遼寧產(chǎn)萊菔子化學(xué)成分研究*

馬春艷，Islam A Elsehemy，竇德強(qiáng)

(1 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600；2 天然和微生物產(chǎn)物化學(xué)部，國家研究中心，開羅 埃及)

萊菔子 (Raphanisemen)為十字花科植物蘿卜 (RaphanussativusL.)的干燥成熟種子。萊菔子性平，味辛甘，歸肺、脾 、胃經(jīng)，具有經(jīng)消食除脹，降氣化痰的功效[1]。現(xiàn)代藥學(xué)研究表明，萊菔子含有多種化學(xué)成分，其主要成分包括硫苷類、水溶性生物堿類、揮發(fā)油及脂肪酸類、黃酮及多糖類等[2]，其中硫苷類是其主要的特征性化學(xué)成分。近幾年，關(guān)于萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽的降壓作用和萊菔素的抗癌及抑菌[3-5]作用成為研究較多。但其他與藥效相關(guān)的化學(xué)成分尚不明確。萊菔子作為藥食同源類中藥，在我國使用歷史悠久，產(chǎn)地廣泛。本實(shí)驗(yàn)以遼寧產(chǎn)未經(jīng)炮制的干燥生品萊菔子為研究對(duì)象，綜合運(yùn)用多種分離分析技術(shù)和方法，從萊菔子的正丁醇部位中分離鑒定了8種化合物。本研究為了解遼寧產(chǎn)萊菔子的主要化學(xué)成分及全面認(rèn)識(shí)生品萊菔子的物質(zhì)基礎(chǔ)提供了理論依據(jù)。

1 儀器與材料

HITACHI 7100制備型高效液相色譜儀，日本；Agilent 1260高效液相色譜儀，美國安捷倫Agilent科技公司；色譜柱 (YMC-PackODSA，5 μm，10 mm×250 mm，日本)；柱色譜及 TCL所用硅膠，青島海洋化工廠；FA-1004 電子天平，上海精科天平廠；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，予華儀器有限責(zé)任有限公司；DZF-6050 真空干燥箱，上海一恒科技有限公司。

萊菔子購于遼寧本溪，經(jīng)康廷國教授鑒定為十字花科植物萊菔 (RaphanussativusL.)的干燥成熟種子。樣品保存于實(shí)驗(yàn)室。液相用甲醇 (色譜純級(jí)別)，天津市大茂化學(xué)試劑廠；其它試劑為分析純級(jí)別，水為蒸餾水。

2 提取與分離

取萊菔子8.8 kg，以70%乙醇提取2次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇至無醇味，浸膏加適量水懸浮，依次用石油醚、二氯甲烷、正丁醇、水萃取，萃取液濃縮，回收溶劑后得石油醚部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位和水部位。正丁醇部位經(jīng)硅膠柱色譜反復(fù)層析分離、羥丙基葡聚糖凝膠純化及半制備HPLC純化，最終得化合物Ⅰ(25 mg)，Ⅱ(40 mg)，Ⅲ(15 mg)，Ⅳ(15 mg)，Ⅴ(10 mg)，Ⅵ (11 mg)，Ⅶ (40 mg)，Ⅷ(6 g)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ：白色粉末，易溶于水，不溶于氯仿、乙酸乙酯。Molish反應(yīng)陽性。分子式C12H12O11，不飽和度為9。13C-NMR (150 MHz，C5D5N)。105.84、93.49為糖端基質(zhì)子信號(hào)：93.49、75.06、74.94、73.40、71.46、62.34為一組α-D-吡喃葡萄糖的碳信號(hào)；105.84、84.37、79.78、75.46、64.77、62.84為一組果糖碳信號(hào)。105.84(C-1), 64.77(C-2), 79.78(C-3), 75.06(C-4), 84.37(C-5), 62.84(C-6), 93.49(C-1′), 73.40(C-2′), 75.06(C-3′), 71.76(C-4′), 74.94(C-5′), 62.34(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅰ為蔗糖。

