寧生物科技有限公司),胃動(dòng)素(MTL)、胃泌素(Gas)、生長(zhǎng)抑素(SS)ELISA試劑盒(上海紀(jì)寧生物科技有限公司),兔抗大鼠TGF-β1、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt及β-actin抗體、山羊抗兔二抗(美國(guó)Affinity公司),增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)(美國(guó)Abcam公司),TGF-β1、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt及GAPDH引物(廣州銳博生物有限公司), RIPA裂解液(上海碧云天生物有限公司),蛋白酶、磷酸酶抑制劑(北京索萊寶生物有限公司),BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix試劑盒(上海碧云天生物有限公司)。Olympus光學(xué)顯微鏡(日本Olympus), ABI 7500 PCR儀(美國(guó)ABI公司),天能VE-586曝光機(jī)(上海天能公司)。

1.3 建模、分組及處理

60只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后,隨機(jī)選取12只作為空白組?？瞻捉M大鼠正常飲食、活動(dòng)。其余大鼠均構(gòu)建CAG模型,具體步驟如下: 大鼠自由食用MNNG(170 μg/mL, 溶液放置于棕色瓶子中),并結(jié)合不規(guī)律飲食(1 d飽食, 1 d禁食),并每隔1 d給予MNNG灌胃(1 mL/100 g), 持續(xù)10周。安樂死大鼠后對(duì)胃黏膜組織進(jìn)行病理學(xué)觀察,胃黏膜變薄,黏膜固有腺體和上皮細(xì)胞減少,出現(xiàn)點(diǎn)片狀紅斑及出血點(diǎn),腺體排列紊亂說明建模成功。建模成功后的大鼠隨機(jī)分為4組(12只/組): 模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組及高劑量組。空白組大鼠給予等體積(10 mL/kg)生理鹽水灌胃, 1次/d, 共12周。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠給予維酶素溶液(50 mg/kg)灌胃, 1次/d, 共12周。低劑量組及高劑量組大鼠分別給予加味沙參麥冬湯5、10 g/kg灌胃, 1次/d, 共12周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 HE染色觀察胃組織病理改變: 最后一次給藥結(jié)束,各組大鼠安樂死后剖腹取出胃組織,首先進(jìn)行大體觀察,然后剖開胃觀察胃皺褶、顏色。隨后將胃組織用福爾馬林浸泡48 h, 石蠟包埋,制備5 μm切片, 37 ℃烤箱過夜,依次通過二甲苯、梯度酒精、蘇木素、鹽酸酒精、氨水、伊紅,再通過梯度酒精、二甲苯,最后封片,顯微鏡下觀察胃組織病理改變。

1.4.2 ELISA檢測(cè)大鼠血清MTL、Gas及SS含量: 最后一次給藥結(jié)束,采用摘眼球采血方法收集各組大鼠外周血, 1 200轉(zhuǎn)/min離心10 min, 保留上清, -20 ℃保存,根據(jù)試劑盒說明書步驟檢測(cè)MTL、Gas及SS水平。

