含溶菌酶的抗敏漱口水泡騰片的研發(fā)及臨床效果評(píng)價(jià)

耿帥峰，褚夫江，徐天生

（1.廣州康云生物科技有限公司，廣東廣州 510700；2.廣東藥科大學(xué)，廣東廣州 510006）

漱口水多數(shù)是大瓶裝液體，對(duì)出差旅行的消費(fèi)者而言，攜帶非常不方便。固體泡騰片漱口水與液體漱口水相比，有著突出的優(yōu)勢(shì)，如服用方便、體積小、便于運(yùn)輸以及藥效保存好等[1]。一般漱口水口腔護(hù)理產(chǎn)品含有的抑菌成分多以中草藥和化學(xué)類抑菌劑為主，經(jīng)常使用這類產(chǎn)品，容易造成口腔細(xì)菌生態(tài)失調(diào)，或使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，不僅不能達(dá)到預(yù)防口腔疾病的效果，反而易引發(fā)其他多種口腔疾病。

本研究所研發(fā)的漱口水泡騰片中功效成分為溶菌酶，具有抗細(xì)菌、真菌及腫瘤等多種藥理作用，生物相容性好，對(duì)組織無刺激性、無毒性，已被制作為一種性質(zhì)優(yōu)良、殺傷病原微生物而不破壞機(jī)體的酶制劑[2]。作為機(jī)體非特異免疫因子之一，溶菌酶參與口腔環(huán)境平衡調(diào)節(jié)過程，與齲病、口腔黏膜病及牙周病的發(fā)生、發(fā)展有一定關(guān)系[3]。有研究顯示，向口腔保健產(chǎn)品中添加溶菌酶等抗菌劑比添加人工合成的抗菌劑對(duì)預(yù)防齲齒更有效[4]。同時(shí)，溶菌酶等小分子物質(zhì)處于口腔疾病防御的第一線，參與宿主對(duì)細(xì)菌的非免疫防御[5]。本研究漱口水可隨時(shí)攜帶、隨時(shí)使用，將增大消費(fèi)者使用漱口水的習(xí)慣，更好地呵護(hù)牙齒。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

材料：溶菌酶（98.0%，市售），氯化鍶（99.0%，廣州納英化工有限公司），硝酸鉀（99.0%，西安拉維亞生物科技有限公司），碳酸氫鈉（99.0%，山東谷碩生物科技有限公司），檸檬酸（98%，江蘇科倫多食品配料有限公司），麥芽糖精（98%，市售），甜菊糖苷（98%，市售），PEG6000（65%,市售），羥乙基纖維素（98%，市售），薄荷香精粉（市售）。

試劑：乙醇（35.0%，市售），溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品(市售試劑盒中含有）。

1.2 含溶菌酶漱口水泡騰片的組分

含溶菌酶的漱口水泡騰片是由泡騰劑、填充劑、甜味劑、粘結(jié)劑、芳香劑和功效成分組成，具體成分及比例如表1所示。

表1 含溶菌酶漱口水泡騰片的成分組成

1.3 含溶菌酶漱口水泡騰片的制備

將原料除溶菌酶外分別進(jìn)行研磨，過160～180目篩，備用。將碳酸氫鈉、50%羥乙基纖維素、30%聚乙二醇加入適量乙醇溶液中，制粒，烘干后粉碎成粉末，過160～180目篩，制得粉末A。將溶菌酶、麥芽糖精、薄荷香精粉、甜菊糖苷、聚乙二醇各40%均勻混合，加入適量乙醇溶液中，制粒，烘干后粉碎成粉末，過160～80目篩，制得粉末B。將檸檬酸、羥乙基纖維素各50%、聚乙二醇30%加入適量乙醇溶液，制粒，烘干粉碎成粉末，過160～180目篩，制得粉末C。將上述粉末A、B、C混合均勻后進(jìn)行壓片，即得。

1.4 泡騰片漱口水護(hù)理液的制備

各取數(shù)片上述制備的泡騰片稱重，分別加入100 mL常溫水中，制備漱口水護(hù)理液。

2 質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)

泡騰片崩解時(shí)間可以參考中國(guó)藥典對(duì)維生素C泡騰片崩解時(shí)間的要求；泡騰片漱口水護(hù)理液的基本參數(shù)應(yīng)符合GB/T2945-2012《口腔護(hù)理液》。對(duì)本研究制備的泡騰片和泡騰片漱口水護(hù)理液進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表2和表3所示。檢測(cè)結(jié)果表明所制備的泡騰片符合要求。