化合物Ⅱ：白色無定形粉末。分子式為C35H60O6。13C-NMR (150 MHz, C5D5N)δ：37.4(C-1), 30.2(C-2), 78.0(C-3), 39.3(C-4), 104.8(C-5), 121.9(C-6), 32.1(C-7), 32.0(C-8), 50.3(C-9), 36.3(C-10), 21.2(C-11), 40.0(C-12), 42.4(C-13), 56.7(C-14), 24.4(C-15), 28.5(C-16), 56.2(C-17), 12.1(C-18), 19.1(C-19), 36.8(C-20), 18.9(C-21), 34.1(C-22), 26.3(C-23), 46.0(C-24), 29.4(C-25), 19.3(C-26), 19.9(C-27), 23.3(C-28), 11.9(C-29)。Glu：102.5(C-1′), 75.5(C-2′), 78.5(C-3′), 71.6(C-4′), 78.4(C-5′), 62.8(C-6′)。對(duì)照文獻(xiàn)[7]報(bào)道的碳譜數(shù)據(jù), 確定化合物Ⅱ?yàn)楹}卜苷。

化合物Ⅲ：白色粉末。1H-NMR (D2O, 600 MHz), δ8.16 (1H, S, H-2), 8.29 (1H, S, H-8), 3.84～6.03為糖上的氫；13C-NMR(D2O, 150 MHz), δ158.40(C-6), 155.34(C-8), 151.22(C-5), 143.40(C-2), 121.89(C-4), 91.20(C-1′), 88.65(C-4′), 76.56(C-2′), 73.49(C-3′), 64.37(C-5′)，經(jīng)與文獻(xiàn)[8]數(shù)據(jù)對(duì)照，確定為腺苷。

化合物Ⅳ：無色針狀結(jié)晶，溴酚藍(lán)顯黃色，顯示有羥基存在。1H-NMR (400 MHz, C5D5N), δH：8.12(1H, d,J=16 Hz), 6.91(1H, d,J=16 Hz), 7.12(2H, S), 3.82(6H, S)是為芥子酸的特征符號(hào)。13C-NMR(150 MHz, C5D5N)。δc：169.6(C-9), 149.3(2C, C-3, 5), 145.3(C-7), 140.3(C-4), 125.5(C-1), 117.4(C-8), 106.7(2C, C-2, 6), 56.3(2C, 3, 5-ome)，經(jīng)與文獻(xiàn)[9]數(shù)據(jù)對(duì)照，確定為芥子酸。

化合物Ⅴ：白色粉末。13C-NMR (100 MH，CD3OD): 168.96(C-1), 115.70(C-2), 147.36(C-3), 126.37(C-1′), 107.02(2C, 2′, 6′), 149.58(2C, 3′, 5′), 140.03(C-4′), 92.41(C-1″), 72.63(C-2″), 79.6(C-3″), 71.46(C-4″), 79.34(C-5″), 64.80(C-6″), 56.88(C-OMe), 24.95(C-CH3)。經(jīng)與文獻(xiàn)[10]數(shù)據(jù)對(duì)照，確定化合物為萊菔硫苷。

化合物Ⅵ：白色晶體。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)。δ173.49(C), δ163.19(C), δ136.55(CH), 131.53(CH), 120.03(CH), 118.12(CH), 113.93(C)。經(jīng)與文獻(xiàn)[11]數(shù)據(jù)對(duì)照，確定為鄰羥基苯甲酸。

化合物Ⅶ：無色結(jié)晶。13C-NMR(150 MHz，C5D5N)。δc：26.32(C-5), 39.11(C-8), 39.13(C-6), 42.83(C-4), 58.59(C-7), 192.78(C-2)。經(jīng)與文獻(xiàn)[12]數(shù)據(jù)對(duì)照，確定為S-6-(methysul-finyl)-3-thiazinan-2-thione。