1.4.3 ELISA檢測(cè)大鼠胃組織IL-6、TNF-α水平: 最后一次給藥結(jié)束,各組大鼠安樂死后剖腹取出胃組織,用無菌剪刀剪碎組織,然后研磨成均漿,加入紅細(xì)胞裂解液, 12 000轉(zhuǎn)/min離心10 min, 保留上清, ELISA檢測(cè)胃組織IL-6、TNF-α含量,具體步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4.4 免疫組化檢測(cè)胃組織PCNA、Bcl-2表達(dá): 最后一次給藥結(jié)束,各組大鼠安樂死后剖腹取出胃組織,隨后將胃組織用福爾馬林浸泡48 h, 石蠟包埋,制備5 μm切片, 37 ℃烤箱過夜,依次通過二甲苯、梯度酒精,高壓進(jìn)行抗原修復(fù),山羊血清室溫封閉1 h, 加入PCNA(1∶200)、Bcl-2(1∶200)一抗4 ℃冰箱過夜,次日將暗盒復(fù)溫1 h, 磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次后加入二抗室溫1 h, PBS洗滌3次,然后依次通過蘇木素、鹽酸酒精、氨水、伊紅,再通過梯度酒精、二甲苯,最后中性樹膠封片,顯微鏡下觀察。使用半定量分級(jí)方法來量化PCNA、Bcl-2表達(dá)水平。陽(yáng)性細(xì)胞比例: 通過計(jì)數(shù)在高倍視野(400倍)下隨機(jī)觀察到的5個(gè)場(chǎng)中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)比值。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的百分比進(jìn)行評(píng)分: 0分為≤5%, >5%～25%為1分, >25%～50%為2分, >50%為3分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度評(píng)分: 0分為未染色, 1分為淡黃色, 2分為棕黃色, 3分為棕色。將陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分相乘得到最終分?jǐn)?shù): 0分為陰性(-), 1～2分為弱陽(yáng)性(+), 3～4分為中度陽(yáng)性(), 5～6分為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4.5 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測(cè)胃組織TGF-β1、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt表達(dá)水平: 用無菌剪刀剪碎組織,然后研磨成均漿,加入1 mL Trizol, 利用一步法提取總RNA, 檢測(cè)濃度,根據(jù)試劑盒說明書合成cDNA, 反應(yīng)條件為30 ℃ 10 min, 42 ℃ 30 min, 99 ℃ 5 min, 4 ℃ 5 min。按照熒光定量試劑盒說明進(jìn)行PCR, 循環(huán)條件: 95 ℃ 5 s, 60 ℃ 34 s, 共40個(gè)循環(huán),構(gòu)建溶解曲線,相對(duì)表達(dá)量用2-△△Ct法計(jì)算。內(nèi)參使用GAPDH。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.4.6 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)胃組織TGF-β1、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt表達(dá): 用無菌剪刀剪碎組織,然后研磨成均漿,加入RIPA細(xì)胞裂解溶液提取總蛋白, 100 ℃煮5 min, 測(cè)定蛋白濃度及純度,加入5×loading稀釋蛋白, -20 ℃保存。制備分離膠、濃縮膠,每孔加入30 μg樣品,先設(shè)置電壓70 V, 待蛋白maker分離后,調(diào)整電壓為120 V, 蛋白loading到達(dá)分離膠邊緣時(shí)停止電泳,小心切膠,放在濾紙、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上, 150 mA條件下轉(zhuǎn)膜1 h, 5%脫脂奶粉常溫封閉1 h, 加入TGF-β1(1∶1 000)、PI3K(1∶1 000)、Akt(1∶1 000)、p-PI3K(1∶1 000)、p-Akt(1∶1 000)孵育4 ℃過夜,次日洗膜3次后,加入二抗室溫孵育1 h。洗滌3次后,加入曝光液,上機(jī)ECL法發(fā)光, Image J分析條帶灰度值,以β-actin作為參照,分析目的蛋白表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠胃組織病理形態(tài)變化

大體觀察,空白組大鼠胃組織紅潤(rùn),可見褶皺。模型組大鼠胃組織蒼白,褶皺明顯減少。與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組和加味沙參麥冬湯高、低劑量組胃組織顏色變得紅潤(rùn),褶皺增多,且劑量越高,改變?cè)矫黠@,見圖1。

圖1 各組大鼠胃大體觀

病理組織學(xué)觀察顯示,空白組大鼠胃黏膜腺體相對(duì)較厚且數(shù)量眾多,上皮細(xì)胞排列整齊,無缺陷或剝落,腺體形狀規(guī)則,大小一致。模型組大鼠胃黏膜萎縮變薄,腺體減少,出現(xiàn)水腫、表面剝落,可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胃黏膜組織萎縮改善,上皮細(xì)胞排列欠規(guī)則,少量剝落,腺體的形狀基本規(guī)則,尺寸和形狀基本一致。與模型組比較,加味沙參麥冬湯高、低劑量組大鼠胃黏膜各層結(jié)構(gòu)基本恢復(fù),腺體排列較規(guī)則,腺體萎縮好轉(zhuǎn),且劑量越高,組織病理學(xué)恢復(fù)越佳,見圖2。

圖2 各組大鼠胃黏膜組織病理改變(HE染色)

2.2 各組大鼠血清MTL、Gas及SS水平

與空白組比較,模型組大鼠血清MTL水平升高, Gas、SS水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組及高劑量組大鼠血清MTL水平降低, Gas、SS水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與低劑量組比較,高劑量組大鼠血清MTL水平降低, Gas、SS水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01), 見表2。

表2 各組大鼠血清MTL、Gas及SS水平比較 pg/mL

2.3 各組大鼠胃組織IL-6、TNF-α水平比較

表3 各組大鼠胃組織IL-6、TNF-α水平比較 pg/mL

與空白組比較,模型組大鼠胃組織IL-6、TNF-α水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組及高劑量組大鼠胃組織IL-6、TNF-α水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與低劑量組比較,高劑量組大鼠胃組織IL-6、TNF-α水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01), 見表3。