表2 泡騰片檢測(cè)結(jié)果

3 臨床效果評(píng)價(jià)

3.1 病例選擇

本研究采用隨機(jī)、平行對(duì)照、雙盲的臨床研究方法，篩選74例符合納入標(biāo)準(zhǔn)、不屬排除標(biāo)準(zhǔn)的受試者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）同意參加本臨床試驗(yàn)并簽署書面知情同意書者；（2）年齡在18～65周歲（含18周歲和65周歲），性別不限，對(duì)市售口腔產(chǎn)品或化妝品無過敏史；（3）視診或探診發(fā)生牙本質(zhì)敏感的部位為頰面牙頸部，病人主觀牙本質(zhì)敏感癥狀VAS值在1～9；空氣刺激時(shí)，至少有 2顆牙 VAS值在3～8；（4）參加研究前一個(gè)月沒有使用下列藥物：抗驚厥藥、抗組織胺藥、抗憂郁藥物、鎮(zhèn)靜劑、安定劑，一周內(nèi)未服用過消炎藥、日常止痛藥；（5）沒有使用其它抗牙本質(zhì)敏感牙膏和漱口水；（6）沒有同時(shí)參加其他類似試驗(yàn)研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）已知或懷疑對(duì)試驗(yàn)藥及其輔料有過敏史或嚴(yán)重不良反應(yīng)，或過敏體質(zhì)者；（2）受試者有嚴(yán)重的口腔疾病、慢性病；（3）牙周病進(jìn)展期或者過去一年內(nèi)接受過牙周治療（包括牙周手術(shù)）；（4）敏感牙齒的松動(dòng)度大于1；（5）牙齒有大面積充填體或冠，疑有牙髓炎、齲齒、釉質(zhì)隱裂，可摘局部義齒的基牙；（6）妊娠或準(zhǔn)備妊娠婦女，哺乳期婦女。

表3 泡騰片漱口水護(hù)理液檢測(cè)結(jié)果

3.2 試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采用隨機(jī)雙盲平行對(duì)照設(shè)計(jì)方法，受試者在基線、使用4周、使用8周回訪進(jìn)行口腔情況評(píng)估。

3.2.1 試驗(yàn)分組

篩選74例符合要求的受試者，試驗(yàn)組和對(duì)照組各37例。

具體而言,對(duì)于每個(gè)數(shù)據(jù)包,先依據(jù)空洞區(qū)域定義“雷區(qū)”FAR(Forbidden Area),進(jìn)而使得數(shù)據(jù)包能避開FAR,進(jìn)而抑制空洞路由。而FAR的尺寸和位置隨數(shù)據(jù)包時(shí)延要求不同而變化,從而平衡網(wǎng)絡(luò)流量。為了保證數(shù)據(jù)包能及時(shí)到達(dá)目的節(jié)點(diǎn),DG-SHGR路由利用端到端時(shí)延要求調(diào)整FAR尺寸。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,提出的DG-SHGR路由有效地提高了數(shù)據(jù)包傳遞率,并平衡網(wǎng)絡(luò)負(fù)載。

3.2.2 盲法

采用同樣白色塑料瓶進(jìn)行成裝。兩組泡騰片在外觀上一致，用不同的編號(hào)區(qū)分。泡騰片編號(hào)由Microsoft Excel軟件“=Rand（）”函數(shù)方法得到的隨機(jī)數(shù)字產(chǎn)生。

3.2.3 泡騰片

試驗(yàn)組泡騰片為含溶菌酶的抗敏漱口水泡騰片；對(duì)照組為不含生物溶菌酶及抗敏成分的普通漱口水泡騰片。

3.2.4 使用方法

實(shí)驗(yàn)期間要求受試者只用提供的漱口水泡騰片，實(shí)驗(yàn)組以自行制備含溶菌酶抗敏泡騰片，對(duì)照組以市面購(gòu)買普通泡騰片，且實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的每片泡騰片質(zhì)量相同。給受試者分發(fā)2種泡騰片中的一種；使用時(shí)，受試者將泡騰片放置于50 mL水中，待泡騰片完全崩解，含漱 30 s，每天 2次，每次 20 mL。受試者均統(tǒng)一分發(fā)給同樣的普通牙膏和成人軟毛牙刷，要求受試者使用統(tǒng)一發(fā)放的牙膏和牙刷，每天刷牙2次（早晚各1次），每次刷牙1 min[6]。臨床檢查于基線、第4周及第8周進(jìn)行，并由同一名檢查者完成。