化合物Ⅷ：黃色粉末FeCl3顯墨綠色，示有酚羥基存在。分子式為C34H42O19。13C-NMR(150 MHz, CD3OD)：92.65(C-1), 73.11(C-2), 75.09(C-3), 71.96(C-4), 72.49(C-5), 65.71(C-6), 104.84(C-7), 79.29(C-8), 74.18(C-9), 84.32(C-10), 63.81(C-11), 65.71(C-12), 169.08(1′), 119.81(2′), 147.27(3′), 126.59(4′), 106.89(2C, 5′, 9′), 149.38(2C, 6′, 8′), 139.61(7′), 168.22(1″), 115.45(2″), 147.90(3″), 126.56(4″), 107.06(2C, 5″, 9″), 149.37(2C, 6″, 8″), 139.50(7″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故鑒定化合物Ⅲ為β-D-(3-芥子?；?果糖苷-α-D-(6-芥子?；?葡萄糖苷。

4 討 論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)生品萊菔子進(jìn)行了化學(xué)成分研究，共分離得到8個(gè)單體化合物其中1個(gè)為首次在該植物中得到。從分離化合物類型來看，以含硫和芥子?；惢衔锞佣唷Ｆ渲谢衔?Ⅷ)β-D-(3-芥子?；?果糖基-α-D-(6-芥子酰基)葡萄糖苷又稱3,6′-二芥子?；崽牵值玫牧枯^大。有研究表明3,6′-二芥子酰基蔗糖有良好的抗抑郁和神經(jīng)保護(hù)作用，其在多個(gè)經(jīng)典的抗抑郁模型(小鼠強(qiáng)迫游泳、小鼠懸尾、大鼠強(qiáng)迫游泳、大鼠不可預(yù)知慢性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)模型)中以及體外模擬的抑郁模型(皮質(zhì)酮損傷SH-SY5Y和C6神經(jīng)細(xì)胞)中，表現(xiàn)出了有明顯的抗抑郁樣作用[13]。其機(jī)制是激活CREB磷 酸化的上游通路(絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路和鈣調(diào)蛋白激酶(CaMK)通路)上的關(guān)鍵靶點(diǎn)CaMK和ERK，促進(jìn)CREB磷酸化過程；進(jìn)一步通過激活磷酸化CREB，與基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)的特殊組件結(jié)合刺激mRNA的轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)下游靶基因bax、bc1-2并調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激等細(xì)胞因子的水平，通過這些細(xì)胞因子進(jìn)一步影響神經(jīng)可塑性、神經(jīng)分化、神經(jīng)營養(yǎng)及神經(jīng)聯(lián)系及信號(hào)整合發(fā)揮抗抑郁作用[14]。而鄰羥基苯甲酸的分得，也提示萊菔子可能有一定的抗炎作用，有待之后進(jìn)一步研究。萊菔子化學(xué)成分復(fù)雜，藥理作用廣泛，但近些年關(guān)于萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽和萊菔素的研究較多，對(duì)于萊菔子黃酮、多糖等化合物的研究僅局限于提取方法研究及含量測定，現(xiàn)行中國藥典對(duì)萊菔子質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)單一，僅涉及芥子堿硫氰酸鹽一種指標(biāo)，較為單一。萊菔子其他一些藥理作用的活性成分及作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究和探索。在今后的研究中，應(yīng)進(jìn)一步發(fā)掘萊菔子的食療價(jià)值，選育毒性小的品種，為大力開發(fā)萊菔子資源奠定基礎(chǔ)；發(fā)現(xiàn)萊菔子中更多新的化學(xué)成分，更加客觀有效地對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制；對(duì)萊菔子有效成分的藥理作用進(jìn)一步深入研究，擴(kuò)大萊菔子臨床應(yīng)用范圍，提高其利用價(jià)值。

5 結(jié) 論

采用硅膠柱色譜，ODS與凝膠柱色譜以及半制備色譜對(duì)萊菔子的正丁醇部位進(jìn)行分離和純化得到 8 個(gè)化合物分，通過譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定為蔗糖，胡蘿卜苷，腺苷，芥子酸，萊菔硫苷，鄰羥基苯甲酸，S-6-(methysul-finyl)-3-thiazinan-2-thione，β-D-(3-芥子酰基)果糖基-α-D-(6-芥子?；?葡萄糖苷?；衔铫鰹槭状螐娜R菔子中分離得到，為進(jìn)一步開發(fā)利用萊菔子藥材奠定了基礎(chǔ)。