2.4 各組大鼠胃組織PCNA、Bcl-2蛋白表達(dá)比較

與空白組比較,模型組大鼠胃組織Bcl-2蛋白表達(dá)升高,PCNA蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 與模型組比較,陽(yáng)性藥物組、低劑量組及高劑量組大鼠胃組織Bcl-2蛋白表達(dá)降低,PCNA蛋白表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 與低劑量組比較,高劑量組大鼠胃組織Bcl-2蛋白表達(dá)降低, PCNA蛋白表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見圖3、表4。

圖3 免疫組化檢測(cè)胃組織PCNA、Bcl-2蛋白表達(dá)(放大20倍)

表4 各組大鼠胃組織PCNA、Bcl-2蛋白表達(dá)比較

2.5 各組大鼠胃黏膜組織TGF-β1/PI3K/Akt通路mRNA表達(dá)水平比較

表5 各組大鼠胃黏膜組織TGF-β1/PI3K/Akt通路蛋白表達(dá)水平比較

與空白組比較,模型組大鼠胃組織TGF-β1、PI3K、Akt、p-PI3K、p-AktmRNA水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組及高劑量組大鼠胃組織TGF-β1、PI3K、Akt、p-PI3K、p-AktmRNA水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與低劑量組比較,高劑量組大鼠胃組織TGF-β1、PI3K、Akt、p-PI3K、p-AktmRNA水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01), 見圖4。

與空白組比較, **P<0.01; 與模型組比較, ##P<0.01; 與低劑量組比較, △△P<0.01。圖4 各組大鼠胃黏膜組織TGF-β1/PI3K/Akt通路mRNA表達(dá)水平比較

2.6 各組大鼠胃黏膜組織TGF-β1/PI3K/Akt通路蛋白表達(dá)水平比較

與空白組比較,模型組大鼠胃組織TGF-β1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組及高劑量組大鼠胃組織TGF-β1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); 與低劑量組比較,高劑量組大鼠胃組織TGF-β1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見圖5、表5。

圖5 Western blot檢測(cè)胃組織TGF-β1/PI3K/Akt通路蛋白表達(dá)

3 討 論

CAG是一種常見的消化道疾病,發(fā)病隱匿,病程長(zhǎng),病情容易出現(xiàn)反復(fù)。CAG是正常胃黏膜到胃癌的過渡性病理階段,如果治療不及時(shí)、不徹底,容易導(dǎo)致胃癌發(fā)生。目前西醫(yī)的治療原則主要為對(duì)癥處理、幽門螺桿菌根治,但臨床療效并不滿意。因此,尋找新的治療方法迫在眉睫。

中醫(yī)認(rèn)為CAG常為七情內(nèi)傷、飲食不節(jié)造成陰津枯竭、氣血運(yùn)行受阻,熱邪內(nèi)結(jié)、濕毒瘀滯導(dǎo)致,故治療當(dāng)以清養(yǎng)肺胃、解毒散結(jié)為主。加味沙參麥冬湯主要由北沙參12 g、玉竹9 g、麥門冬9 g、生扁豆9 g、天花粉9 g、桑葉6 g、生甘草3 g、白芍9 g及木瓜9 g組成。方中沙參甘潤(rùn)而偏苦,歸肺胃兩經(jīng),能補(bǔ)陰清熱; 麥冬可養(yǎng)陰生津,二者共為君藥,可起到生津解毒散結(jié)之效; 玉竹、天花粉養(yǎng)胃陰而生津,胃陰得復(fù),則陰精可經(jīng)脾氣正常輸布; 桑葉能散熱清燥,生扁豆甘能補(bǔ)脾,香能舒脾,溫能燥脾而達(dá)健脾化濕之效,配伍甘草益氣健脾,陽(yáng)中求陰,促進(jìn)陰液生成,健脾益氣。再加芍藥補(bǔ)血污肝益脾,木瓜性溫、味酸,入肝脾,健脾消食而通絡(luò),諸藥合用共奏滋陰護(hù)胃、清熱解毒、化瘀通絡(luò)[12-14]。沙參麥冬湯已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床,并在腫瘤、呼吸系統(tǒng)疾病及消化系統(tǒng)疾病中發(fā)揮一定的療效[15-17]。研究[18]表明,沙參麥冬湯可改善CAG患者的臨床癥狀,不良反應(yīng)少。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),加味沙參麥冬湯可以顯著保護(hù)胃黏膜結(jié)構(gòu),降低組織IL-6、TNF-α水平,且這種保護(hù)作用呈劑量依賴性,提示加味沙參麥冬湯可能通過抑制炎癥反應(yīng)修復(fù)損傷的胃黏膜。GAS、SS和MTL是胃腸道分泌的常見激素,在維持胃黏膜完整性、胃酸分泌及胃腸道運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮重要作用[19]。本研究結(jié)果顯示, CAG大鼠血清GAS、SS含量減少, MTL含量增加,主要原因?yàn)槲葛つのs,腺體數(shù)量銳減,經(jīng)過加味沙參麥冬湯治療后GAS、SS含量顯著增加, MTL含量降低,間接證明加味沙參麥冬湯保護(hù)胃黏膜,促進(jìn)黏膜恢復(fù)。