3.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)和統(tǒng)計(jì)方法

3.3.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)

使用牙科綜合治療臺(tái)的氣槍在離敏感牙齒1 cm距離噴吹 1 s，空壓機(jī)壓力為 60 kPa，吹氣溫度為19～21 ℃，吹氣時(shí)將手指放在鄰牙以避免鄰牙癥狀影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。每顆牙每次檢查時(shí)只接受一次空氣刺激檢查。采用數(shù)字化疼痛評(píng)判法（Visual analogue scale，VAS）評(píng)分，受試者對(duì)疼痛的主觀評(píng)價(jià)記錄在一條10 cm長(zhǎng)的直線上，線的起始端為0表示“無疼痛或沒有不舒適”，線的末端為10表示“極度疼痛或不適”，當(dāng)空氣檢測(cè)結(jié)束后，受試者根據(jù)VAS尺對(duì)疼痛值劃線，代表測(cè)試牙本質(zhì)過敏疼痛程度。整個(gè)研究都采用同樣的評(píng)判方案測(cè)試牙本質(zhì)過敏狀況?；€時(shí)對(duì)受試者的全口牙進(jìn)行檢查，篩選出疼痛值3～8的牙。

3.3.2 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析。所有統(tǒng)計(jì)推斷均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為0.05，參數(shù)的置信區(qū)間估計(jì)采用95%置信區(qū)間。

3.4 臨床試驗(yàn)結(jié)果

74例受試者參與試驗(yàn)，其中3人失訪，2人不符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)，中途退出試驗(yàn)。受試者中途退出試驗(yàn)的原因與本研究無關(guān)。完成試驗(yàn)的69例受試者中有2例與方案偏離，這2例參與人口學(xué)資料分析、安全性分析，不參與療效指標(biāo)分析，其中試驗(yàn)組1例，對(duì)照組1例。

3.4.1 兩組基線比較

74例受試者，5例中途退出，69例完成試驗(yàn)，其中試驗(yàn)組35例，對(duì)照組34例。所有參與的受試者均未發(fā)現(xiàn)由使用漱口水泡騰片引起不良反應(yīng)或嚴(yán)重事件。研究人群基本信息如表3，基線期療效指標(biāo)如表4。

表3 研究人群的基線檢查情況（n=72）

表4 試驗(yàn)組和對(duì)照組療效指標(biāo)基線期分布情況（n=37）

基線期試驗(yàn)組與對(duì)照組相比較，牙齒敏感疼痛VAS值不具有顯著性差異（P＞0.05）。

3.4.2 依從性

74例受試者參與試驗(yàn)，有5例中途退出試驗(yàn)，其中試驗(yàn)組2例，對(duì)照組3例；有2例未按要求使用泡騰片，其中對(duì)照組1例，試驗(yàn)組1例。對(duì)照組依從性為97.14%。，試驗(yàn)組依從性為97.06%。

3.4.3 臨床安全性分析

所有受試者試驗(yàn)過程中未出現(xiàn)由該產(chǎn)品使用引起的不良反應(yīng)或不良事件。

3.4.4 臨床（VAS值）結(jié)果

臨床（VAS值）結(jié)果如表5所示，試驗(yàn)組牙齒VAS值明顯低于對(duì)照組；4周及8周后試驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組VAS值分別減少了25.61%和62.27%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

4 結(jié)論

含溶菌酶的漱口水泡騰片，外觀光潔，崩解較快，理化指標(biāo)穩(wěn)定，衛(wèi)生指標(biāo)符合要求。臨床試驗(yàn)顯示：基線檢查中，試驗(yàn)組和對(duì)照組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；試驗(yàn)組牙齒VAS值明顯低于對(duì)照組；4周及8周后試驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組VAS值分別減少了25.61%和62.27%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。因此，與對(duì)照組泡騰片相比，實(shí)驗(yàn)組含溶菌酶的漱口水泡騰片具有降低牙本質(zhì)敏感疼痛值，緩解或減輕牙本質(zhì)敏感癥狀的臨床功效。該泡騰片功效成分活性較高，不含酒精，可隨時(shí)攜帶，隨時(shí)使用，值得推廣使用。

表5 基線、4周、8周牙齒VAS值均數(shù)比較