目前,加味沙參麥冬湯治療CAG的機(jī)制尚不清楚。TGF-β1與胃腸道炎癥、癌癥有關(guān)的信號(hào)通路,可促進(jìn)細(xì)胞炎癥反應(yīng)及腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)[20]。目前認(rèn)為, TGF-β1可抑制胃腺體的良性增殖,破壞胃腺體組織,可以將纖維母細(xì)胞激活為平滑肌細(xì)胞,因此TGF-β1在CAG發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。研究[21]發(fā)現(xiàn), CAG大鼠胃組織TGF-β1高表達(dá),上調(diào)TGF-β1可促進(jìn)CAG向胃癌的轉(zhuǎn)化。此外,幽門螺桿菌感染的胃黏膜組織高表達(dá)TGF-β1[22]。以上報(bào)道提示TGF-β1通路與CAG發(fā)生發(fā)展過程中起到至關(guān)重要的作用。PI3K/Akt信號(hào)通路是TGF-β1下游最重要的通路之一,參與細(xì)胞增殖、凋亡過程,同樣在CAG發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要角色。研究[23]表明,幽門螺桿菌可通過PI3K/Akt通路抑制胃黏膜上皮細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。研究[24]發(fā)現(xiàn), CAG胃黏膜組織PI3K/Akt通路蛋白表達(dá)水平高于非萎縮性胃炎,胃癌組織PI3K/Akt通路蛋白表達(dá)水平高于CAG, 提示PI3K/Akt通路在胃炎向胃癌轉(zhuǎn)變過程中扮演著重要角色。本研究結(jié)果顯示,模型組TGF-β1、PI3K/Akt通路蛋白水平、蛋白磷酸化水平均顯著升高,加味沙參麥冬湯治療后這些蛋白水平則顯著下降,其中高劑量組下降最顯著,提示加味沙參麥冬湯可能通過TGF-β1/PI3K/Akt信號(hào)通路發(fā)揮保護(hù)胃黏膜作用。

CAG的發(fā)生發(fā)展機(jī)制復(fù)雜,胃黏膜上皮細(xì)胞的增殖、凋亡在其中扮演著重要角色。研究表明,促增殖、抗凋亡是中藥治療CAG的主要途徑。TGF-β1/PI3K/Akt通路激活后可干擾下游增殖、凋亡相關(guān)基因的表達(dá),其中Bcl-2是一種抑制細(xì)胞凋亡的基因,其過表達(dá)可抑制細(xì)胞凋亡,提示細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化[25]。研究[26]表明, CAG胃黏膜組織高表達(dá)Bcl-2, 經(jīng)中藥復(fù)方治療后Bcl-2水平可顯著降低。PCNA是常用的細(xì)胞增殖指標(biāo),其變化與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制一致。有文獻(xiàn)[27]報(bào)道, CAG胃黏膜組織中PCNA低表達(dá),與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。本研究結(jié)果顯示,加味沙參麥冬湯治療可提高胃黏膜組織中PCNA表達(dá),降低Bcl-2表達(dá),說明加味沙參麥冬湯可能通過調(diào)控胃黏膜上皮細(xì)胞增殖-凋亡軸發(fā)揮治療作用。

綜上所述,加味沙參麥冬湯可通過抑制TGF-β1/PI3K/Akt通路,上調(diào)PCNA基因的表達(dá),下調(diào)Bcl-2基因的表達(dá),抑制炎癥因子的產(chǎn)生,最終發(fā)揮治療CAG的作用。